基于单抗的免疫分析方法及其在兽药残留检测中的应用

兽药残留检测是监督控制药物滥用的手段之一。免疫学技术基于抗原对抗体的特异性识别,具有灵敏度高、稳定性好、操作简单、快捷等优点被广泛应用于兽药残留检测。该方法的关键是要获得高质量的特异性抗体,因而单抗技术的应用与发展,对免疫分析方法的普及起了巨大推动作用。为此,本文针对单抗的制备以及基于单抗的免疫分析方法在兽药残留检测领域的应用进行简要综述。目前酶联免疫吸附法（ELISA）与胶体金免疫层析法（GICA）是应用最广泛的基于单抗的兽药残留检测方法,主要用于检测抗生素、化学合成抗菌药、激素类和β-受体激动剂类药物、镇静剂类药物,其操作简单,灵敏度高,但均需要对样品进行一定的前处理,实际操作中较易出现假阳性,反应时间长等问题。为提高检验的敏感度、稳定性、特异性、便捷性,正在研究新型的免疫分析技术,如结合采用表面增强拉曼光谱（SERS）技术和金标检测试纸（LFA）实现超灵敏检测,采用微流控免疫分析芯片技术联合ELISA实现高通量检测等。诸多研究将为基于单抗的免疫分析方法在兽药残留检测中的应用提供新思路。     

鸡E.necatrix早熟株致病性的研究

鸡球虫病是由一种或多种球虫寄生于鸡的肠粘膜上皮细胞而引起的一种急性流行性原虫病。已报道的有9种球虫,其中毒害艾美尔球虫（Enecatrix）是9种鸡球虫中致病力最强的虫种之一,其无性生殖阶段可导致鸡的中后段肠上皮细胞大量破坏和严重出血,影响营养物质的吸收并易引起继发性坏死肠炎,常导致巨大的经济损失。     

环境因素对球虫卯囊孢子化的影响

探讨环境因素对球虫卵囊孢子化的影响,为切断鸡球虫病的感染途径提供依据。本实验将未孢子化球虫卵囊分别置于高温干燥、高温潮湿、室温三个不同环境中处理后,再按常规方法培养,并测其孢子化率。结果表明:80℃高温干燥环境中放置15 min以上,80℃高温潮湿环境中放置30 min以上,室温环境中放置1 d以上,卵囊均已完全丧失孢子化能力。     

不同光照时间对蛋鸡生产的影响

按光照时间没分为四组：试验Ⅰ组（１４ｈ）、试验Ⅱ组（１５ｈ）、试验Ⅲ组（１７ｈ）、对照组（１６ｈ）、每组８０只，各级一饲养管理相同，试验期为５周。试验结果：产蛋率和总产蛋重Ⅲ最高，与Ⅰ组、Ⅱ组、对照组比较差异显著。Ⅲ组产蛋率为８１．００％，比Ⅰ组、Ⅱ组和对照组分别为３．６５％、４．４３％、３．２６％，Ⅰ组、Ⅱ组和对照组各组之间差异不显著。料蛋比Ⅲ组最低２．３７：１，与Ⅰ、Ⅱ组和对照组比较差异显著。     

柔嫩艾美耳球虫在鸡胚盲肠上皮细胞中体外培养营养条件的研究

探讨E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的营养条件,观察其发育过程。用鸡胚盲肠上皮细胞体外培养E.tenella,对子孢子接种基础培养基、营养物质含量及血清浓度进行了优选,并对优化营养条件下E.tenella的发育过程进行了观察。MEM199培养基中24、48、72h的虫体感染率显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于DMEM培养基;MEM199培养基中叶酸、VB6、VB1的含量为6mg·L-1时,24、48、72h的虫体感染率显著(P0.05)高于其他组,分别为25.33%、12.67%和12.33%;MEM199培养基中葡萄糖含量为3000mg·L-1,胰岛素含量为0.40mg·L-1时,有较多的成熟裂殖体形成;接种子孢子后于4、48、96h换液,接种时和4、48h血清浓度为2.5%,96h为1%,有利于子孢子的后期发育;优化营养条件下,细胞接种子孢子后4、24、48、72、96、120h的细胞虫体感染率分别为42%、28%、20%、15%、13.67%、13.67%,且E.tenella可在鸡胚盲肠上皮细胞中完成内生发育过程,并形成卵囊。结果表明,获得了能使E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞完成整个内生发育的体外培养营养条件。     

