免疫血管活性肠肽调节鸡产蛋和就巢的机理研究

旨在研究免疫血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)和抑制催乳索(Prolactin,PRL)分泌对鸡产蛋和就巢的影响机制.试验1:对18周龄未开产的泰和鸡,分别在试验d1、d28、d56和d84免疫含VIP羧基端15肽片段的VIP-BSA偶联蛋白,观察对产蛋和就巢的影响.试验2:利用刚开产的23周龄粤黄鸡,在试验d1、d23、d48、d73、d98免疫VIP串联四聚体重组蛋白,观察对产蛋和就巢的影响,并在第98天检测卵泡发育和下丘脑、垂体、F1～F3级LYF颗粒层和膜层相关基因的表达.试验1中免疫VIP组在开产后高峰期(d55～d61)的产蛋率显著低于对照组,但高峰后的(d89～d103)产蛋率显著高于对照组,同时免疫VIP组的就巢发生也要迟于对照组.试验2中,VIP免疫组的产蛋率在试验初高于对照组;在d33将光照从12 h延长至16 h后,2组的产蛋率均快速上升;产蛋高峰后,免疫组产蛋率快速下降并在dS0～d105显著低于对照组.免疫VIP重组蛋白也降低了就巢的发生.2组鸡在d98的大黄卵泡、小黄卵泡和大白卵泡的数量无显著差异.免疫VIP重组蛋白并不影响下丘脑Gn-RH-Ⅰ和VIP、垂体LHβ和FSHβ的mRNA水平,但显著降低了垂体PRL的表达,也显著降低了垂体和下丘脑PRLR的表达.在检测的F1～F3卵泡组织中,免疫VIP重组蛋白也显著降低了F1和F3颗粒层的PRLR mRNA水平,降低了F1～F3颗粒层和膜层的LHR表达量,但对P450scc和StAR的表达量没有影响.两试验结果表明,免疫VIP能够降低PRL的表达和分泌,从而抑制产蛋引发的就巢发生,但是免疫VIP在抑制PRL表达分泌后也会抑制卵泡发育和产蛋,这一机制可能是通过影响卵泡组织LHR的表达而实现的.     

狮头鹅PRL基因的克隆及原核表达

为了进一步研究PRL对狮头鹅繁殖性能的生理调节机制,采用RT-PCR方法从狮头鹅脑垂体组织扩增获得PRL基因的cDNA序列,克隆至pMD18-T载体获得重组质粒pMD18-PRL,并进行序列测定和分析。将测序正确的cDNA序列定向克隆到pET32a(+),构建表达载体pET32a-PRL,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌表达目的蛋白,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测和Western Blot分析。狮头鹅PRL基因编码区含有600个核苷酸,编码199个氨基酸(GenBank No.GQ856665),与其它禽类PRL具有高度保守性;狮头鹅PRL蛋白二级结构由多个α螺旋和β转角及无规卷曲构成,推测N端70～76、95～102、150～155和207～213区段为其抗原表位的优势区。SDS-PAGE检测表明狮头鹅PRL基因在大肠杆菌中获得了高效表达,可溶性表达产物约占全菌总蛋白的53.6%,融合蛋白分子量约41ku,并用镍柱亲和层析法分离纯化融合蛋白。Western Blot分析证实了所获的融合蛋白具有较强抗原性。试验结果为进一步研究PRL基因的生物功能及其对狮头鹅就巢、产蛋等生产性状的影响奠定了基础。     

金水乌鸡PRL基因多态性研究

[目的]研究金水乌鸡PRL基因多态性,为金水乌鸡的保种和持续选育与提高积累分子基础数据。[方法]采用PCR-RFLP方法研究金水乌鸡白羽丝毛系165只乌鸡PRL基因多态性,分别采用HaeⅢ和HhaⅠ2种内切酶对各DNA样品的PCR产物进行单酶切,分析基因型与产蛋数的相关。[结果]金水乌鸡PRL基因的PCR产物的HhaⅠ酶切片段未出现多态性。金水乌鸡PRL基因的PCR产物的HaeⅢ酶切片段呈现RFLP多态性,有AA、AB、BB3种基因型,A基因频率较高。相关分析结果表明,不同基因型的产蛋数差异不显著。[结论]A基因可能是影响产蛋数的优势基因。     

