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1.
笔者所在实验室长期从事藏药基源鉴定与药物开发,为了确保试验药材的质量及临床安全用药,运用ITS2条形码技术对采自西藏的藏当归及相似植物进行分子鉴定.首先,利用试剂盒提取植物叶片的DNA,对ITS2序列进行PCR扩增,双向测序后运用SeqMan组装.而后,基于ITS2 Database中的Annotate注释方法去掉两端的5.8S区和28S区获得ITS2条形码并预测二级结构,用MEGA 5.0软件进行遗传距离计算并构建系统进化树(NJ).分析发现,试验中的4种类似植物ITS2条形码间存在明显差异,结合二级结构、遗传距离、进化树位置及形态对比可知其分为3个物种并确定了其分类地位.试验证明,ITS2条形码可有效快速地鉴别易混中药材的种类,为保证其临床用药安全提供了简单、高效、准确的技术手段.  相似文献   
2.
为探究不同保存温度和反复冻融次数对鸭疫里默氏杆菌DNA的影响,研究了不同保存温度和反复冻融次数对不同浓度梯度组鸭疫里默氏杆菌DNA样品浓度及荧光定量Ct值的影响.根据OmpA基因保守序列设计了鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR特异性引物,产物大小为112 bp,退火温度为56℃.荧光定量循环阈值Ct值随DNA浓度的下降而升高.常温保存的DNA样品7 d后出现明显降解,保存温度为4、-20、-80℃时则对荧光定量PCR检测效率影响不大.较高浓度的A、B组DNA样品Ct值未受冻融次数的影响,而浓度较低的C、D组则在冻融21次后Ct值明显升高.研究建立了鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR鉴定方法,Ct值随DNA浓度的下降而升高,DNA样品应低于4℃保存,低浓度DNA应避免反复冻融.  相似文献   
3.
为探讨染色体加倍对四倍体枳橙(Citrus sinensis (L.) Osb.×Poncirus trifoliate (L.) Raf.)叶片基因组DNA甲基化修饰的影响,明确四倍体枳橙基因组DNA甲基化水平及模式的变化特征。本研究以枳橙二倍体为对照,利用MSAP分子标记技术对同源四倍体枳橙叶片基因组DNA甲基化水平及模式变化进行分析。结果表明,10对选择性扩增引物共扩增出775条条带,二倍体和同源四倍体枳橙扩增带数分别为391条和384条,对应的总甲基化率分别为31.97%(含全甲基化率16.37%,半甲基化率15.6%)和31.25%(含全甲基化率18.49%,半甲基化率12.76%);MSAP扩增条带统计表明,同源四倍体的总甲基化率变化较小,全甲基化率高于二倍体,半甲基化率较二倍体均有所降低,相比二倍体对照,四倍体枳橙叶片基因组DNA主要发生了甲基化模式的变化。  相似文献   
4.
研究了基因芯片技术在动物源性成分检测中的应用,在研究过程中选择mtDNA 18S rRNA为目标基因,在通用引物扩增区间设计了质控探针、特异性探针。最终验证了基因芯片检测技术在动物源性成分检测中的应用效果。本次研究证实了基因芯片检测技术在特异性、灵敏度等方面可以达到较高检测水平,该方法成本较低,灵敏度和准确性较高,可用于高通量检测饲料中是否含有猪、牛、鸡和鸭等4种动物源性成分。  相似文献   
5.
DNA分子标记技术的研究与应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
陈星  高子厚 《分子植物育种》2019,17(6):1970-1977
  相似文献   
6.
7.
以小麦种子分子检测农业行业标准(NY/T 2859-2015)为基础,开发小麦种子快速、规模化提取DNA方法,优化反应体系中各组分含量,为小麦真实性快速执法提供技术支撑。通过对SDS、CTAB、高盐低p H、快速提取和试剂盒5种方法提取的DNA质量、浓度和PCR扩增效果进行比较,发现改进的高盐低p H方法提取种子的DNA质量、浓度能够满足小麦真实性鉴定中42对SSR引物重复鉴定的需求,是利用96孔深孔板和自动化移液工作站规模化、高通量提取DNA的较优方法。进一步优化结果显示该方法在65℃温浴条件下比室温的浓度高出25%,但两种温度条件下提取的DNA质量及浓度均能够满足品种鉴定的需求;沉淀时用0.5倍提取液体积的预冷异丙醇沉淀浓度最高,用室温的异丙醇沉淀的最佳体积是提取液体积的0.6倍。对标准中42对引物的最佳引物浓度和模板浓度均进行了优化,综合所有42对引物的优化结果发现,反应体系为20μL时,引物终浓度为0.437 5μmol/L,模板终浓度为10 ng/μL时扩增效率相对较高,扩增产物稳定,能够满足多重电泳的需求。  相似文献   
8.
9.
This study was aimed to analyze the genetic diversity and phylogenetic evolution in Xianglushan chicken.The full-length sequences of mitochondrial DNA D-Loop (mtDNA D-Loop) region of 121 Xianglushan chickens were analyzed by PCR amplification combined with bidirectional sequencing,and the composition,variation and maternal origin of mtDNA D-Loop region were discussed.The results showed that the total length of mtDNA D-Loop region in Xianglushan chicken was 1 231-1 233 bp.The contents of A,T,C and G were 26.62%,33.55%,26.49% and 13.34%,respectively.The content of T was the highest,the content of G was the lowest,and the content of A+T was significantly higher than that of G+C,it indicated that region might have certain base hobbies.Analysis of 121 full-length sequences were found to coexist in 11 haplotypes and 26 mutation sites,of which 2 were single polymorphic information sites,24 were simple information sites,4 bases were inserted and 2 bases were missing.The genetic diversity analysis results showed that the haplotype diversity was 0.814,the nucleotide diversity was 0.00447,the average nucleic acid difference was 5.494,which indicated that the genetic diversity of Xianglushan chicken was relatively rich,the effect of preservation was better,which had a certain breeding space.Tajima's D was 0.39378 and the test results were not significant (P>0.10),in line with neutral mutations.The cluster analysis results showed that Xianglushan chicken and Gallus gallus gathered as one,indicating that Xianglushan chicken originated from Gallus gallus, and there were 4 branches inside the branch,indicating that Xianglushan chicken had many matrilineal origins.The results could provide some reference data for the protection and exploitation of pheasant germplasm resources in Xianglushan chicken.  相似文献   
10.
根据山东栒子叶片多糖多酚多毛的理化性质,研究适合山东栒子便捷高效的基因组DNA提取方法。结果获得了纯度高、质量符合后续分子标记和遗传多样性分析要求的基因组DNA。采用6个不同种群的样品,利用150对SRAP引物组合进行筛选,确定了最佳反应体系为2×EsTaqMasterMix(含染料)12.5μL,40 ng/μL DNA模板1μL,10 pmol/μL引物0.5μL,dd H_2O 10.5μL,共筛选出11对多态性相对良好、条带较为清晰的引物组合。该研究为以后SRAP分子标记在栒子属植物遗传多样性方面的研究奠定了基础。  相似文献   
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