小反刍兽疫病毒原核表达体外转录系统的建立

构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通过全基因合成构建含PPRV病毒5′端启动子序列(AGP)、3′端启动子序列(GP)、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列HamRZ及氯霉素乙酰转移酶(CAT),获得PPRV微型复制子重组质粒pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达T7RNA多聚酶(T7RNP)感染痘病毒VTF7-3后,通过脂质体法优化4种质粒配比,并将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光分析CAT的表达情况,荧光显微镜观察到荧光的表达,并通过免疫印迹分析CAT蛋白的表达,表明构建的PPRV微型复制子具有转录和复制功能,这将有助于进一步开展以PPRV反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。     

磁珠标记的氯霉素直接竞争ELISA方法的建立

采用本实验室制备的氯霉素(CAP)单克隆抗体,以包被抗原1:6 000和酶标CAP单抗1:8 000的稀释比例为工作浓度,建立CAP直接竞争ELISA(cdELISA)方法,cdELISA检测灵敏度达到0.1 μg/L.利用xMag异硫氰酸根末端磁粒标记CAP单克隆抗体制备免疫磁珠,用该免疫磁珠富集样品中的CAP.经过乙酸乙酯抽提免疫磁珠表面吸附的CAP,再通过cdELISA检测,可使CAP的检测灵敏度提高50倍,即达到0.002 μg/L.     

水产品中氯霉素残留检测技术的研究进展

介绍了水产品中氯霉素残留检测分析方法的研究进展,并阐述了各检测方法的特点及检出限,以期为水产品氯霉素残留检测提供参考。     

液相色谱-串联质谱法测定养殖水体中的氯霉素

本文采用回收率较高、较稳定的内标定量法（对养殖水体中氯霉素的检测方法进行了研究, 建立了养殖水体中氯霉素残留的检测方法。应用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定养殖水体中氯霉素的含量,量取250 mL水样,用100 mL乙酸乙酯分2次萃取,萃取液经旋转蒸发仪浓缩近干,以40%的甲醇-水溶液定容至1 mL。氯霉素标准系列溶液浓度为0.25、0.50、1.00、1.25、2.50、5.00 ng/mL,氘代氯霉素的含量均为2.0 ng/mL,上机检测,内标法定量。结果表明,氯霉素为外标,氘代氯霉素为内标,其峰面积比值（y）与浓度比值（x）的曲线方程为：y=1.136512x+0.012050（R2＝0.9990）;该方法氯霉素的检出限为2 ng/L,定量限为4 ng/L,仪器线性范围为0.25～5.0 ng/mL;加标浓度在2～20 ng/L时,平均回收率在80%～110%,相对标准偏差小于10%。实验证明该方法比较稳定、灵敏度高,适用于检测养殖水体中氯霉素的含量。     

直接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法建立及初步应用

用混合酸酐法合成氯霉素的CAP抗原,用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记抗原,用ELISA方法对合成的CAP抗原、CAP酶标记抗原进行鉴定表明其与抗CAP单克隆抗体具有特异性反应。在此基础上建立了包被二抗的直接竞争ELISA方法。特异性试验结果表明,CAP琥珀酸酯、CAP琥珀酸钠盐的交叉反应率分别为107%、106.4%;甲砜霉素、氟甲砜霉素与CAP的交叉反应率小于0.016%;与其他结构类似物间未见交叉反应。该方法对CAP的检测限可达到0.1μg/L,IC50为11.6μg/L,线性范围0.1～100μg/L,批内变异系数小于11.5%,批间变异系数小于19.6%。对猪肉、鸡肉、蜂蜜分别添加1.0、3.0、10.0、30.0μg/L CAP标准品,回收率61.0%～102.0%,变异系数为6.6%～15.8%;对猪肉、鸡肉、蜂蜜中CAP的最低检测限分别为0.48、0.42、1.20μg/kg。     

Physiological Factors Limiting Grain Growth in Wheat Ears Cultured in Sucrose Solution

Detached wheat ears (15 days post-anthesis) were cultured in liquid nutrient medium containing different sucrose concentrations (2. 6 and 10%). The volume of solution taken up was highest from 2% sucrose solution and decreased with increasing sucrose concentration. Grain development in terms of grain weight, glumes and rachis weight, nitrogen and protein content showed a linear increase in these variables over 11 days. Dry weight per grain increased with the sucrose level in the medium and the reduced uptake of solution did not decrease the moisture percentage of the grain. The culture of ears decreased the solution pH more with 2% than with 10% sucrose. Addition of 0.5% chloramphenicol to the culture solution had no adverse effect on grain weight, rather it prevented contamination and maintained a higher pH of the solution.     