Ghrelin对莎能奶山羊垂体催乳素和生长激素mRNA表达的影响

垂体催乳素和生长激素对雌性哺乳动物泌乳的启动和维持以及乳腺的发育都发挥着重要的调节作用.为探讨ghrelin对奶畜泌乳的调节作用,10只泌乳期莎能奶山羊随机分为2组(试验组和对照组),每组5只.试验组羊静脉注射ghrelin(3.0μg/kg)3 h后检测垂体催乳素(Prolactin,PRL)和生长激素(Grouth hormone,GH)mRNA的表达,结果显示一定剂量的ghrelin对催乳素mRNA的表达具显著上调作用(P<0.01);对生长激素mRNA的表达也有显著促进作用(P<0.01).结果表明,ghrelin在垂体水平上对催乳素和生长激素mRNA的表达具有上调作用,提示ghrelin可能通过对这些激素的作用参与了对奶畜泌乳的调节.     

番鸭就巢期生殖激素水平的变化规律

对番鸭就巢期不同时间的血浆生殖激素水平进行测试,揭示了不同就巢时间血浆生殖激素浓度变化的规律,并对就巢与激素之间的相关性进行分析。结果表明:(1)抱窝期血浆PRL含量(0.68±0.11ng/mL)极显著高于醒抱期的含量(0.33±0.04ng/mL)(P<0.01);(2)醒抱前后血浆LH含量差异很大,醒抱后LH含量(33.17±15.49mIU/mL)极显著高于抱窝期含量(5.56±1.99mIU/mL)(P<0.01);(3)抱窝期血浆E2含量(0.9±0.65ng/mL)极显著低于醒抱期含量(1.9±1.17ng/mL)(P<0.01);(4)PRL与LH、PRL与E2、LH与E2之间的相关系数分别为-0.923、-0.666和0.641。     

牛垂体细胞体外培养条件下催乳素分泌的调节—TRH、 GnRH、LH和PRL的影响

利用牛垂体细胞体外无血清培养技术,研究了促甲状腺素释放素(TRH)、促性腺激素释放素(GnRH)、促黄体激素(LH)和催乳素(PRL)对牛垂体细胞PRL分泌的调节。细胞在培养箱内预培养24小时后开始各项处理,以后隔24小时采集培养液一次,并换新的相同处理的培养液。结果表明:GnRH和TRH在第一次处理时均能显著增加PRL的分泌。加入1、10、100ng/ml的GnRH可使PRL分泌量分别增加53％(P<0.05)、111％(P<0.01)和60％(P<0.01),而TRH只有在10、100ng/ml的剂量时明显引起PRL释放增加(P<0.01)。第二次处理时细胞对TRH的反应消失,但对GnRH的反应却发生了逆转,PRL分别降低了70％(P<0.05)、68％(P<0.05)和73％(P<0.05)。表明GnRH和TRH在培养初期具有促进垂体细胞释放PRL的作用。LH(1、10、100ng/ml)对牛垂体细胞PRL的分泌无影响。但LH和TRH合用时,100ng/ml LH可明显地降低由TRH引起的PRL分泌(P<0.05)。PRL本身对牛垂体细胞的分泌有自我调节作用,100、1000ng/ml的PRL处理细胞使其分泌的PRL显著下降,分别降低70％(P<0.05)和100％(P<0.001)。此外1000ng/ml的PRL可显著地抑制由GnRH在第一次处理时引起的PRL释放。本实验在垂体细胞水平说明多种激素对PRL的分泌调节具有调控作用。     

