刺参感染细菌后免疫相关因子的表达研究

刺参是一种重要的极具经济价值的养殖棘皮动物.在应对免疫应激或环境压力时,NF-κB/Rel转录因子,作为关键调控子,在调控免疫相关基因的表达过程中发挥着重要作用.作为刺参体内天然免疫系统中的关键酶,溶菌酶在防御刺参病原菌入侵过程中也发挥了重要作用.该研究对刺参感染病原菌后NF-κB/Rel和溶菌酶mRNA的表达情况进行了研究.感染细菌后,Aj-rel mRNA的转录水平显著升高,在10 min时达到峰值,是对照组的3.26倍(P＜0.05).Aj-p105基因的表达水平也呈现了上升的趋势,在240 min时达到峰值,是对照组的6.12倍(P＜0.05).Aj-p50 mRNA的表达水平呈现了下降的趋势,在10 min时达到峰值,是对照组的17.80倍(P＜0.05).溶菌酶mRNA的表达水平分别在10 min和240 min时达到峰值,分别是对照组的1.54倍(P＜0.05)和2.48倍(P＜0.05).该研究将为进一步了解棘皮动物的免疫防御机制提供参考,为疾病控制提供启示.     

溶菌酶快速诱导蜡样芽孢杆菌L型的研究

[目的]研究溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型的技术条件。[方法]利用溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型,观察其形成、形态、生长及其对渗透压的敏感性等特性。[结果]在培养基中加入2 mg/ml的溶菌酶能够较好地诱导蜡样芽孢杆菌L型的产生,通过连续的培养获得了稳定的L型蜡样芽孢杆菌。L型蜡样芽孢杆菌呈球状,革兰氏染色阴性,对渗透压敏感。[结论]确定了蜡样芽孢杆菌溶菌酶法诱导L型的最佳浓度。     

荧光相图法研究溶菌酶在盐酸胍溶液中的变性

采用荧光相图法分析盐酸胍诱导溶菌酶变性的荧光数据,建立溶菌酶在盐酸胍溶液中失活的变性模型。结果表明,盐酸胍浓度从0.5mol/L变化至3.0mol/L时,溶菌酶从天然态转变为部分折叠中间态,盐酸胍浓度从3.0mol/L变化至6.0mol/L时,溶菌酶从中间态转变为去折叠态。说明盐酸胍诱导溶菌酶变性的过程符合典型的＂三态模型＂。     

基于文献计量学的国外溶菌酶研究分析

运用文献计量学方法,从文献的期刊分布、研究热点、增长规律、作者区域分布等方面对1990～2009年Elsevier数据库收录的溶菌酶研究论文进行了统计分析,揭示了目前国际上溶菌酶研究的现状、动态和发展趋势。     

光周期对点带石斑鱼幼鱼生长及肝脏溶菌酶活性的影响

[目的]研究不同光周期对点带石斑鱼幼鱼生长、摄食及肝脏溶菌酶活性的影响。[方法]试验设计持续光照组、对照组、持续黑暗组,每组3个平行,计算生长率,测定肝脏溶菌酶活性,并作比较。[结果]持续光照组与其他2组相比,相对增重率与溶菌酶活性均最高,相对增重率为对照组的107.3%,溶菌酶活性为对照组的103.4%;对照组与持续光照组差异不显著;持续黑暗组显著低于对照组。[结论]点带石斑鱼幼鱼的生长、免疫及行为与光周期有紧密联系。     

重组海参溶菌酶C端基因(SjLys-C)的可溶性表达和抑菌活性分析

为进一步研究海参(Stichopus japonicus)溶菌酶基因(Sjys)(Genbank登录号:EF036468)中不司片段表达产物的生物特性,本研究通过对其cDNA片段的分析,发现C端基因区域所对应的蛋白质序列中含有非酶活性.根据已知的海参溶菌酶的cDNA序列,设计山含有Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的特异性引物,从新鲜的海参肠中提取总RNA,以其为模板利用RT-PCR扩增出长度为259 bp的溶菌酶C端(SjLys-C)基因.将该目的基因连接到pET-32a(+)载体上,构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-C,再转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组蛋白SjLys-C的基因工程菌.利用该工程菌诱导发酵,结果显示它能高效表达出26 kD左右的重组蚩白SjLys-C.经过Western blot分析,该重组蛋白在26 kD左右能够与Penta-His抗体发生特异性免疫反应.对纯化的重组蛋白SjLys-C进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)和副溶血弧菌(Vibrio parahae molytic us)有较高的抑菌活性.此外,将该重组蛋白经100℃、40 min处理后,其抑菌能力提高了5％～21％.研究结果表明,重组蛋白SjLys-C基因工程菌能够制备出具有可溶性的、并具有抑菌活性的重组蛋白SjLys-C,在农业和医药等行业中有潜在应用和开发价值.     

