船舶噪声声压级对大黄鱼幼鱼游泳、摄食行为及免疫生理指标的影响

通过录制大黄鱼(Larimichthys crocea)产卵场附近船舶航行时的噪声,并以此为刺激源,以大黄鱼幼鱼为实验对象,研究了船舶噪声声压级对大黄鱼幼鱼游泳、摄食行为及免疫生理指标的影响。研究发现,当噪声声压级<60 dB时,幼鱼趋避游泳行为不强烈;但随着声压级增大,开始呈现出不同强度的趋避行为,依次表现出:游泳速度加快、鱼与鱼之间及鱼与桶壁之间发生碰撞、瞬间反应无序、跳跃等行为;当声压级>200 dB时,刺激2 min后就出现了死亡个体。在120 dB和150 dB短期单次和多次刺激下,幼鱼血浆中的皮质醇、血糖、血红蛋白和乳酸这4个与应激相关的生理指标均显著上升,其中皮质醇、血糖和乳酸上升幅度尤为明显。另外,皮质醇单次刺激后即达到峰值,而多次刺激后反而较单次刺激有所下降;血糖、血红蛋白和乳酸则具有累加效益,多次刺激要高于单次刺激。在120 dB长期(30 d)刺激下,幼鱼生长明显减缓,血浆中部分免疫指标(免疫球蛋白M,干扰素-α,白介素-1β和肿瘤坏死因子-α)明显降低,肠道菌群也发生显著变化,突出表现为部分益生菌如芽孢杆菌、乳杆菌等相对丰度明显降低。摄食行为影响方面,研究发现幼鱼能准确识别噪声源的位置,并具有一定的记忆性。研究结果揭示了船舶噪声对大黄鱼幼鱼的危害,可为今后制定大黄鱼产卵场的保护措施提供数据支撑。     

Intestinal Microbiota in Large Yellow Croaker,Larimichthys crocea,at Different Ages

The polymerase chain reaction–denaturing gradient gel electrophoresis (PCR‐DGGE) of 16S ribosomal RNA gene was used to investigate bacterial communities in the intestines of large yellow croaker at six different ages (12 d, 18 d, 26 d, 40 d, 3 mo, and 1 yr old) as well as within the corresponding feed and culture water. In addition, Illumina Miseq sequencing was utilized to compare intestinal microbiota between 12‐d‐old and 1‐yr‐old individuals. PCR‐DGGE results revealed that the culture water had the highest bacterial diversity, followed by the feed, while the intestines had the lowest diversity. The intestinal microbiota at six ages changed severely; however, the change did not follow any trend. The large yellow croaker intestines harbored specific bacterial communities that differed from those in both feed and water. Illumina Miseq sequencing results revealed that the diversity of intestinal bacteria in 12‐d‐old fish was higher than that in 1‐yr‐old fish, and the bacterial composition differed significantly between them. γ‐Proteobacteria and Pseudoalteromonas supplied the most abundant phylum and genus in the 12‐d‐old fish intestine. However, in the 1‐yr‐old fish intestine, Firmicutes and Clostridium were the most dominant, respectively. The study may contribute to a better understanding of gut microbiota and dynamics of the large yellow croaker and the relationship with their surrounding environment.     

玻璃钢水槽内大黄鱼养殖环境噪声测量与分析

利用水下声音测量系统,分别记录了开放式圆形玻璃钢水槽内养殖环境噪声和大黄鱼(Larimichthys crocea)摄食过程声音,并进行声压级(sound pressure levels,SPL)计算和频谱特征分析。结果表明:(1)养殖环境噪声SPL约为110.27 d B(d B re:1μPa),包括主频率峰值为100 Hz的养殖工作设备与水槽内壁的低频共振噪声、1 250 Hz的表层水体气泡噪声、1 600~2 500 Hz的曝气石、增氧机、空气压缩机工作噪声;(2)增氧机和曝气关闭时,大黄鱼摄食过程声音SPL约为92.65 d B,高于背景噪声SPL,主要为游泳声音70~500Hz、吞食产生的水体表面搅动与气泡破裂的声音1 000~2 000 Hz、咀嚼颗粒饵料声音2 000~4 500 Hz;(3)增氧机和曝气开启时,背景噪声SPL略高于摄食声音约17.62 d B,且摄食声音无法区别于背景噪声,但并未影响鱼类摄食行为。     

岱衢族大黄鱼放流增殖试验

为了恢复舟山渔场本地种岱衢族大黄鱼（Pseudosciaenac Focea）资源，2000～2009年进行了岱衢族大黄鱼增殖放流试验。10年间共放流了经过人工繁育的岱衢族大黄鱼苗种1288．0×10^4尾，其中包括标志鱼62680尾。回捕标志鱼1432尾，平均回捕率2．73％。回捕试验结果表明，在岱衢洋进行本地大黄鱼的放流可行，体外挂牌法适合于大黄鱼的标志放流，放流鱼苗不仅可以成活、生长，还能够产卵、增殖并进行洄游；放流使舟山渔场本地岱衢族大黄鱼资源得到显著恢复，并产生了一定的经济效益。     