高效液相色谱法测定鸡蛋中氯霉素残留量

采用高效液相色谱法(HPLC)检测鸡蛋中氯霉素的残留量。鸡蛋(全蛋)试样中残留的氯霉素用乙酸乙酯提取,35℃减压蒸干。残渣用正己烷-氯仿(1 1,V/V)溶解,加少量水,混匀后,离心,取上清液作为试样溶液供高效液相色谱仪(紫外检测器)在280nm处测定,外标法定量。本方法在鸡蛋中检出限为2μg/kg,回收率在60％～90％,批内变异系数小于12.0％,批间变异系数小于15.0％。     

氯霉素在草鱼和复合四倍体异育银鲫体内的比较药代动力学

研究并比较了给草鱼和复合四倍体异育银鲫（简称高倍体鲫鱼）单次腹腔注射氯霉素１００ｍｇ／ｋｇ后的药代动力学特征。采用ＨＰＬＣ测定血液中氯霉素的浓度。试验期间水温为（２０±２）℃。结果表明,氯霉素在这２种鱼体内的处置过程相似,均可用带一级吸收的二室开放模型进行描述;药物从腹腔吸收迅速,给药后分别在０．９２ｈ和０．６３ｈ血中浓度达到高峰,无吸收时滞;在草鱼和高倍体鲫鱼体内药物的ｔ１２β相近,分别为１１．９ｈ和１１．１ｈ,但体清除率（ＣｌＢ）相差较大;氯霉素在高倍体鲫鱼体内比在草鱼体内有更强的亲组织性,总表观分布容积（Ｖｄ）分别为２．０７和１．２０Ｌ／ｋｇ。     

虾肉中氯霉素sol-gel柱显色快速检测技术研究

试验旨在建立灵敏、快速、特异的氯霉素（CAP）检测方法,基于免疫亲和色谱技术和酶联免疫技术,研究了一种新型快速检测虾肉中CAP的免疫亲和色谱柱（ICTC）检测方法。采用溶胶-凝胶（sol-gel）法制备ICTC柱的检测层和控制层,优化检测层、控制层、酶标物（CAP-HRP）稀释度等条件,制备ICTC柱。测定ICTC柱的灵敏度、特异性等性能参数,并对虾肉样本前处理方法和基质干扰效应进行优化。本研究确定ICTC柱条件为：检测层,anti-CAP sol-gel：空白sol-gel为10：1 000（V/V）;控制层,anti-HRP sol-gel：空白sol-gel为13：1 000（V/V）;CAP-HRP的稀释度为1：10⁵。采用检测层消色法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中CAP的检测限为0.5 μg/L,该方法与甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺同类药物或代谢产物均无可见交叉反应,在虾肉样本中的检测限为0.75 μg/kg。本研究建立的ICTC柱检测方法快速、灵敏,使用方便,为现场快速检测虾肉中CAP残留提供了新的技术手段。     

UPLC-MS/MS法同时测定牛奶中替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素残留

试验旨在建立一种同时测定牛奶中替米考星（tilmicosin）、地塞米松（dexamethasone）、氟苯尼考（florfenicol）和氯霉素（chloramphenicol）的超高效液相色谱-串联质谱（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）法。牛奶样品经乙腈提取后,将提取液通过Oasis PRiME HLB固相萃取小柱净化,净化后的样液经氮吹浓缩后,用样品稀释液溶解并用正己烷进一步除去脂肪获得待分析样品,进行UPLC-MS/MS分析。采用CAPCELL PAK C18 MGⅢ-H色谱柱（2 mm×100 mm,3 μm）进行液相色谱分离,以甲醇（A）-含0.01%甲酸的0.1 mmol/L甲酸铵溶液（B）为流动相进行梯度洗脱：0~1.0 min,90%至60% B;1.0~3.0 min,60%至30% B;3.0~4.4 min,30%至20% B;4.4~4.5 min,20%~90% B;4.5~6.0 min,90% B。在多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）模式下进行质谱测定,以基质匹配标准溶液外标法定量。结果显示,替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素在1.0~100.0 μg/L范围内均具有良好的线性关系（r>0.999）。方法的最低检测限（limits of detection,LODs）为0.1~0.2 μg/kg,定量限（limits of quantity,LOQs）为0.2~0.5 μg/kg,当4种化合物在牛奶中的添加水平为0.5、5.0和25.0 μg/kg时,回收率为78.6%~94.7%,相对标准偏差（relative standard deviations,RSDs）为2.4%~10.1%。本试验建立的UPLC-MS/MS方法简便、灵敏、准确,适用于牛奶中替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素的同时测定。