小反刍兽疫病毒分子生物学与疫苗研究进展

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是小反刍动物一种重要的传染病,是世界动物卫生组织规定的A类传染病,在我国被列为一类动物疫病,具有很高的发病率和死亡率,该病的广泛流行,给世界养羊业造成了巨大的损失。特别是该病2007年第一次在我国报道后,更应加强对它的研究。文章主要叙述了小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)分子生物学的研究情况,特别是主要基因特征和结构蛋白的功能,并对小反刍兽疫疫苗的使用和最新研究进展进行了总结。     

山羊痘病毒载体研究进展

山羊痘病毒（GPV）为痘病毒科,羊痘病毒属的一个成员,基因组呈线性,全长约150kb,编码147个开放阅读框。GPV的胸苷激酶基因是复制非必需基因,插入外源基因而不影响病毒复制,TK基因具有高度保守性,可以作为构建重组病毒的同源臂。GPV宿主范围小,对人不具有感染性,对外源基因的耐受性强,是一种更为理想的活病毒载体。国外的研究人员已经构建了多种表达外源基因的重组GPV,我国的相关研究刚刚起步,随着对GPV研究的进一步深入,重组GPV病毒在预防反刍动物疫病中将会发挥重要作用。     

现代商品仔猪传代肾细胞株的培育与应用研究

细胞系是动物病毒分离培养的重要载体。本研究以现代商品化仔猪肾脏为原始材料,拟培育新的细胞系用于动物病毒的分离和培养。利用胰酶消化法和差速贴壁相结合方法,分离纯化仔猪肾上皮细胞,并在体外进行传代培养和筛选。结果显示,试验成功得到一株可以连续传代的细胞株,命名为SDPK-D,且已在体外连续传代90代。SDPK-D细胞株F33和F83代倍增时间分别为40.9和32.7 h,细胞活率分别为97.55%和98.86%,8 h细胞贴壁率分别为91.67%和97.06%。在该细胞株接种猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪流感病毒（SIV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性病料均出现明显的细胞病变。本研究首次针对现代商品猪培育出一株可以在体外连续传代的细胞株,并对多种动物病毒敏感,为相关动物病毒的分离培养提供了新的细胞系选择。     

猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒一步法双重RT-PCR检测方法的建立与应用

本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该一步法双重RT-PCR检测方法能同时特异性扩增PEDV和TGEV,该方法可检测到稀释度1×10^-5的疫苗毒。应用本方法检测2015年度实验室收集的疑似样品,PEDV阳性率为100%。本研究建立的方法快速、敏感性高、特异性强,可用于临床PEDV和TGEV的快速检测及流行病学调查。     

粤北地区规模化猪场蓝耳病抗体水平及其与病毒血症关系的初步研究

蓝耳病是全球生猪规模化养殖场所面临的共同难题,现仍缺少有效的治疗药物,而疫苗免疫是控制该病最为有效的手段。为了解粤北地区规模化猪场的蓝耳病抗体水平,对该地区4家猪场382份血清样品进行ELISA检测,并设计荧光定量RT-PCR方法对血清中的病毒RNA进行检测,以初步探讨猪群抗体水平与病毒血症的关系。结果显示:粤北地区规模化猪场的蓝耳病抗体阳性率为82.9%,平均S/P值为1.59;但抗体水平离散度较大,4家猪场抗体水平的变异系数均高于25%。经灵敏度为10-1.5 TCID50/m L的荧光定量RT-PCR方法检测显示,猪群病毒血症发生率为12.4%,其中抗体水平不稳定群中病毒血症发生率为16.7%,明显高于抗体稳定群的7.3%。研究表明,粤北地区地区抗体阳性率和抗体效价较高,但均一性差,蓝耳病发病的可能性较大;同时抗体不稳定猪群出现病毒血症的概率更高。     

