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1.
为了研究鱼类低温下分子调控机制及其与活性氧(reactive oxygen species, ROS)之间的关系,本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维ZF4细胞进行不同程度的低温胁迫(18℃和10℃),监测其在不同低温胁迫时间下(1 d、3 d和5 d) ROS的变化以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路中蛋白的表达情况。结果显示:(1) DCFH-DA探针法表明在低温胁迫作用下,细胞内ROS含量增加。细胞内 ROS上升水平与外界胁迫压力成正相关。低温处理3 d后,18℃和10℃的细胞,其ROS含量与对照组(28℃)相比分别显著升高到(1.23±0.04)倍(P<0.05)和(2.31±0.08)倍(P<0.05)。(2) Western Blot检测磷酸化的p38(p-p38)和磷酸化的JNK (p-JNK p54和p-JNK p46)的水平变化,结果显示低温胁迫可以使p38和JNK的活性增强,且均在10℃处理3 d达到最高水平。(3)进一步检测DNA断裂标记蛋白γH2A.X的表达水平,结果显示,无论在18℃还是10℃,其在第3天呈现高表达。本实验初步证实低温胁迫能够诱导斑马鱼细胞 ROS 的产生;通过对不同时间点的蛋白表达水平检测,发现 p-JNK、p-p38和γH2A.X 激活时间点与低温诱导 ROS 表达时间点相吻合。该研究为后期对斑马鱼细胞低温胁迫实验奠定基础,其中低温下处理3 d可以作为一个检测各个蛋白变化的关键时间点。  相似文献
2.
纳米氧化锌对斑马鱼肠组织的氧化损伤   总被引:2,自引:1,他引:1       下载免费PDF全文
刘林  赵群芬  朱帅旗  许峰 《水产学报》2015,39(11):1702-1711
为探讨纳米氧化锌颗粒(ZnO-NPs)对斑马鱼肠组织的损伤及损伤机理,研究了ZnO-NPs对肠组织结构、抗氧化酶活性及相关凋亡基因表达的影响。将斑马鱼分别暴露于浓度为0、0.05、0.1、5、10、25和50 mg/L的ZnO-NPs水体中,在4、24和96 h时,用比色法测定了肠组织中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性;用实时荧光定量法测定了Bcl-2、Baxp53和MDM2 mRNA表达水平的变化;在第7、15和30天时用H.E染色技术观察了肠组织解剖结构变化。与对照组相比,实验组结果显示:斑马鱼肠中的MDA含量均高于对照组;随着时间的延长,组织中GSH-PX和GST活性呈先升高后下降的趋势;肠组织中Bax/Bcl-2和p53的mRNA的表达量均升高,而MDM2的mRNA表达量则随着时间的延长和浓度的增加表现为先降低后升高;H.E染色观察到肠组织结构发生变化,表现为杯状细胞增多,肿胀变形,部分细胞质空泡化,肠中淋巴细胞增多,肠绒毛侵蚀变形,且有时间和浓度依赖性。结果表明:ZnO-NPs能诱导斑马鱼肠组织产生氧化应激作用,使组织中抗氧化酶活性发生变化,诱导肠中细胞凋亡相关基因的表达,并且能对肠组织结构造成损伤。  相似文献
3.
