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斑节对虾细胞周期蛋白E基因的克隆与表达分析   总被引:1,自引:1,他引:0       下载免费PDF全文

为了解细胞周期蛋白E(cyclin E)基因在斑节对虾(Penaeus monodon)发育过程中的作用, 构建和测序了斑节对虾全组织cDNA文库, 获得了斑节对虾细胞周期蛋白(Pmcyclin) E的部分表达序列。通过RACE技术克隆得到1条全长1 706 bpcDNA序列。Pmcyclin E开放阅读框(ORF)1 263 bp, 编码420个氨基酸。生物信息学分析表明, 该氨基酸序列含有周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区并含有N-糖基化位点及磷酸化位点。经BLAST同源性分析表明, 该基因编码蛋白与红火蚁(Solenopsis invicta)、切叶蜂(Megachile rotundata)等多种节肢动物细胞周期蛋白E有很高的同源性。组织分布分析表明, 该基因在斑节对虾精巢、卵巢、肠、脑、肝胰腺、胃和心脏组织中均有表达, 其中卵巢中表达量较高, 而心脏、胃及肝胰腺中表达量相对较低。分别对蜕皮抑制激素(MIH)注射和眼柄切除的对虾进行表达分析, 发现眼柄切除后, Pmcyclin E大量表达, 而注射MIH后细胞Pmcyclin E的表达量相对降低。结果表明, 细胞cyclin E基因在斑节对虾卵巢发育过程中起重要作用, 且眼柄切除对细胞cyclin E的表达具有影响, 该结果为进一步探究斑节对虾卵巢的发育机理提供了理论依据。

  相似文献
2.
细胞周期蛋白B(Cyclin B)是影响卵母细胞发育成熟的重要基因。文章构建了PmCyB慢病毒表达载体,并和慢病毒包装复合物在293T细胞中包装成慢病毒颗粒。利用包装好的慢病毒颗粒,感染干扰了Cyclin B1基因的Hela细胞,研究了PmCyB对Hela细胞增殖的影响。结果表明,通过siRNA干扰细胞自身的Cyclin B1后,转染对照组病毒液的Hela细胞增殖减缓;同时,干扰后转入含有PmCyB重组慢病毒表达载体,Hela细胞增殖速度明显要高于转染对照组病毒液的Hela细胞的增殖速度。这一结果表明,PmCyB基因的过表达能补偿Cyclin B1缺失导致的细胞增殖减缓的现象,说明PmCyB基因具有细胞周期调控功能,是细胞增殖与分化的重要调控基因,且功能可能与人类的Cyclin B1相似。人类的Cyclin B1是卵母细胞发育成熟的重要基因。由此可以推断,PmCyB基因可能对斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢发育成熟起着重要作用。  相似文献
3.
真核生物的转录调控多发生在转录的延伸阶段,细胞周期蛋白T(cyclin T)是细胞转录的重要调控因子.文章利用RACE技术获得斑节对虾(Penaeusmonodon)cyclinT(Pmcyclin T)cDNA全长,其全长为3421 bp,其中开放阅读框(ORF)3135 bp,编码1044个氨基酸;生物信息学分析显示,该氨基酸序列含有一个周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区,并含有N-糖基化位点和磷酸化位点;经BLAST同源性分析显示,细胞周期蛋白T编码的蛋白与柑橘木虱(Diaphorina citri)、切叶蚁(Acromyrmex echinatior)等多种节肢动物有很高的同源性;利用qRTPCR技术对Pmcyclin T在不同组织及卵巢发育各时期的mRNA水平的表达谱进行了研究.结果表明,细胞周期蛋白T在斑节对虾的心、卵巢等7个组织中均有表达,其中卵巢中表达量显著高于其他组织(P<0.05);在卵巢发育各时期中,细胞周期蛋白T在Ⅲ期表达量最高.  相似文献
4.
流式细胞术能快速检测生物细胞的DNA含量和细胞周期,在鱼类遗传育种方面已得到广泛运用.目前的研究多基于鱼类血液和生殖细胞开展实验,存在周期性和操作难度的限制.该研究利用草鱼(Ctenopharyngodon idellus)不同组织进行流式分析,在鳍条组织中得到了明显的峰图,并在4种鱼类的重复实验中得到了稳定结果,且不同鱼类的鳍条组织均存在细胞周期,大部分细胞停留在G0/G1期.利用斑马鱼(Danio rerio)作为内标测定出团头鲂(Megalobrama amblycephala)鳍条组织的相对DNA含量(C值)为(1.25 ±0.07)pg,与相关研究结果基本吻合,认为利用鳍条组织作为血液和生殖细胞的替代材料进行流式细胞实验是科学可行的.  相似文献
5.
洪锡钧 《水产学报》1997,21(3):240-245
南方鲶晚期胚胎细胞经原代和传代培养40次,历时36个月建立了上皮型细胞系(SM)。该细胞系表现低世代生长缓慢,每代时间随代龄增加而减少,经FMF测定:G1期细胞占70.%-85.6%;S期细胞占12.2%-25.3%,G2+M期细胞占1.6%-4.6%,由30代到40代G2+M细胞增加了一倍多,SM细胞能在1-4℃冰箱长期存活并可保持繁殖能力达13个月。  相似文献
6.
康峰  贾青 《畜禽业》2005,(5):18-21
目前动物克隆技术因应用低效和后代生长发育异常等缺陷而受到限制,问题的根源在于对动物克隆机理缺乏了解。文章对此进行了简要阐述,其中包括细胞周期、线粒体命运、X染色体失活以及供体核的基因组再程序化,并对克隆技术潜在的问题做出了说明。  相似文献
7.
为研究雌核发育二倍体鲫鲤产生二倍体卵子的分子机制,实验采用PCR和cDNA末端快速分离法,克隆获得了雌核发育二倍体鲫鲤第三代(G3)、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和四倍体鲫鲤的细胞周期相关基因——cdc2基因cDNA全序列.结果显示,4种不同倍性鱼cdc2基因均编码含有302个氨基酸蛋白,而且编码的蛋白都含有与其他CDK激酶相当保守的序列PSTAVRE;同源性分析发现,4种鱼cdc2基因编码的氨基酸序列之间的相似度大于97.6%,说明Cdc2蛋白在这4种不同倍性鱼中具有高度保守性.采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)对cdc2基因在G3、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫及四倍体鲫鲤早期卵巢中的表达进行分析,结果发现,G3cdc2基因比普通二倍体红鲫和三倍体湘云鲫表达要高,比四倍体鲫鲤的表达水平低.该研究从分子水平证明了G3早期性腺中存在着大量的多倍体卵原细胞.同时,研究表明,cdc2基因在雌核发育二倍体鲫鲤早期卵巢的高表达暗示着G3多次进入S期却不经历M期导致二倍体配子的产生.  相似文献
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