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[目的]旨在探讨通过向水牛受精卵胞质内注射外源DNA实现转基因的可行性。[方法]水牛卵母细胞体外成熟20~22h后随机分为2组,①在体外受精7~10或18~20h后向卵胞质内注入约7.5pL50μg/ml含线性EGFP片段的DNA溶液;②则分别注入单个精子与约7.5pL50μg/ml含线性EGFP片段的DNA混合物,观察外源基因在胚胎发育过程中的表达情况。[结果]受精卵胞质内注射的早期胚胎基因表达率、囊胚基因表达率与ICSI-Tr差异不显著(P>0.05),且IVF7~10h时注射的分裂率、早期胚胎基因表达率均显著高于18~20h(P<0.05)。[结论]水牛IVF受精卵胞质内注射外源基因能获得转基因胚胎,且IVF后7~10h注射的效果优于IVF后18~20h注射。 相似文献
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原核注射技术已经是目前制备转基因小鼠(Mus musculus)最有效的手段,但不同实验室所报道的转基因效率差异较大,效率不高仍是该技术的主要缺点.为提高转基因小鼠的制备效率,本研究对转基因小鼠制备过程中的原核注射的多个方面都进行了改进,尤其是在注射针直径、外源基因浓度、单/双原核注射以及胚胎移植等主要步骤上的进行了优化.实验结果表明,不同浓度的外源基因对转基因小鼠的阳性率有很大影响.外源基因为1.00、2.50、3.00和4.00 μg/mL浓度时,转基因小鼠阳性率分别0.67%、14.9%、30.6%和21.4%.其中,外源基因浓度在3.00 μg/mL极显著高于其他各组(P<0.01).采用阳性率最高的3.00 μg/mL浓度又进行了单双/原核注射比较,发现转基因阳性率在进行双原核注射组显著高于单原核注射组(24.3% vs.18.3%,P<0.01).将显微注射后的2细胞时期胚胎经输卵管移植到0.5、1.5和2.5d假孕母鼠体内,产仔率分别为68.6%、67.6%和40.1%,转基因阳性率为17.4%、22.5%和10.1%.比较发现,0.5 d与1.5d代孕母鼠产仔率没有差异,但1.5d代孕组转基因阳性率(22.5%)显著高于其他组.结果表明,采用尽可能细的注射针、2~4 μg/mL的DNA载体浓度、双原核注射、1.5d的假孕母鼠和正确的胚胎移植操作,是获得高效率转基因小鼠的关键.本研究对从事动物转基因技术研究的实验室提供一些有益的借鉴. 相似文献
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高锰酸钾及甲醛对九孔鲍受精卵及面盘幼虫的毒性试验 总被引:1,自引:0,他引:1
用不同浓度高锰酸钾溶液及甲醛对九孔鲍受精卵和面盘幼虫进行毒性试验。结果表明:高锰酸钾对九孔鲍受精卵的6hLC50、12hLC50分别为:2.66×10-6,2.03×10-6,;对九孔鲍面盘幼虫的24hLC50、48hLC50和安全浓度分别为:4.34×10-6,2.82×10-6,0.357×10-6,甲醛对九孔鲍面盘幼虫的24hLC50、48hLC50和安全浓度分别为:38.5×10-6,31.05×10-6,6.05×10-6。 相似文献
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本研究将100~300 pg含有肌肉特异表达启动子和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的重组质粒(smyd1:gfp)显微注射到大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精卵动物极细胞中,通过细心培育,成功孵化出鱼苗约120尾。统计分析显示,显微注射后,大菱鲆胚胎存活率为4.8%。利用荧光显微镜观察大菱鲆胚胎及仔鱼,只在注射smyd1:gfp质粒的胚胎及仔鱼的肌肉中发现有绿色荧光。通过进一步PCR扩增检测,在注射的大菱鲆胚胎及仔鱼DNA中扩增出了GFP特异片段,大小约为340 bp。研究表明,本研究成功建立了大菱鲆显微注射技术,可为大菱鲆基因功能研究和遗传育种奠定基础。 相似文献
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花生双受精过程及其经历时间 总被引:1,自引:0,他引:1
通过石蜡切片技术研究了花生双受精作用的全过程,结果表明,开花后1 h花生的花粉管内的生殖细胞进入有丝分裂,大约3 h完成。开花后8 h左右精子已经释放到胚囊,开花后9~13 h精核分别与卵细胞和极核或次生核融合。卵细胞受精之后,直到开花后30 h合子中的2个核仁渐渐融合,进入分裂期,合子多数是横分裂,少部分纵分裂,开花后32 h合子分裂形成二细胞原胚。合子休眠期为19 h,极核在受精之前一部分融合成次生核,极核或次生核受精之后,在开花后13 h几乎大部分融合结束,其中的一个极核或次生核中出现雄性核仁,形成初生胚乳核,初生胚乳核不经休眠或极短时间的休眠在开花后15 h分裂。本研究提供了花生受精过程的雌雄性细胞融合形态变化与相应经历的时间。确定了花生合子休眠期,丰富了花生胚胎学资料,对花生育种、转基因操作等具有重要意义。 相似文献
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超排处理奶山羊获得可注射受精卵 总被引:2,自引:0,他引:2
通过对奶山羊在春秋两季分别进行同期发主超排处理发现,季节对奶山羊的超排效果影响不大,在注射LH后50-54h是奶山羊原核注射的最佳时期。 相似文献
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脉红螺繁殖生物学的研究 总被引:19,自引:3,他引:16
本文研究了脉红螺繁殖方式,繁殖季节,繁殖力,孵化,幼虫发育及变态和稚,幼螺发育过程,阐明了脉红螺在山东沿海每年只有一个繁殖期。繁殖期内亲螺有多次交尾现象,平均每年雌螺产卵2.1次,产卵袋655.9个,每个卵袋平均含有受精卵1149粒,个体繁殖力75.4万粒。 相似文献
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聚六亚甲基双胍对中国对虾受精卵和无节幼体的影响及其杀菌效果研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用PHMB(聚六亚甲基双胍)对中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)受精卵和无节幼体进行消毒处理,并与二氯异氰尿酸钠进行比较。结果显示,用PHMB对中国对虾受精卵消毒,其对孵化率无显著影响(P<0.05)的浓度为≤16×10-6μl/L;用PHMB对中国对虾无节幼体消毒,对变态率无显著影响(P<0.05)的浓度为≤4×10-6μl/L;并且其药效保持时间较长。杀菌实验证明,PHMB能够杀灭副溶血弧菌和鳗弧菌。根据本试验的结果,使用(2~3)×10-6μl/L的PHMB对中国对虾受精卵和无节幼体进行消毒处理是有效可行的。 相似文献
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