新型饲料添加剂药性菌质对鲫鱼生长免疫与养殖水体的影响

将药用真菌灵芝接种于固体培养基进行固体发酵, 得到药性菌质, 并将其作为饲料添加剂, 分别按0. 5%、1. 0%、2. 0%的比例添加到鲫基础日粮中, 通过检测鲫肝、肠中溶菌酶含量和养殖水体的pH、氨氮、溶氧等指标以及称其体重, 以研究其对鲫非特异性免疫功能及促生长的影响和药性菌质对养殖水体的影响。结果表明, 在饲料中添加一定比例的药用真菌发酵产物都能够提高鲫肝、肠溶菌酶活性水平, 其中以在日粮中添加比例为0. 5%的肝中溶菌酶活性最高(P < 0. 05); 而添加1. 0%的肠中溶菌酶活性最高(P < 0. 05); 添加1. 0%的鲫体增重比对照组提高了2. 9%, 而不同比例的药性菌质对水质的pH 高于对照组, 水中氨氮浓度低于对照组, 与对照组相比溶氧 量变化甚小, 试验组各项测定结果呈现一定的波动, 但试验组与对照组间各项测定指标均无显著差异(P > 0.05)。药性菌质可改善鲫的非特异性免疫功能、促进其生长、增强鱼体代谢, 但对养殖水体影响较小。     

溶菌酶在蛋糕防腐中的应用效果

选择天然防腐剂溶菌酶对蛋糕进行防腐试验,旨在减少蛋糕中化学防腐剂的使用量.结果表明:60℃条件下对溶菌酶加热45 min,抑菌效果较好.0.05%的溶菌酶对蛋糕起到较好的防腐效果.     

盐度胁迫对许氏平鲉血液免疫酶活力的影响

研究了急性、慢性盐度胁迫对许氏平鲉体重及血液免疫相关酶活力的影响。慢性盐度胁迫实验表明,在盐度5的水体中,许氏平鲉体重增长率为负值,其余各盐度组(10、20、40)的生长指标与自然海水组(盐度33)差异不显著(P>0·05);随海水盐度的降低,许氏平鲉的溶菌酶活力逐渐上升,但当盐度降至5时,其活力与自然海水组无显著性差异;血液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力随海水盐度降低呈逐渐上升趋势。急性盐度胁迫实验证实,在盐度5、10的急性胁迫初期,许氏平鲉血液的各项免疫酶活力波动较大。溶菌酶活力在胁迫24h时达到峰值,之后逐渐下降;血液SOD活力在96h检测过程中呈高低起伏变化趋势;血液CAT活力在胁迫初期持续降低,12h后逐步稳定在较低水平,显著低于胁迫前血液CAT活力(P<0·05)。     

盐度胁迫对许氏平鲇血液免疫酶活力的影响

研究了急性、慢性盐度胁迫对许氏平鲇体重及血液免疫相关酶活力的影响。慢性盐度胁迫实验表明，在盐度5的水体中，许氏平鲇体重增长率为负值，其余各盐度组（10、20、40）的生长指标与自然海水组（盐度33）差异不显著（P〉0．05）；随海水盐度的降低，许氏平鲇的溶茵酶活力逐渐上升，但当盐度降至5时，其活力与自然海水组无显著性差异；血液中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活力随海水盐度降低呈逐渐上升趋势。急性盐度胁迫实验证实，在盐度5、10的急性胁迫初期，许氏平鲇血液的各项免疫酶活力波动较大。溶菌酶活力在胁迫24h时达到峰值，之后逐渐下降；血液SoD活力在96h检测过程中呈高低起伏变化趋势；血液CAT活力在胁迫初期持续降低，12h后逐步稳定在较低水平，显著低于胁迫前血液CAT活力（P〈0．05）。