不同类型供体细胞对牛体细胞重构胚发育能力的影响

(1西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨陵 712100；2陕西省畜牧兽医总站，陕西西安710016)     

小鼠卵母细胞去核时间对卵丘细胞核移植的影响

对超数排卵的小鼠分别在注射HCG后14~16, 16~18, 18~20和20~22 h采小鼠卵母细胞用于 核移植, 观察小鼠卵母细胞的去核时间在体细胞核移植中的作用。结果显示, 在注射hCG后14~16, 16~18, 18~20和20~22 h, 小鼠卵母细胞去核效率分别为80.09 %(338/422), 73.12 %(283/387), 55.02 %(230/418)和48.74 %(193/396); 重构胚激活率分别为 66.20 %(190/287), 75.43 %(175/232), 84.78 %(156/184)和85.14 %(126/ 148); 重构胚的囊胚发育率分别为13.94 %(40/287), 7.33 %(17/232), 3.80 %(7/184)和1.35 %(2/148)。试验证实小鼠卵母细胞在注射hCG后14~16 h进行去核较为适宜。     

猪体细胞核移植重构胚发育异常及印迹基因表达特征研究的进展

由于猪的器官极可能成为人类未来器官的供应源,猪体细胞核移殖及转基因等方面的研究已成为全球的热点。近几年来,猪体细胞核移植研究取得了一定的进展,但总体来看核移植效率还很低(1%~2%),还需要不断完善核移植程序及对一些基础问题的深入研究。本文主要对猪体细胞核移植重构胚发育异常及“印迹”基因表达特征作一综述与分析,旨在为研究者提供一些有益的启示。     

不同来源的牛皮肤成纤维细胞原代培养效果对核移殖胚发育的影响

培养延边黄牛不同部位(耳部和腹部)和不同品种(黑白花、利木赞、延边黄牛)耳部的皮肤成纤维细胞,观察原代培养效果并用其核移植,探讨原代培养效果与囊胚发育率的关系。以组织块贴壁率、组织块发育率、组织块的细胞贴壁率作为原代培养效果的衡量标准;传3～5代后进行核移植,分别统计囊胚发育率。结果表明:延边黄牛腹部皮肤的生长效果明显好于耳部皮肤,并且囊胚发育率高于耳部皮肤。利木赞牛皮肤生长效果明显好于延边黄牛和黑白花,延边黄牛与黑白花差异不显著。与之对应,利木赞囊胚发育率显著高于延边黄牛与黑白花,延边黄牛与黑白花差异不显著。     

体细胞克隆太湖猪出生

以中国太湖猪胎儿成纤维细胞为核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体,以杜洛克猪为代孕母猪,进行了太湖猪体细胞克隆技术的研究,成功地获得了首例体细胞克隆太湖猪仔猪.经微卫星DNA多态性鉴定,确定克隆猪来自供核细胞,与代孕母猪无亲缘关系.本研究将为体细胞克隆技术在我国太湖猪育种、建立人类疾病模型等研究方面提供可行的技术方法.     

小鼠体细胞核移植研究进展

体细胞核移植是目前生物技术领域研究的热点之一。小鼠作为一种广泛使用的实验动物模型,具有遗传背景清楚、繁殖周期短、饲养成本较低等优点,因此小鼠体细胞核移植具有较大的研究价值。作者简要回顾了小鼠体细胞核移植的发展史,并对体细胞核移植方法、影响核移植效率的因素,包括供核细胞的类型、供核细胞的体外处理、核质细胞周期协调、重构胚的激活、体外培养体系及核移植分子机制等进行了综述,并展望了小鼠体细胞核移植的应用前景。     

山羊体细胞核移植研究进展

体细胞核移植是目前生物技术领域的研究热点之一.山羊是转基因动物研制的理想模型,又是畜牧业生产中的一个重要畜种,而且还可以用转基因奶山羊进行乳腺生物反应器的研究等,因此,山羊的体细胞核移植具有较大的研究价值.就山羊体细胞核移植的研究情况进行了概述.     

3种来源猪胚胎激活后6h内基因组DNA甲基化变化模式

主要探讨猪手工克隆(HMC)胚胎和体外受精(IVF)胚胎及孤雌激活(PA)早期胚胎发育过程中6 h内的单细胞核全基因组DNA甲基化模式.运用抗5-甲基胞嘧啶抗体免疫荧光和激光共聚焦显微镜检测相对荧先强度的方法,检测猪手工克隆胚在融合后6 h内全基因组DNA甲基化模式,并与同时期猪体外受精胚及孤雌激活胚胎进行比较,从而探讨这3种胚胎变化模式的异同.结果显示:3种不同来源的胚胎在培养后不同时间点比较时,2、4、6 h均呈强甲基化状态,且均呈下降趋势;在同时间点比较时,2 h和6 h这两个时间点检测到3种胚胎的相对荧光强度均差异不显著(P＞0.05),而在4 h时,HMC胚胎显著高于PA和IVF胚(P＜0.05).结论:猪手工克隆胚在融合后6h内虽然也发生类似IVF胚的全基因组DNA去甲基化,但其去甲基化不充分,甲基化程度偏高,这可能是导致核移植胚胎核重编程不充分、发育能力低的一个原因.     

日本牛核移植技术的研究进展

近年来，关于动物繁殖技术的研究方兴未艾，特别是１９９７年２月，Ｎａｔｕｒｅ报道了世界首例应用成年绵羊体细胞———乳腺上皮细胞，经过核移植技术，成功地获得了克隆后代———“多利”后，许多国家政府和科学家为之震动，一时成为人们议论的焦点，这一研究成果在我国也被评为１９９８年度世界十大科技新闻之一。日本在核移植领域的研究当属世界领先地位，１９９８年１２月，Ｓｃｉｅｎｃｅ报道了日本近代（Ｋｉｎｋａ）大学的角田教授应用一头牛卵丘细胞和输卵管上皮细胞获得８头克隆后代。日本政府也十分关注这一技术的研究和开发，…