小肽对大黄鱼仔鱼生长和小肠发育的影响及其在低温胁迫下的抗氧化应激效应

本试验分为生长试验和低温胁迫试验2部分。先分别投喂大黄鱼(Larimichthys crocea)仔鱼经不同浓度(0、0.5、1.0、2.0和3.0 mL/m 3)小肽营养强化后的轮虫和卤虫12 d,以探讨小肽对大黄鱼仔鱼生长和小肠发育的影响;再将大黄鱼仔鱼暴露在温度为12℃的水体中24 h,以探讨小肽对低温胁迫下大黄鱼仔鱼抗氧化能力和非特异性免疫力的影响。结果显示:不同浓度小肽均显著增加了轮虫和卤虫的必需氨基酸和总氨基酸含量(P<0.05),显著提高了大黄鱼仔鱼的体长及小肠绒毛高度、数量和组织面积(P<0.05)。小肽显著提高低温胁迫下大黄鱼仔鱼的谷胱甘肽(GSH)含量以及肝脏抗氧化酶[铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶-1a(GPx-1 a)、谷胱甘肽过氧化物酶-1b(GPx-1 b)和谷胱甘肽还原酶(GR)]基因和非特异性免疫酶[c型溶菌酶(c-type LZM)、g型溶菌酶(g-type LZM)和碱性磷酸酶(AKP)]基因表达水平,显著降低活性氧(ROS)含量(P<0.05)。核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)和核转录因子-κB(NF-κB)基因表达水平均与抗氧化酶基因和非特异性免疫酶基因表达水平呈显著正相关(P<0.05),并均与ROS含量呈显著负相关(P<0.05)。综上所述,小肽能够提高轮虫和卤虫的营养价值,从而改善大黄鱼仔鱼的生长和小肠发育;小肽通过诱导Nrf2和NF-κB的表达来增加抗氧化酶基因和非特异性免疫酶基因表达水平,从而缓解低温胁迫诱导的氧化损伤。     

大黄鱼二倍体和三倍体血液生理指标的比较研究

本文对人工诱导的大黄鱼三倍体与正常数大黄鱼二倍体的血液血细胞常值测定,并对血液生理指标进行比较研究。结果表明:体长25.2～29.2cm,体重180.0～331.0g的二倍体大黄鱼,红细胞平均值为2.33±0.12(×1012个/L);白细胞平均值为23.65±2.45(×109个/L);血栓细胞平均值为42.50±7.14(×109个/L)。体长25.2～27.5cm,体重224.0～281.0g的三倍体大黄鱼,红细胞平均值为1.22±0.18(×1012个/L);白细胞平均值为31.19±3.52(×109个/L);血栓细胞平均值为29.25±5.91(×109个/L)。分析比较大黄鱼二倍体、三倍体各项血液生理指标,除血红蛋白无显著性差异外,其余各项血液生理指标有显著性差异。     

大黄鱼腐败菌腐败能力分析与特定腐败菌鉴别

探讨了分别接种腐败希瓦氏菌和假单胞菌的无菌大黄鱼鱼块在5℃贮藏中的生长速率和腐败代谢产物的生成速率,以产生异臭味时的腐败菌数和腐败代谢产物的产量因子作为腐败菌腐败能力的定量指标。接种鱼块腐败时(产生明显异臭味)腐败希瓦氏菌与假单胞菌的菌数即最小腐败菌数(N_s)的对数值分别为9.14lg cfu/g和9.25lgcfu/g。由Gompertz方程得到腐败希瓦氏菌和假单胞菌的生长动力学参数:最大比生长速率(μ_max)分别为0.0714和0.0700,最大菌数(N_max)的对数值分别为9.45lg cfu/g和9.37lg cfu/g。结果表明,两种腐败菌在无菌大黄鱼鱼块中的μ_max基本一致,且N_max都超过N_s,这两种腐败菌都能引起大黄鱼的腐败。接种鱼块中腐败希瓦氏菌的腐败代谢产物(TVBN和TMA)的产量因子Y_TVBN/cfu和Y_TMA/cfu分别为1.38×10^-10mg-N TVBN/cfu和1.31×10^-10mg-N TMA/cfu,假单胞菌的腐败代谢产物(TVBN)的产量因子Y_TVBN/cfu为1.18×10^-10mg-N TVBN/cfu,比较产量因子可得,两菌的腐败能力相当。因为大黄鱼低温贮藏中的优势腐败菌是腐败希瓦氏菌,其次是假单胞菌,根据特定腐败菌的概念,大黄鱼低温贮藏过程中的特定腐败菌是腐败希瓦氏菌,其次是假单胞菌。     

