rpoS对鳗弧菌MHK3株Hcp表达和杀菌能力的影响

溶血素共调节蛋白(Hcp)的合成和分泌是六型分泌系统(T6SS)行使功能的重要特征。RNA聚合酶的σ亚基RpoS参与调节细菌的生长和应激反应。为了探究RpoS对鳗弧菌(Vibrio anguillarum) T6SS的调控作用，本研究构建了MHK3?rpoS突变株，检测了部分表型特征的变化；利用lacZ半乳糖苷酶报告基因检测了突变株hcp1和hcp2在转录水平的变化；进行Western blot并定量分析突变株Hcp在翻译水平的变化；并通过细菌拮抗实验检测了突变株杀菌能力的变化。结果显示，MHK3?rpoS突变株的生长情况、泳动性、明胶酶活性及酪蛋白酶活性与MHK3野生株相比无显著差异(P>0.05)，而平台早期的菌膜形成能力有显著上升(P<0.05)；在各生长时期，MHK3?rpoS的hcp1和hcp2在转录水平的表达量均较MHK3有显著上升(P<0.01)，最高时分别为MHK3的1.79倍和1.94倍；在翻译水平上，MHK3?rpoS在胞内和胞外Hcp的分泌均有显著升高(P<0.05)，最高时分别为MHK3的1.59倍和1.31倍；同时，MHK3?rpoS对大肠杆菌(Escherichia coli) E5的杀菌能力约为MHK3的1%。研究表明，rpoS对鳗弧菌MHK3株的生长情况、泳动性、明胶酶活性及酪蛋白酶活性均无显著调控作用，但对平台早期的菌膜形成能力具有一定的负调控作用，在转录和翻译水平上也负调控Hcp的表达。而在杀菌能力上，rpoS发挥一定的正调控作用。说明菌株的杀菌能力强弱并非直接与Hcp的表达和分泌量正相关。本研究为进一步阐明T6SS的调控机制及其介导的杀菌作用机制提供了新思路，并丰富了其理论基础。