cDNA芯片技术筛选斑马鱼皮肤免疫相关差异表达基因   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
研究旨在筛选与鱼类皮肤免疫相关的功能基因,试图解释鱼类皮肤局部免疫应答的分子机制.采用斑马鱼(Danio rerio)基因cDNA芯片(affymetrix),以葡萄球菌(Staphylococcus sp.)感染诱导的成体斑马鱼为实验动物模型,从斑马鱼皮肤组织中提取总RNA,经Biotin荧光标记与拥有15 617个cDNA片段的基因芯片杂交,对斑马鱼皮肤组织中基因表达谱进行初步分析.在斑马鱼皮肤组织中共检测出175个差异表达基因,其中有150个上调表达基因(ratio>2.0)和25个下调表达基因(ratio>0.5);在皮肤组织150个上调基因中,91个为已知功能基因,59个为未知功能基因.根据基因文库同源功能基因(GO)分析,将175个差异表达基因分为13个主要的生物功能与代谢通路,其中参与免疫应答相关基因包括鱼主要组织相容性复合体(MHC)I类基因区的基因(UEA,UFA)、补体(Clq,C7-1)、凝集素(HBL3,LGALS1L3)、应急反应生长基因(EGR-1)、肿瘤坏死因子超家族基因(TNFSF10L4)、凝血因子(F5)、转铁蛋白基因(TF-α)和一些蛋白酶等.结果证实,MHC I类分子、补体、凝集素和蛋白酶等参与鱼类皮肤的抗葡萄球菌感染免疫应答,为将来以斑马鱼感染模型研究皮肤局部与细菌的互作机制提供了科学参考;同时表明采用基因芯片方法初探斑马鱼皮肤免疫系统是基本可行的.  相似文献
4.
氰戊菊酯对鲤科鱼类致突变效应的研究   总被引:1,自引:1,他引:1  
通过统计草鱼(C tenopharyngodon idellus)外周血红细胞的微核率和斑马鱼(Brachydanio rerio)胚胎致畸率,研究了氰戊菊酯对鱼类的致突变效应。结果显示:氰戊菊酯对1龄草鱼的96 h半致死浓度(LC50)为60.62μg/L;1.2μg/L以上的氰戊菊酯能显著提高草鱼的微核率、核异常率以及总核异常率,三者的变化趋势均是随着暴露时间的延长先升高,达到峰值后再缓慢下降;微核率与空白对照组比较呈显著性差异。表明氰戊菊酯对草鱼染色体畸变有明显影响。在2~32μg/L的氰戊菊酯中,随着浓度的升高,斑马鱼的胚胎死亡率升高、出膜率降低、80%胚胎出膜时间延长,仔鱼畸形率升高,说明氰戊菊酯对斑马鱼胚胎及仔鱼有致畸作用。  相似文献
5.
从草鱼肠道中分离到1株细菌,通过形态学观察、生理生化特征和16S rDNA序列分析等鉴定为弗氏柠檬酸杆菌,动物试验结果表明,该菌对斑马鱼有致病性;从感染诱导的斑马鱼皮肤组织中提取总RNA,经Biotin荧光标记与拥有15 617个cDNA片段的斑马鱼基因芯片(affymetrix)杂交筛选分析,获得斑马鱼皮肤免疫相关差异表达基因88个,其中有74个上调表达基因和14个下调表达基因;进一步根据基因功能聚类(GO)分析,初步将88个差异表达基因分为8个生物学功能,其中主要参与补体激活、急性期反应、应激防御反应、细胞凋亡、抗原加工提呈、细胞迁移粘附、凝血因子和血小板激活等免疫应答过程;同时进行信号通路(pathway)分析,结果表明MAPK(hsp70、daxx、nfkbiab)、JAK/STAT(ifn1)和TGF-β(thbs1)等信号通路参与斑马鱼皮肤抗弗氏柠檬酸杆菌感染免疫应答。采用基因芯片方法筛选与鱼类皮肤免疫相关的功能基因,为将来以斑马鱼为模型研究鱼类皮肤局部免疫应答的分子机制提供科学依据。  相似文献
6.
斑马鱼和鲢鱼对微囊藻毒素与孔雀石绿的行为反应   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
鱼类行为能准确地反映环境变化,并且随着污染物浓度的变化而发生改变,因此将毒素敏感鱼类的行为作为标记,用以监测环境是可行的。本研究用人工饲养,对环境毒素敏感的斑马鱼和对环境毒素有较强吸收能力的鲢鱼作为指示生物,检测其行为对水体中微囊藻毒素(MC)和孔雀石绿(MG)的反应。结果表明,斑马鱼和鲢鱼在2 µg/L MC浸泡下未出现显著的行为反应,而在5 µg/L的MC浸泡下,斑马鱼摆尾频率在10 min 后,移动速度在40 min后显著性下降;鲢鱼摆尾频率与移动速度均在40 min后显著性下降。另一方面,0.5 mg/L MG处理下,斑马鱼未出现显著性行为变化,而鲢鱼摆尾频率与移动速度均在35 min后显著性下降。  相似文献
7.
