AuroraA激酶在猪卵母细胞成熟分裂过程中的动态分布及其与微管蛋白相关性分析

为探讨Aurora A激酶在猪卵母细胞成熟过程中的动态分布及其与细胞微管蛋白相关性,采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微成像技术,检测Aurora A蛋白的动态分布与亚细胞定位,然后分别使用Aurora A特异性抑制剂(MLN-8054)、微管蛋白抑制剂(秋水仙素)处理猪卵母细胞,研究Aurora A与细胞骨架分布的相关性。结果显示:在生发泡(GV)期,Aurora A主要分布在细胞质中,在第一次和第二次减数分裂中期,即MⅠ和MⅡ期,Aurora A则主要伴随着纺锤体分布,与纺锤体有着相似的亚细胞定位;使用Aurora A特异性抑制剂MLN-8054处理细胞后,与对照组相比,纺锤体形态异常的比例显著增加;使用秋水仙素处理细胞后,α-微管蛋白结构紊乱地分布在染色体周围或消失,而Aurora A蛋白或以异常形态伴随纺锤体分布,或消失。结果表明:猪卵母细胞成熟分裂过程中Aurora A与纺缍体微管的分布密切相关,并具有明显的阶段性特点,Aurora A可能通过参与调节纺锤体微管的组装进而参与猪卵母细胞减数分裂的调控。     

细胞骨架在猪GV期与MⅡ期卵母细胞的分布规律

采用免疫荧光技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察并分析猪GV期和MⅡ期卵母细胞的细胞骨架分布。结果发现,猪新鲜GV期与MⅡ期卵母细胞的微管、微丝和染色体结构与分布,具有不同的特点和规律。在GV期卵母细胞,结构完整的微管尚未形成;染色体未发生致密化,仍存在于生发泡内;而微丝则分布于质膜下及整个胞质中。MⅡ期卵母细胞的微管,主要存在于纺锤体上,少量微管出现在第一极体周围;染色体排列于纺锤体赤道板上;微丝均匀分布于质膜下。本研究表明,微管、微丝和染色体三者间密切联系、相互作用,共同参与卵母细胞成熟与发育进程的调控。     

MSTN基因对牛肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响

为探究肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）对牛骨骼肌生长发育的作用机制,本研究前期利用定量蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学分析野生型蒙古牛（MG.WT）和MSTN^+/-蒙古牛（MG.MSTN^+/-）腿臀肌肌肉组织中蛋白质水平和磷酸化修饰水平的差异变化,使用已建立的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型,检测设计合成的MSTN siRNA （si-MSTN）干扰效果;采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测转染si-MSTN的增殖期（GM）和分化第3天（DM3）牛骨骼肌卫星细胞中肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的mRNA和蛋白水平的表达变化,研究敲低MSTN表达对肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响。结果显示,在MSTN^+/-蒙古牛肌肉组织中共鉴定到16个肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因表达丰度上调;转染si-MSTN细胞中的MSTN表达水平极显著降低（P<0.01）;在转染si-MSTN的GM期牛骨骼肌卫星细胞中,肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因ENAH、ACTN4和Cdc42的mRNA水平均显著升高（P<0.05）,PFN1、RhoA和ACTN4的蛋白水平均显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）;在转染si-MSTN的DM3牛骨骼肌卫星细胞中,ENAH、CFL1、SCIN和Cdc42基因mRNA水平均显著升高（P<0.05）,RhoA基因mRNA水平极显著升高（P<0.01）,PFN1和ACTN4的蛋白水平均显著升高（P<0.05）。结果表明,干扰MSTN可以促进肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的表达,探明了MSTN可能通过介导肌动蛋白细胞骨架调节通路影响牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的分子机制,为进一步研究MSTN对牛成肌分化的调控机制提供参考。     

HgCl2和甘露醇对细胞骨架调控气孔开放的影响

传统观点认为水分可自由顺渗透梯度跨质膜进入细胞，最新研究表明水分可以通过膜上的水通道运动。水通道（waterchannels）或水通道蛋白（aquaporins）的发现使人们对水分运动的观念发生了变化。水通道是一种仅让水分通过而限制离子运动的选择性通道（Chrispeels＆Agre，1994，TIBS，19：421～425）。植物中水通道蛋白首先是在液泡膜上发现的，最近在质膜上也发现有水通道蛋白。水通道的研究除了用分子生物学方法外还可用汞试剂处理组织或细胞并测量水分转运的变化，进而推测水通道的存在。植物组织中已有用（p－chloromercuri－Phenylsu…     

全氟辛酸对小鼠卵母细胞的毒性影响

【目的】研究全氟辛酸(Perfuorooctanoic aid,PFOA)对小鼠卵母细胞的毒性影响。【方法】选用6周龄体质量相近的昆明雌性小鼠160只,分为4组,每组5个重复,每个重复8只小鼠。在适应环境7 d后开始对小鼠灌服不同剂量的PFOA,其中,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组的每日剂量分别为0、 5、 10和20 mg/kg,连续灌服14 d,然后利用孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)和人绒毛促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,hCG)对各组小鼠进行超数排卵,获取卵母细胞进行检测。【结果】与对照组相比,PFOA中、高剂量组小鼠的卵母细胞成熟率分别下降了14.28%、28.17%;卵母细胞内活性氧含量分别升高了135%、177%;而且卵母细胞β-tubulin形态异常,染色体非整齐排列的比例分别升高了65.06%、75.60%。此外,低、中、高剂量组PFOA处理后小鼠的卵母细胞内磷酸化组蛋白H2AX(Phospho-histone H2A.X,P-H2A.X)比例分别比对照组升高了...     