Effects of photoperiod on salsolinol‐induced prolactin secretion in goats

The aim of the present study was to clarify the relation between salsolinol (SAL)‐induced prolactin (PRL) release and photoperiod in goats. A single intravenous (i.v.) injection of SAL was given to adult female goats under short (8 h light, 16 h dark) or long (16 h light, 8 h dark) photoperiod conditions at two different ambient temperatures (20°C or 5°C), and the PRL‐releasing response to SAL was compared to that of thyrotropin‐releasing hormone (TRH) or a dopamine (DA) receptor antagonist, sulpiride. SAL, as well as TRH or sulpiride, stimulated the release of PRL promptly after each injection in both 8‐ and 16‐h daily photoperiods at 20°C (P < 0.05). The area under the response curve (AUC) of PRL for the 60‐min period after injections of saline (controls), SAL, TRH and sulpiride in the 16‐h daily photoperiod group was greater than each corresponding value in the 8‐h daily photoperiod group (P < 0.05). There were no significant differences in the AUC of PRL among the values produced after the injection of SAL, TRH and sulpiride in 16‐h daily photoperiod group; however, the values produced after the injection of TRH were smallest among the three in the 8‐h daily photoperiod group (P < 0.05). The PRL‐releasing responses to SAL, TRH and sulpiride under a short and long photoperiod condition at 5°C resembled those at 20°C. These results show that a long photoperiod highly enhances the PRL‐releasing response to SAL as well as TRH or sulpiride in either medium or low ambient temperature in goats.     

高邮鸭PRL基因内含子1的SNP检测及其与产蛋性状的相关分析

利用PCR—RFLP技术对高邮鸭催乳素（Prolactin，PRL）基因内含子1进行了SNP检测和测序分析，并对该基因与高邮鸭产蛋性状的相关性进行了研究。结果表明：PRL基因内含子1存在两个Dra Ⅰ酶切位点，其中1个位点具有DraⅠ多态性。该位点由于在1326位点发生了T→C的碱基突变，产生了AA、AB和BB3种基因型。基因型BB和等位基因B的频率最高；BB基因型个体30周龄蛋重极显著高于AB基因型个体（P〈0．01）；AB基因型个体的双黄率显著高于BB基因型个体（P〈0．05）；3种基因型间产蛋数、最长连产天数和开产体重无显著差异。     

泌乳奶山羊非繁殖季节诱发发情研究

奶山羊具有明显的季节性发情的特点,在非繁殖季节里,泌乳母羊体内的催乳素水平要高于繁殖季节,从而抑制了卵巢的生理机能。本研究采用具有抑制催乳素分泌作用的溴隐亭(CB-154,Parlodel)药物来降低母羊体内的催乳素水平,配合使用促性腺激素,提高泌乳母羊的诱发发情率,使配种后不返情率达到80％(28/35)。     

光照时间对兴国灰鹅产蛋和PRL、FSHβ、LH mRNA表达的影响

为研究光照时间对兴国灰鹅产蛋量及产蛋性状相关基因在下丘脑-垂体-性腺轴表达水平的影响,对兴国灰鹅分别进行长光照处理(试验组)和自然光照处理(对照组)。结果发现,整个试验阶段,对照组持续产蛋,产蛋率维持在10%以上,处理组在接受递增式长光照至40 d左右时,产蛋率下降到8%左右,并于试验第47天停产。基因表达水平方面,相对于对照组产蛋期鹅,试验组鹅下丘脑中催乳素(PRL)的mRNA表达水平与输卵管和卵巢中促卵泡素(FSHβ)的表达水平均显著升高,而卵巢中黄体生成素(LH)的mRNA表达水平显著降低。这些结果表明长光照可通过影响PRL的mRNA表达,从而导致FSHβ和LH表达比例失调,最终影响FSHβ和LH的协同作用,从而抑制兴国灰鹅的产蛋活动。