Owing to the increasing importance of zebrafish as a vertebrate model in many fields of research, efforts must be made to breed and maintain this species in laboratory. Zebrafish larvae are traditionally reared on cultured live paramecia during the first 9 days of exogenous feeding, followed by a combination of paramecia and artemia nauplii until day 21, making larval rearing expensive, labour intensive and unpredictable. Thus, a trial was conducted with zebrafish larvae in order to evaluate the suitability of artificial diets as an alternative to live food during the first 21 days of exogenous feeding. Five dietary treatments were tested: (1) artemia nauplii; (2) a commercial; (3) a purified; (4) a practical diet, all delivered continuously; (5) the same practical diet delivered manually. The best overall larval performance was achieved in the group fed artemia nauplii (86% survival, 14.3 mm standard length, 46.1 mg wet weight). Compared with existing results obtained with the traditional live food schedule, our results suggest that paramecia might not be the most suitable first food for zebrafish, and that artemia nauplii could be used as the only live food. The present work demonstrates that zebrafish larvae can be reared without live food with a significant growth and a high survival, provided that an appropriate artificial diet is presented in a continuous way. Among the diets tested, the practical diet, if continuously delivered, led to the best performance assuring a mean standard length of 72% of that obtained with artemia and a similar survival rate. Moreover, the purified diet, supporting over 50% survival and an appreciable growth, could be useful in some toxicological studies in which a well‐defined diet is needed.  相似文献
8.
9.
The natural route by which fish become infected with mycobacteria is unknown. Danio rerio (Hamilton) were exposed by bath immersion and intubation to Mycobacterium marinum and Mycobacterium peregrinum isolates obtained from diseased zebrafish. Exposed fish were collected over the course of 8 weeks and examined for the presence of mycobacteriosis. Mycobacteria were consistently cultured from the intestines, and often from the livers and spleens of fish exposed by both methods. Mycobacteria were not observed in the gills. Histological analysis revealed that fish infected with M. marinum often developed granulomas accompanied by clinical signs of mycobacteriosis, while infection with M. peregrinum infrequently led to clinical signs of disease. Passage of the bacteria through environmental amoebae (Acanthamoeba castellani) was associated with increased growth of M. peregrinum over the course of 8 weeks, when compared to infection with the bacteria not passed through amoebae. The results provide evidence that zebrafish acquire mycobacteria primarily through the intestinal tract, resulting in mycobacterial dissemination.  相似文献
10.
为研究UVB辐射对斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎发育的影响,采用波长302 nm,强度分别为120、240、310、420 μW/cm~2的UVB照射斑马鱼早期发育阶段的胚胎,照射时间分别为1、3、5、10 min,用于研究UVB照射对形态学及DNA损伤的影响;将原肠期、体节期胚胎及孵化后2 d仔鱼经UVB照射,设立未经UVB照射组为对照组,观察记录UVB照射后胚胎发育情况,统计死亡率、畸形率;应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测不同UVB照射条件对DNA损伤的影响.结果表明:(1)IJVB照射对斑马鱼早期胚胎发育形态有明显的影响,能够造成尾部弯曲、围心腔扩大、脊柱扭曲等多种畸形甚至死亡;(2)在检测UVB照射与DNA损伤的关系时,发现UVB照射对胚胎细胞中的DNA能够产生比较明显的损伤,且DNA损伤随照射强度的增加和照射时间的延长而加剧.在所研究的3个发育阶段中,原肠胚受损最为严重,但未发现明显的剂量累积效应.结论认为,UVB照射对斑马鱼早期胚胎发育有明显影响,不同的照射强度和时间造成的影响差异显著;不同发育阶段的斑马鱼胚胎对UVB照射的耐受程度也不同.  相似文献
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