黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的累加细胞毒性研究

由于饲料中多种霉菌毒素并存的几率比较高，本研究以仔猪肠上皮细胞（IPEC-J2）为模型，研究黄曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEA）和呕吐毒素（DON）的叠加细胞毒性。细胞毒性试验选用AFB1、ZEA和DON三种毒素作为响应面Box-Behnke设计的三个因素，以AFB1：10、20、30 μg/L，ZEA：150、300、450 μg/L，DON：500、1000、1500 μg/L作为Box-Behnke设计的三个编码水平。利用响应面设计构建得到17组复合霉菌毒素组合，以其对IPEC-J2细胞活力的影响作为参考指标，得到对细胞损伤程度最高和最低的霉菌毒素添加比例。结果表明：经方程预测后，得到细胞活力最低（霉菌毒素毒性最高）的AFB1、ZEA和DON组合为30、150 μg/L和1500 μg/L，经测定细胞活力为32.32%|得到细胞活力最高（霉菌毒素毒性最低）的AFB1、ZEA和DON组合为10、150 μg/L和600 μg/L，经测定细胞活力为53.01%。该结果为多种霉菌毒素叠加毒性的研究提供了依据。 [关键词] IPEC-J2细胞|黄曲霉毒素B1|玉米赤霉烯酮|呕吐毒素|细胞毒性     

CnAβ基因对大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

过敏是人和养殖动物常见的疾病，而且发生的频率呈现逐渐增加的趋势。为了深入了解过敏反应的机制，本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建钙调磷酸酶A beta （calcineurin A beta，CnAβ）基因敲除的大鼠RBL-2H3细胞株，并探讨CnAβ基因对RBL-2H3细胞生长及脱颗粒的影响。选取大鼠CnAβ基因第一外显子为敲除靶点，设计并合成3个单导向RNA （single guide RNA，sgRNA），构建pX459-CnAβ-sgRNA质粒，并用脂质体3000将构建好的质粒转染到RBL-2H3细胞内；利用嘌呤霉素对转染细胞进行筛选，通过DNA测序验证获得CnAβ基因敲除的RBL-2H3细胞株；并检测CnAβ基因缺失对细胞增殖和脱颗粒的影响。结果表明，成功构建了CnAβ单基因敲除的大鼠RBL-2H3细胞株；CnAβ基因缺失对RBL-2H3细胞增殖、细胞的颗粒形成以及颗粒含量无显著影响，但显著抑制由细胞表面受体介导的RBL-2H3细胞脱颗粒作用。该研究结果有助于深入了解动物过敏性疾病的发生机制，为动物过敏性疾病的预防提供了理论基础。     

红茂草异紫堇碱对LPS诱导小鼠RAW 264.7细胞炎症因子的影响

[目的]研究红茂草异紫堇碱对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞释放炎性因子的影响。[方法]用CCK-8试剂盒方法检测不同剂量红茂草异紫堇碱(1、5、15、25、50、100、200、300和400μg/mL)对RAW 264.7细胞的毒性作用;用硝酸酶还原法测定不同浓度红茂草异紫堇碱(50、100、200和400μg/mL)条件下细胞培养液中NO的浓度;用ELISA法测定添加不同浓度红茂草异紫堇碱(100、200和400μg/mL)干预4 h,再加入LPS(0.1μg/mL)孵育20 h后细胞培养液中IL-1β、IL-6、IL-10、PEG-2和TNF-α的含量,通过上述方法测定的结果来评价红茂草异紫堇碱的抗炎作用。[结果]红茂草异紫堇碱浓度在15、25μg/mL时,可显著促进RAW 264.7细胞增殖(P≤0.05);并且在红茂草异紫堇碱存在条件下,促炎因子IL-1β、IL-6、PEG-2和TNF-α释放量都有不程度的降低,而抗炎因子IL-10和NO的释放量有不同程度的升高。[结论]红茂草异紫堇碱能够抑制促炎因子IL-1β、IL-6、PEG-2和TNF-α的释放;另一方面能够促进抗炎因子IL-10和NO的释放来抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应。     

