幼建鲤磷缺乏的组织病理观察

为研究饲料不同磷水平对吉富罗非鱼营养代谢及肠道微生物的影响,实验以磷酸二氢钙作为磷源,配制成总磷含量为0.26%(低磷组)、0.81%(适磷组)和1.51%(高磷组)的3组等氮等能饲料,每种饲料为一个处理,每个处理设置4个重复,每个重复30尾鱼,用3种饲料分别饲喂初始体重为(8.42±0.09) g的吉富罗非鱼8周。结果显示,适磷组吉富罗非鱼的增重率和特定生长率显著高于低磷组和高磷组,饲料系数在适磷组最低。脏体比、肝体比和肥满度随饲料磷水平的升高呈逐渐下降趋势。随着饲料磷水平的增加,吉富罗非鱼干物质、粗蛋白、粗脂肪、磷的表观消化率显著降低。对筛选到的差异代谢物进行KEGG注释和富集分析发现,饲料磷缺乏时下调的差异代谢物主要富集的代谢通路为氰胺酸代谢、葡萄糖酸酯的生物合成、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,上调的差异代谢物主要富集的代谢通路为脂肪酸合成;当饲料磷过量时下调的差异代谢物主要富集代谢通路为精氨酸和脯氨酸代谢、苯丙酸的生物合成,上调的差异代谢物主要富集代谢通路为氨基糖和核苷酸糖的代谢。Ace、Chao1和Shannon指数表明,吉富罗非鱼肠道菌群丰度和多样性随着饲料磷水平的升高呈现升高趋势。厚壁菌门、放线菌门、变形菌门和拟杆菌门为吉富罗非鱼肠道菌群中的优势菌门。罗姆布茨菌属、鲸杆菌属等有益菌属的丰度在适磷组最高,分枝杆菌属和拟杆菌属的丰度随饲料磷含量的增加呈下降趋势。本研究表明,饲料中适量的磷能提高吉富罗非鱼对饲料的表观消化率,磷缺乏和过量会抑制吉富罗非鱼的氨基酸代谢,磷缺乏会加快脂肪酸合成进程;饲料中适量磷可以提高菌群丰度和多样性,有利于肠道健康。

     

尼罗罗非鱼（♀）萨罗罗非鱼（♂）杂交F2与F3群体遗传特征的微卫星分析

利用罗非鱼第二代遗传连锁图谱中微卫星标记对尼罗罗非鱼( Oreochromis niloticus) ( ♀) 萨罗罗非鱼( Sarotherodon melanotheron) ( ♂) 杂交后代F2、F3 群体遗传特征进行了初步比较分析。结果显示, 28 对引物中有22 对引物能有效扩增, 未观察到杂交后代F2、F3 中有多倍体个体现象。筛选出7 个在尼萨罗非鱼杂交后代F2、F3 群体中存在差异的位点。杂交F2 群体平均等位基因( Na) 为2. 71, 平均多态信息含量( PIC) 为0. 466, 平均观测杂合度( Ho) 为0. 632; 杂交F3 群体平均Na为2. 14, 平均PIC 为0. 370, 平均Ho为0. 432, 杂交F3 遗传杂合性较杂交F2 降低。F2 自繁F3 过程中, F3 群体4 个位点的等位基因与F2 完全相同, 3 个位点的等位基因少于F2 , 且 F3 群体在2 个位点出现完全纯合, 杂交F3 群体位点等位基因呈现纯合趋势。研究结果为尼萨罗非鱼杂交世代遗传变异与杂交利用积累基础资料。     