5种猪源消化道传播病原体荧光定量PCR检测方法的建立

猪源人兽共患病不仅威胁公共卫生安全,还威胁生猪养殖业的健康发展;其中消化道传播是其主要的传播途径。为及时鉴定出经消化道传播的病原体,本试验建立了猪源大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌和志贺菌的四重荧光定量PCR和戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法,并优化反应体系和条件,实现5种病原体的同时检测;并利用荧光定量PCR与普通PCR对117份猪临床样品(病变组织、粪便和肌肉等)进行对比检测。结果显示,建立的荧光定量PCR能够在1.5 h内完成对大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒5种病原体的特异性检测,与其他常见细菌和病毒无交叉反应,检测极限值可达5个拷贝,标准曲线相关系数均不低于0.997,线性范围涵盖1×10¹～1×10⁹,批内和批间变异系数(CV)均低于3.16%。建立的荧光定量PCR与普通PCR方法检测结果的符合率达到95.73%～100%,具有较好的一致性。117份临床样品中大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒各自的阳性率分别为31.62%、17.95%、6.84%、5.13%和11.11%。结果表明,本试验所...     

我国部分地区猪圆环病毒2型和猪细环病毒混合感染的调查

为了解猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细环病毒(TTV)混合感染情况,用PCR方法对来自湖南、江西、广东、福建和广西五省区的193份猪组织样品进行PCV-2、TTV-1和TTV-2进行检测。结果显示,PCV-2感染率为61.1%(118/193),PCV-2和TTV-1混合感染率为32.1%(62/193),PCV-2和TTV-2混合感染率为16.9%(32/193),3种病原混合感染率为9.8%(19/193),2006年PCV-2和TTV的混合感染率最高。由此可见,目前猪群中存在PCV-2和猪TTV的混合感染,PCV-2和TTV-1型混合感染率高于和TTV-2型的混合感染率,且存在一定比例的三重感染情况。     

鸡支原体病的诊治

１发病情况驻马店某鸡场的青年罗曼蛋鸡在９０日龄开始发病，３天内零星死亡共５０只，发病３天后前来就诊，该鸡场曾用痢特灵、土霉素、氟派酸、氯霉素配合维生素C和电解多维治疗３天，效果不佳，当时又按传染性支气管治疗，病情稍有好转，但未能得到有效控制。该鸡场群已进行过常规免疫，如新城疫、马立克、法氏囊等，但该鸡舍饲养密度过大，舍内通风不良。２临床症状病鸡表现精神沉郁、羽毛松乱、闭目呆立，食欲减退、消瘦、眼结膜潮红；症状较典型者表现流浆液或粘性鼻液、鼻孔堵塞、频频摇头，打喷嚏、咳嗽、呼吸有湿罗音，部分鸡拉痢…     

携带小反刍兽疫病毒H基因的重组山羊痘病毒构建和鉴定

将小反刍兽疫病(PPRV)毒糖蛋白基因H插入到山羊痘病(GPV)毒通用转移载体PtkPgpt-egfpP启动子P7.5的下游,构建了重组山羊痘病毒转移载体PtkPgpt-egfpPpprv-H。该重组转移载体转染感染山羊痘病毒疫苗株的绵羊睾丸细胞中,通过同源重组获得小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒,通过纯化和PCR鉴定,证明小反刍兽疫病毒H基因插入到山羊痘病毒基因组中。本研究为进一步研究PPRVH基因重组山羊痘病毒的免疫原性奠定了基础。     

华南地区猪输血传播病毒流行病学调查与分析

为了解华南地区规模化猪场猪输血传播病毒(TTV)感染状况,采用PCR方法对2005-2007年间来自广东、江西、湖南、福建和广西五省44个规模化猪场193份病料进行检测.结果显示,TTV1型阳性率为41.5％,TTV2型阳性率为21.8％,TTV1型和TTV2型共同感染阳性率为13.0％.TTV1型阳性猪场占72.7％...