缺素对3种豆类植物幼苗生长发育的影响

研究多种缺素培养条件下,晋绿豆8号、晋豆19和小红芸豆等3种豆科植物表现出的营养缺乏症状和生理特性变化,为大田栽培的营养诊断和施肥提供理论依据。采用溶液培养法,设全素与缺氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁8个处理组,培养期间每天对植株表型进行实时观察且每7 d测量植株的鲜质量,培养结束时测定并计算各植株的根冠比、根系活力、生长速率和叶绿素含量。结果表明,3种豆科植物的幼苗在缺素培养条件下症状出现的时间、程度、顺序有一定差异;同种植物幼苗在不同缺素条件下的敏感性及反应程度均不同,不同植物幼苗在同种缺素条件下的反应也有所差异,但总体来说表现较为相似;缺素培养7 d后缺素植株普遍较全素植株生长缓慢,第28天时生长基本停滞;全素培养时植株高大,叶片大而鲜绿,挺立,腋芽生长明显;不同缺素培养的植株,总体较为矮小、叶片较小而薄、叶色发黄或深绿,而且萎蔫下垂,腋芽生长不明显,此外还表现出一些特殊的缺素症状。对比3种豆科植物幼苗的根冠比可知,三者均是缺氮处理的根冠比最大,全素处理的最小,缺硫、缺钾的仅大于全素处理。缺素处理对3种豆科植物的幼苗生长速率影响极显著;晋绿豆8号幼苗的生长速率对氮、磷、钾、镁较为敏感,缺钾植株的生长速率最小;晋豆19幼苗的生长速率对氮、钙、铁、镁较为敏感,缺钙植株的生长速率最小;小红芸豆幼苗的生长速率对氮、磷、钾、钙较为敏感,缺氮植株的生长速率最小。缺素处理对3种豆科植物的幼苗根系活力均有显著影响;晋绿豆8号幼苗的根系活力对氮、镁、硫较为敏感,晋豆19幼苗的根系活力对氮、磷、铁较为敏感,小红芸豆幼苗的根系活力对氮、硫、铁较为敏感,三者均对氮的敏感性最强,即缺氮植株的根系活力最小。缺素处理对3种豆科植物幼苗的叶绿素含量影响极显著,其幼苗的叶绿素含量对氮、镁、硫较为敏感,对氮的敏感性最强,即缺氮植株的叶绿素含量最小,而全素处理的叶绿素含量最大。     

福建薏苡品种新陈种子活力的比较试验研究

薏苡种子油分含量较高,不耐贮藏。试验以福建省认定的4个薏苡品种的种子为材料,研究了一般贮藏条件下贮藏1年的陈种子与新收种子的发芽情况,结果表明:在发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数等方面,新收种子显著高于陈种子;而在苗高、幼苗干重与鲜重、电导率等方面,二者没有显著差异。     

混合盐碱胁迫对板蓝根种子萌发的影响

将氯化钠(NaCl)、硫酸钠(Na_2SO_4)2种中性盐和碳酸氢钠(NaHCO_3)、碳酸钠(Na_2CO_3)2种碱性盐按不同比例混合,设置pH值为7.2～10.34的5组碱胁迫处理,每组从20～200 mmol/L设定8种不同盐浓度,以蒸馏水处理为对照,测定40种混合盐碱胁迫条件下板蓝根种子的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数等指标,以明确混合盐碱胁迫对板蓝根种子萌发的影响。结果表明,盐浓度小于20 mmol/L、pH值为7.30的低浓度盐碱胁迫对板蓝根种子萌发具有一定的促进作用,发芽率、发芽势、活力指数有所增加;盐浓度为80 mmol/L、pH值为7.30～10.24时胁迫处理的板蓝根种子发芽率由88%下降到3%,pH值为7.96、盐浓度为20～200 mmol/L时胁迫处理的板蓝根种子发芽率由94%下降到0%,说明高浓度盐碱胁迫对板蓝根种子萌发有明显的抑制作用;盐度与pH值对板蓝根种子萌发的抑制有极显著的交互作用(P0.01)。     

谷氨酰胺对斜带石斑鱼GF-1细胞中C-Myc蛋白的表达与神经坏死病毒复制的影响

为探讨C-Myc表达、谷氨酰胺代谢和神经坏死病毒复制三者之间的关系,本研究首先克隆了斜带石斑鱼鳍条细胞(GF-1)中的C-Myc基因(GF-1-C-Myc),结果显示GF-1-CMyc基因cDNA全长814 bp,开放阅读框(ORF)为285 bp,编码95个氨基酸(aa),有亮氨酸拉链结构域与螺旋-环-螺旋(HLH)结构域。实验表达和纯化了GF-1-C-Myc蛋白,并制备其多克隆抗体。采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)与免疫印迹法(WB)检测了GF-1-C-Myc基因的表达和神经坏死病毒的复制。结果显示,缺乏谷氨酰胺会同时抑制GF-1-C-Myc基因的表达和神经坏死病毒(NNV)的复制,添加谷氨酰胺可同时促进GF-1-C-Myc的表达和NNV的复制;此外,NNV感染可上调GF-1-C-Myc基因的表达,并显著消耗GF-1细胞培养液中的谷氨酰胺。研究表明,GF-1-C-Myc基因可调控宿主谷氨酰胺代谢,从而有利于神经坏死病毒的复制。本结果为防控NNV的感染提供了参考。