猪卵母细胞中Aurora-B的定位与功能

Aurora-B是一种在细胞有丝分裂过程中起重要调控作用的丝氨酸/苏氨酸激酶,在哺乳动物卵母细胞减数分裂过程中的表达、定位与功能研究较少,相关猪的尚未见报道。本实验采用特异性抑制剂处理猪(Susscrofa)卵母细胞,研究其减数分裂过程中Aurora-B的表达、亚细胞定位与功能作用。激光共聚焦显微镜分析表明,Aurora-B均匀分布在生发泡(GV)期卵母细胞质中;生发泡破裂后,Aurora-B主要集中在浓缩染色质的周围,并随纺锤体的装配和染色体的分离而发生相应的迁移。使用Aurora-B特异性抑制剂AZD-1152处理后,阻滞在Pro MⅠ-AITI期卵母细胞与对照组相比有显著增加(P0.05),MⅡ期卵母细胞显著降低(P0.05),同时MⅡ期卵母细胞染色体的排列发生紊乱、纺锤体形态异常,并出现一定程度的微丝断裂和分散。抑制猪卵母细胞Aurora-B的表达,其孤雌胚胎的发育将受严重影响。本研究表明,Aurora-B可能在猪卵母细胞减数分裂过程中对于微管装配、染色体分离等,起着关键的调控作用。     

铜对体外仔猪软骨细胞增殖和细胞骨架的影响

体外分离、培养仔猪关节软骨细胞,在细胞培养液中分别添加铜0、7.8、15.6、31.2、62.5μmol/L。结果表明,软骨细胞在4种铜浓度中可存活并增殖,但随铜浓度的增加,其存活率、增殖率、3H-TdR掺入率有明显的差异,且能破坏软骨细胞骨架。培养液中添加铜31.2μmol/L,对软骨细胞的增殖作用最强,增殖率、3H-TdR掺入数显著高于对照组(P<0.01),软骨细胞形态及骨架均正常。表明31.2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖的最适浓度。     

微管、微丝特异性抑制剂处理对水稻抗病性的影响

 微管特异性抑制剂oryzalin、微丝特异性抑制剂细胞松弛素A (cytochalasin A,CA)和细胞松弛素D (cytochalasin D,CD)的试验表明:oryzalin在5~50μmol/L、CA在0.5~1.0μg/mL、CD在1~20μg/mL的浓度范围内,对稻瘟病菌孢子的萌发和附着胞的形成基本上没有影响。采用以上几种细胞骨架特异性抑制剂处理水稻叶鞘都可以不同程度地抑制寄主细胞抗病菌扩展的能力。在抑制剂处理的水稻叶鞘细胞中,病菌扩展的速度加快。进一步的观察发现,抑制剂处理抑制水稻细胞抗病菌的扩展能力与水稻的抗病防卫反应如原生质颗粒化、多酚类物质的积累和HR发生的延迟是相关的。     

细胞骨架解聚药物对小麦与叶锈菌互作诱发的细胞过敏性反应的影响

 小麦(Triticum aestivum)品种洛夫林10和叶锈菌小种366组成不亲和组合,小麦叶片发生过敏性坏死反应(HR)是小麦抵抗叶锈菌侵染的重要因素。在接种前给小麦叶片分别预注射微管解聚药物磺草硝(oryzalin)和微丝解聚药物细胞松弛素D (cytochalasin D,CD),结果表明2种药物注射使得寄主因叶锈菌侵染诱导的细胞过敏性坏死数目明显减少,并且注射药物的浓度越大,寄主细胞发生HR的数量越少。说明肌动蛋白和微管蛋白的聚合状态是诱发小麦叶片发生HR防卫反应所必需的,细胞骨架在小麦抵抗叶锈菌侵染过程中可能起着重要作用。     

巴西橡胶树叶肉细胞原生质体中细胞骨架结构及动态观察

细胞骨架通过结构的重排在植物响应逆境胁迫的过程中起着重要作用。本研究克隆真菌微丝结合蛋白的一段保守结构域lifeact及小鼠MAP4的微管结合结构域MBD,构建与荧光蛋白EGFP融合表达的瞬时表达载体,利用原生质体瞬时表达体系成功观察到了橡胶树叶肉细胞中微丝和微管骨架的结构,并通过对原生质体细胞进行不同处理观察胞内微丝和微管骨架的结构变化。此外,本研究还成功的捕捉到橡胶树原生质体细胞中微丝及微管的动态行为。