尼罗罗非鱼铁调素调节蛋白在宿主抵御病原菌侵染和调节铁稳态中的功能

为了研究铁调素调节蛋白(hemojuvelin,HJV)在硬骨鱼中抵御病原菌感染和维持自身铁稳态过程中的作用,实验扩增了尼罗罗非鱼铁调素调节蛋白基因(Onhjv)的开放阅读框(ORF),分析其在健康尼罗罗非鱼各组织中的分布模式及在抵御病原菌感染和调节铁稳态中的相关作用。结果显示,Onhjv的ORF全长由1 248个碱基组成,编码415个氨基酸,在不同物种之间具有一定的保守性。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Onhjv在尼罗罗非鱼各组织中广泛分布,并在肝脏中的表达量最高。在无乳链球菌或嗜水气单胞菌感染后,Onhjv在肝脏、脾脏、肠和鳃中的表达量均显著上调。体外头肾单核/巨噬细胞和肝细胞中Onhjv表达量在受到这2种病原菌应激下也显著上调。此外,在1和10μmol/L FeCl_3溶液刺激后,Onhjv表达量在肝脏、脾脏、肠和鳃等组织,以及头肾单核/巨噬细胞和肝细胞中的表达量也呈显著上调。受重组罗非鱼IL-6蛋白[(r)OnIL-6]刺激后,头肾单核/巨噬细胞中Onhjv表达量显著上调,表明炎症因子可以促进Onhjv表达。研究表明,尼罗罗非鱼铁调素调节蛋白在宿主抵御病原菌感染和维持铁稳态的过程中发挥作用。本实验为探究HJV在硬骨鱼中的生物学功能提供了参考,同时为进一步研究铁代谢在宿主防御病原菌感染过程中的重要作用提供理论指导。     

设施内外人面竹夏季光合作用日变化及影响因子研究

2012年7月对设施及露地栽培的人面竹(Phyllostachys aurea Carr.exA.et C.Riv)光合作用及其影响因子进行了研究。分析设施栽培条件下人面竹净光合速率日变化规律,以及设施内外光照强度、温度、湿度、CO2浓度等因子的差异性,试图为设施栽培人面竹提供合理的栽培模式及理论依据。结果表明,设施内有降温措施和无降温措施条件下,人面竹净光合速率日变化曲线均呈双峰型,但露天条件下人面竹净光合速率日变化曲线双峰型特点不明显,日均Pn设施内有降温Pn设施无降温Pn露天;HR设施内HR露天、PAR设施内PAR露天、CO2浓度设施内CO2浓度露天,夏季高温高光强是导致人面竹出现"午休现象"主要原因,设施内应采取降温控湿措施有利于人面竹提高光合效率。     

Generation of mouse monoclonal antibodies specific to tilapia immunoglobulin using fish immunoglobulin/BSA complex for monitoring of the immune response in Nile tilapia Oreochromis niloticus

The simple immunoprecipitation method was used to isolate tilapia immunoglobulin (Ig) for immunization in order to produce monoclonal antibodies (MAbs) specific to tilapia Ig. First, the tilapia antiserum against bovine serum albumin (BSA) was prepared by peritoneal injection of BSA into tilapia, and the tilapia anti‐BSA antiserum was used to precipitate BSA to form the Ig/BSA immune complex. The Ig/BSA immune complex was then injected into Swiss mice for hybridoma production. After fusion, three hybridoma clones producing MAbs specific to the tilapia antibody were selected by dot blot and Western blot. All MAbs (101A, 59G, and 11A) were bound specifically to the heavy chain of immunoglobulin M (IgM). The MAbs 101A and 59G demonstrated twofold higher affinity than MAb 11A and the commercialized antibody. However, MAbs 11A could also bind to the heavy chain of IgM in Asian seabass, Lates calcarifer, as well. These MAbs can be used to monitor the immune responses of individual fish by indirect ELISA upon exposure to various antigens.     

Apparent digestibility coefficient of protein and amino acids of acid, biological and enzymatic silage for Nile tilapia (Oreochromis niloticus)

Using the fish silage to partially replace proteic feedstuff in aquafeeds is an alternative to mitigate sanitary and environmental problems caused by the lack of adequate destination for fisheries residues. It would also lower feed costs, consequently improving fish culture profitability. However, using fish silages in aquafeeds depends on determination of its apparent digestibility coefficients (ADC). This work aimed to determining the ADC of crude protein and amino acids of acid silage (AS), biological silage (BS) and enzymatic silage (ES) for juvenile Nile tilapia (94.5 ± 12.7 g). The ADC_CP was: 92.0%, 89.1% and 93.7% for AS, BS and SE respectively. The average ADC of amino acids was: 91.8%, 90.8% and 94.6% for AS, BS and ES respectively. Results encourage the use of AS, BS and ES to partially replace protein sources in balanced diets for neotropical fish.     