抑制钙信号转导对柔嫩艾美耳球虫入侵细胞的影响

 【目的】探讨柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）入侵细胞与钙信号转导之间的关系，揭示鸡柔嫩艾美耳球虫病的发生机制。【方法】采用体外狗肾细胞（madin-darby canine kidney cell，MDCK细胞）培养技术，检测了细胞外缺钙、Ca2+内流阻断剂（硝苯地平）和钙调蛋白抑制剂（三氟拉嗪）对E. tenella子孢子入侵率的影响，并测定了培养细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）和细胞活性。【结果】E. tenella子孢子入侵细胞的抑制率随着细胞外Ca2+浓度的降低而升高。钙离子浓度降低到600 μmol•L-1时，入侵率（23.33%）均极显著低于对照组（P＜0.01）；细胞外无钙时，入侵抑制率高达53.18%；硝苯地平和三氟拉嗪均能极显著抑制子孢子的入侵（P＜0.01），其中10 μmol•L-1的硝苯地平和50 μmol•L-1三氟拉嗪分别对子孢子的入侵抑制率达71.41%和97.13%，二者合用入侵抑制率可达98.59%。在E. tenella子孢子入侵细胞的过程中，MDCK细胞的活性均在90%以上，与对照组差异不显著（P＞0.05），接种E. tenella子孢子的MDCK细胞培养液中LDH的活性与未接种的活性差异不显著（P＞0.05）。【结论】细胞外钙缺乏、钙通道阻断剂硝苯地平和钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对E.tenella子孢子入侵MDCK细胞均有抑制作用，但子孢子入侵对MDCK细胞的活性无明显影响。     

血清浓度对鸡胚盲肠上皮细胞原代培养的影响

为探讨细胞培养基中血清浓度对鸡盲肠上皮细胞体外培养的影响,分别用含0%、2.5%、5%和10%胎牛血清(FBS)的细胞培养液培养鸡胚盲肠上皮细胞,检测细胞活性;选择适宜的FBS浓度,并测定了该浓度条件下鸡盲肠上皮细胞的生长特性。结果表明:用含2.5%和5%FBS的培养基培养鸡胚盲肠上皮细胞,第4天细胞贴壁率达最高,分别为84%和80.33%,显著地高于无血清和10%FBS组(P<0.01/0.05),第7天仍均维持在76%以上,两者间除了第2天外,其余差异均不显著;用含2.5%FBS的细胞培养基进行鸡胚盲肠上皮细胞原代培养,第2~3天为适应阶段,第3~5天处于对数生长期,第5~9天细胞进入减速期,第10~11天再次进入对数生长期,第11天以后细胞进入衰退期,整个过程持续14 d左右。鸡胚盲肠上皮细胞培养的血清浓度以2.5%FBS为宜。     

小反刍兽疫研究进展

小反刍兽疫是一种急性高度接触性传染病,主要感染小反刍动物,具有高发病率和高死亡率等特点。给发生该病的国家,尤其是非洲、中东、近东和南亚等有牛瘟存在的大多数国家的外贸经济遭受了巨大的损失;而且,自该病首次发生以来,不断向全世界蔓延,对没有该病发生的国家,尤其是对与呈地方性流行国家的临近国家造成的威胁正逐渐加大,2007年我国首次在西藏发生。近年来,该病作为一种重大跨国动物疫病,对其研究取得了长足的发展,本文从病原学、流行病学、诊断和防制四个方面对该病的最新研究进展进行了阐述。     

雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后脂质过氧化物的变化

为了探讨柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)对感染雏鸡的损伤机制 ,本试验给 10日龄海兰白公雏鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 8× 10 4个 /只 ,在感染后 2、4、6、7、9、12、16和 2 1d分别各取 5只雏鸡剖检 ,取盲肠并采血 ,观察盲肠病理组织学变化 ,测定盲肠组织及血清中的丙二醛 (MDA )、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的水平。结果表明 ,雏鸡在感染 E.tenella后 2～ 4d,盲肠开始出现损伤 ,同时 SOD和 GSH- Px活性也开始下降 ;感染后 4～ 7d,盲肠粘膜上皮和肠腺上皮细胞大量变性、坏死崩解 ,发生严重损伤时 ,盲肠及血清中 MDA含量显著增加 ,并持续到 9d,同时 SOD和 GSH- Px活性也显著下降 ;感染 9d后 ,损伤的盲肠组织及 MDA、SOD和 GSH- Px水平逐渐恢复 ,至 2 1d基本达到正常