Optimal dietary lipid level for large yellow croaker (Pseudosciaena crocea) larvae

A 30‐day feeding experiment was conducted in blue tanks (70 × 50 × 60 cm, water volume 180 L) to determine the effects of dietary lipid levels on the survival, growth and body composition of large yellow croaker (Pseudosciaena crocea) larvae (12 days after hatchery, with initial average weight 1.93 ± 0.11 mg). Five practical microdiets, containing 83 g kg^?1 (Diet 1), 126 g kg^?1 (Diet 2), 164 g kg^?1 (Diet 3), 204 g kg^?1 (Diet 4) and 248 g kg^?1 lipid (Diet 5), were formulated. Live feeds (Artemia sinicia nauplii and live copepods) were used as the control diet (Diet 6). Each diet was randomly assigned to triplicate groups of tanks, and each tank was stocked with 3500 larvae. During the experiment, water temperature was maintained at 23(±1) °C, pH 8.0 (±0.2) and salinity 25 (±2) g L^?1. The results showed that dietary lipid significantly influenced the survival and growth of large yellow croaker larvae. Survival increased with the increase of dietary lipid from 83 to 164 g kg^?1, and then decreased. The survival of larvae fed the diet with 83 g kg^?1 lipid (16.1%) was significantly lower than that of larvae fed other diets. However, the survival in larvae fed the diet with 16.4 g kg^?1 lipid was the highest compared with other artificial microdiets. Specific growth rate (SGR) significantly increased with increasing dietary lipid level from 83 to 164 g kg^?1 (P < 0.05), and then decreased. The SGR in larvae fed the diet with 164 g kg^?1 lipid (10.0% per day) was comparable with 204 g kg^?1 lipid (9.6% per day), but were significantly higher than other microdiets (P < 0.05). On the basis of survival and SGR, the optimum dietary lipid level was estimated to be 172 and 177 g kg^?1 of diet using second‐order polynomial regression analysis respectively.     

微粒饲料替代生物饵料对大黄鱼稚鱼生长、存活和消化酶活力的影响

以初始体重为(1.93±0.11) mg的大黄鱼稚鱼(12日龄)为实验对象,以微粒饲料(micro-diet,MD)分别替代0%、25%、50%、75%和100%生物饵料(live prey,LP),探讨微粒饲料替代生物饵料对大黄鱼稚鱼生长、存活、体成分和消化酶活力的影响.30 d的摄食生长实验表明:微粒饲料替代生物饵料显著影响大黄鱼稚鱼的生长、存活、体成分和消化酶活力.当微粒饲料替代50%和75%生物饵料时,两组间的特定生长率(SGR)差异不显著(P＞0.05),但均显著高于100%替代水平(P＜0.05);同时,75%替代水平SGR显著高于0%和25%替代水平(P＜0.05).存活率在各处理组间的差异关系与SGR的变化趋势类似.鱼体粗蛋白含量随替代水平的升高有下降的趋势,其中50%、75%和100%替代水平鱼体粗蛋白含量显著低于0%和25%替代水平(P＜0.05),而鱼体粗脂肪含量变化趋势与之相反.当微粒饲料替代100%生物饵料时,其胰段和肠段淀粉酶活力显著高于其余各处理组(P＜0.05),而其余各处理组之间淀粉酶活力差异均不显著;微粒饲料替代生物饵料对各处理组蛋白酶活力无显著影响.由此可以看出,大黄鱼苗种生产中,在12日龄以后使用优质微粒饲料替代50%～75%的生物饵料是可行的.     

大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

C型凝集素受体（C-type lectin receptor，CTLR）是可以特异性结合糖类病原体相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）的模式识别受体（pattern recognition receptors，PPRs），在先天性免疫中发挥着重要作用。为了揭示硬骨鱼CTLR的生物学功能，本研究以从大黄鱼（Larimichthys crocea）转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因（C-type lectin domain family 4 member E gene，Clec4e）为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，LcClec4e cDNA全长1546 bp，开放阅读框（open reading frame，ORF）771 bp，编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区，无信号肽，C端含有一个糖识别结构域（carbohydrate recognition domain，CRD），其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明，LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示，LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布，且在肝脏中表达量最高；LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达，且在巨噬细胞中表达量最高；经灭活溶藻弧菌刺激后，LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段（recombinant LcClec4e-extracellular domain，rLcClec4e-ex）具有Ca2+依赖性的凝集活性，可凝集小鼠、家兔的红细胞，以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用，说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。这些研究结果提示，LcClec4e可能作为一种PPR，通过结合病原菌表面的糖类PAMPs来识别病原，参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。