奥利亚罗非鱼DMO cDNA的分离和克隆

采用RTPCR和RACE法分离和测定了奥利亚罗非鱼DMOcDNA的全序列。得到1571bp[不含poly(A)]的全长cDNA,包括148bp5’非翻译区,1230bp阅读框以及含Poly(A)信号AATAAA的193bp3’非翻译区[不包括Poly(A)]。阅读框共编码409氨基酸,与尼罗罗非鱼DMO编码的氨基酸序列进行比较,同源性为96.3%,表明DMO在同一物种中差别较小。而与尼罗罗非鱼,红鳍东方豚,虹鳟,青鱼将,鼠,人等动物的DMRT1编码的氨基酸序列进行比较,同源性分别为:25.7%,25.8%,24.3%,29.7%,22.5%,22.0%,这说明DMO和DMRT1可能是两个不同的基因。     

奥利来罗非鱼DMO和DMT基因的时空表达特征分析

采用荧光定量RT-PCR方法对奥利亚罗非鱼DMO和DMT基因的时空表达进行了研究。结果发现，这两个基因均从原肠胚早期开始转录，一直到出膜，都维持着较高的表达水平，但DMO表达量明显高于DMT。从鱼苗孵化出膜的第1天开始，随着日龄的增加，DMO和DMT基因的表达量均增加，但DMO在性腺和脑中都能表达，而DMT则仅在精巢中专一性表达。鱼苗性腺分化时期，也可影响DMO和DMT基因的表达量，提示它们可能与激素调控有关。在雌、雄鱼的肝和肾等5种组织中均检测不到这两个基因转录本的存在；在脑中仅可检测到DMO基因不同强弱的转录本，呈现出很强的中枢神经系统的表达特异性。此外，在成体的卵巢和精巢中分别只可检测到DMO和DMT基因的大量表达，显示二者在性别决定和分化中的重要功能。奥利亚罗非鱼DMO基因在其中枢神经系统发育及卵巢发生和功能维持上有着重要功能；DMT基因在精巢发生和功能维持上起重要作用