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1.
参照NCBI公布的施马伦贝格病毒(SBV)的N基因开放阅读框序列,设计了一对含特异性酶切位点的引物,扩增SBV N基因,将其克隆于昆虫杆状病毒表达载体p Fast Bac HTB,然后以该重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-SBV-N,将该重组穿梭质粒在脂质体介导下转染Sf 9昆虫细胞,得到表达SBV重组N蛋白的杆状病毒。通过SDS-PAGE和Western blot对重组N蛋白进行鉴定,表明该蛋白得到表达。本研究为以SBV核蛋白为基础的相关检测方法的建立提供了物质基础。  相似文献   
2.
根据GenBank上已发表的猴D型逆转录病毒SRV-2株基因组序列设计合成了一对特异性引物,通过PCR扩增出P27基因。将扩增出的片段克隆到原核表达载体pBAD/Thio-TOPO上,通过序列分析证实该片段与猴D型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致。将阳性重组质粒转化至大肠杆菌T0P010中,用阿拉伯糖诱导表达,表达的融合蛋白进行SDS-PAGE和WesternBlot分析,并用proBondTM柱在天然状态下进行纯化。结果表明,表达的融合蛋白分子量约为50KDa,其大小与预期相符。  相似文献   
3.
我所于1989年11月份对出口西德的猕猴,按合同要求进行了猴B病毒相关抗体的检测。共检猕猴27只,该批猕猴的年龄均为8岁以上。6个月前,货主曾用玻片免疫酶法进行过筛选,均为B病毒相关抗体阴性猴。出口前,我们用玻片免疫酶法和微量中和试  相似文献   
4.
非洲马瘟病毒VP7基因的克隆与表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
为获得非洲马瘟病毒VP7蛋白,以用于制备AHS血清学诊断试剂并为AHS新型疫苗的构建奠定基础,笔者采用原核表达系统表达VP7蛋白。在GeneBank中查找非洲马瘟病毒VP7基因序列,人工合成VP7基因,将VP7基因片段克隆插入pBAD/Thio-TOPO表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌TOP10。经测序鉴定,筛选获得VP7基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,经L-Arabinose诱导表达VP7融合蛋白抗原。SDS-PAGE分析表明以终浓度为0.2%的L-阿拉伯糖进行诱导,4h后表达可达到高峰,融合蛋白质量约54.72 kDa。Western blotting检测和间接ELISA表明诱导表达的融合蛋白能与非洲马瘟病毒VP7单克隆抗体发生特异性反应,说明蛋白有特异的免疫学活性。  相似文献   
5.
根据基因库中的猪水泡病病毒(SVDV)高度保守的VP1基因的序列,设计了与SVDV互补的2对特异性引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地扩增出251bp和366bp特异性条带,将其克隆入pMD18-T载体中,并进行序列测定,与已发表的SVDV基因比较发现,核苷酸的同源性为100%,证实为SVDV的VP1段基因。通过检测FMDV、VSV、BHK21细胞等,对照的扩增结果均为阴性,验证其特异。对SVDVRNA进行10倍系列稀释后检测,结果SVDVRNA在10-4稀释度时仍能检测到阳性,说明具有较好的敏感性。此项试验能稳定、高效、快速地检测出猪水泡病病毒。  相似文献   
6.
空肠弯杆菌是一种人兽共同感染的病原菌,也是导致腹泻最常见的病菌,主要症状是发热和急性肠炎。主要从病原的生物学特征、肠毒素的研究、人畜带菌率及流行病学的研究现状进行综合讨论  相似文献   
7.
空肠弯杆菌是一种人兽共同感染的病原菌,也是导致腹泻最常见的病菌,主要症状是发热和急性肠炎。主要从病原的生物学特征、肠毒素的研究、人畜带菌率及流行病学的研究现状进行综合讨论。  相似文献   
8.
加利福尼亚大学Davis分校兽医教学医院接受了一匹7岁的Appaloosa去势马,这匹马入院前3周一直昏睡、厌食、呼吸困难。在送来教学医院之前,兽医诊断为支气管肺炎,已用普鲁卡因青霉素(2万单位/公斤体重,每隔12小时肌注一次)治疗7天。用这种抗生素治疗时,该马出现过2次发热。在第二次发热期间兽医改用TMP—SMZ口服  相似文献   
9.
参照羊痘病毒(CaPV)P32的基因序列,设计合成了2套引物和1条探针,建立了实时荧光定量PCR技术,对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示,用300nmol/L引物浓度和200nmol/L探针浓度,获得的CT值较小,而△Rn最大;可检测到相当于0.1TCID50的病毒DNA;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.9995以上;组内和组间试验重复性的变异系数分别为2.3%和3.4%;与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,可同时检测大量样品等优点。表明,荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法,可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。  相似文献   
10.
参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRVH基因,将其克隆至PUC18-T质粒中,转化E.coli JM109感受态细胞,构建并选择PPRVH基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio—TOPO载体中,转化E.coli TOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRVH基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRVH抗原。SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2g/L的L-阿拉伯糖诱导5h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占菌体总蛋白的10%。Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRVH蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRVH糖蛋白抗原。  相似文献   
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