不同生长阶段尼罗罗非鱼IGF1基因表达分析

为阐明IGF1基因在罗非鱼生长过程中的表达规律,为罗非鱼的分子选育等工作奠定了理论基础,本实验利用实时荧光定量PCR技术跟踪尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)在不同生长阶段（0、20、40、60、80、125、145、165、185、205天）肝脏和肌肉胰岛素样生长因子1(IGF1)基因表达的发育性变化。结果表明：实验鱼的体重增长过程可以分为快速生长期和平稳期。在快速生长期时,肝脏IGF1基因表达水平较高,平稳期时较低,肝脏中IGF1基因表达情况与体重增长趋势基本吻合。肌肉中IGF1基因mRNA含量要低得多,而且表达模式与肝脏IGF1基因不相同。研究结果提示：IGF1 mRNA的表达具有明显的时空变化和组织特异性。肝脏中IGF1基因的表达量变化与罗非鱼体重增长趋势一致。肌肉中IGF1表达模式与肝脏中不同,提示肌肉中IGF1的分泌和作用有其自身的特异性。     

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的克隆及原核表达

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠杆菌表达系统可以成功地体外表达奥利亚罗非鱼GnRH,为进一步制备抗体了解其免疫调节作用奠定基础。     

铜、锰诱导吉富罗非鱼血细胞凋亡及铁、锌的干预作用(英文)

为了研究重金属铜与锰对吉富罗非鱼血细胞凋亡的影响以及铁、锌的拮抗作用,采用原子吸收分光光度法检测血液及饲料中重金属的含量,采用流式细胞术检测实验鱼血细胞凋亡情况。360尾吉富罗非鱼幼鱼随机分为12组,每组30尾,分别以硫酸铜(0、2 000mg/kg)、硫酸锰(0、120 mg/kg)为攻毒组重金属源,以硫酸锌(20、320 mg/kg)、硫酸铁(150、350mg/kg)为拮抗组金属源,通过饲料投喂的方式进行血细胞凋亡的研究,养殖周期为20周。细胞凋亡分析结果表明,染铜组、染锰组实验鱼血细胞凋亡率显著高于对照组;补充铁和锌后,随着饲料添加铁、锌水平的增加,实验鱼血细胞凋亡率明显下降,但铁、锌干预组血细胞凋亡率显著高于对照组。试验表明,过量铜、锰可诱发实验罗非鱼血细胞凋亡;较高水平的铁、锌对铜、锰的毒性作用具有拮抗作用。     

饲料糖脂比对吉富罗非鱼生长、血液指标和肝脏糖代谢关键酶活性及基因表达的影响

为探讨糖脂比对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、血液生化指标和肝脏糖代谢关键酶的影响,本实验设计了5种不同糖脂比(1.5、2.3、3.9、7.0、16.5)的等氮等能饲料,以吉富罗非鱼幼鱼为实验对象,进行了为期8周的饲养实验。结果显示,随饲料中糖脂比升高,吉富罗非鱼特定生长率(SGR)、增重率(WGR)和蛋白质效率(PER)先升高后降低,糖脂比为3.9和7.0时,WGR、SGR和PER最高。饵料系数(FCR)的变化趋势与此相反,在糖脂比为3.9和7.0组显著低于其他组。随着饲料糖脂比的增加,吉富罗非鱼全鱼粗脂肪含量逐渐下降,在糖脂比为16.5时达到最低水平,但仅与1.5组存在显著差异。血浆甘油三酯在糖脂比最高组也出现显著降低,血浆胆固醇同样在糖脂比最高组显著低于3.9组。然而血糖的变化趋势相反,当糖脂比为16.5时显著高于其他组。随着糖脂比的升高,吉富罗非鱼幼鱼肝脏中丙酮酸激酶(PK)的活性及mRNA表达量逐渐升高,而磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的活性及mRNA表达水平则逐渐下降。根据二次回归模型得出,在等氮等能的饲料条件下,吉富罗非鱼幼鱼最适宜的糖水平和脂肪水平分别为49.69%和9.53%,其对应的糖脂比为8.4。