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1.
饥饿胁迫对吉富罗非鱼生长及生理生化指标的影响   总被引:12,自引:0,他引:12  
实验选取90吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus),平均体质量137.18 g,随机分为6个平行组,饥饿处理0 d、7 d、14 d、21 d,测定饥饿对鱼体的生长、血液生化指标、应激蛋白HSP70基因表达以及鱼体组成的影响,结果表明,饥饿0~21 d过程中,随着饥饿时间的延长,鱼体体质量、内脏质量、肝体比、内脏比、血清甘油三酯、血清一氧化氮浓度、血清超氧化物歧化酶活性、肝脏HSP70的mRNA水平、鱼体能量、肌肉粗脂肪、肝脏灰份、肠系膜脂肪含量等指标呈现下降的趋势,而血清丙二醛浓度呈现增加趋势,并且与饥饿前相比在饥饿21 d时有显著性差异(P<0.05).血清皮质醇与总蛋白浓度呈现先增加后降低趋势,并且与饥饿前相比在饥饿7 d时有显著性差异.饥饿0~21d过程中,鱼体肌肉水份、肝脏水份、肌肉粗蛋白、肝脏粗蛋白与粗脂肪等含量没有较大的变化.因此饥饿时吉富罗非鱼先动用体内储存的脂肪来满足鱼体需要,长期的饥饿有可能降低鱼体免疫与抗氧化能力,直接影响鱼体健康.  相似文献
2.
鳗源嗜水气单胞菌β—溶血素基因的克隆及表达   总被引:9,自引:2,他引:7       下载免费PDF全文
龚晖 《水产学报》2003,27(2):124-130
应用PCR技术,从1株鳗源嗜水气单胞菌ML316中扩增得到β 溶血素基因AHL316HEM,将AHL316HEM克隆到pGEM TEasyVector,经分析验证后重组到pcDNA3.0中,构建了重组质粒PDLH。转化重组质粒PDLH的大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α能在血琼脂培养皿中形成明显的β 溶血斑,重组菌纯化的胞外产物溶血价为1.28×104HU·mg-1,同时重组菌的胞外产物能被原始菌株的高免血清特异性地识别。结果证实,克隆到鳗源嗜水气单胞菌β 溶血素基因,重组质粒PDLH能够表达具有天然生物学活性的β 溶血素,为构建嗜水气单胞菌核酸疫苗奠定了基础。  相似文献
3.
4.
锯缘青蟹蜕皮抑制激素cDNA的分子克隆及其表达分析   总被引:5,自引:1,他引:4       下载免费PDF全文
邱高峰 《水产学报》2003,27(3):207-212
根据近缘种类同源序列设计简并引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术,首次扩增获得锯缘青蟹(Scylla serrata)眼柄组织中编码蜕皮抑制激素(MIH)成熟肽全长cDNA序列及部分信号肽序列。将该序列克隆到pUCm—T载体上进行序列测定。结果表明,编码锯缘青蟹MIH成熟肽的cDNA由234个碱基组成,由此推测MIH成熟肽含78个氨基酸残基。该序列不仅与其它短尾类甲壳动物的MIH氨基酸序列具有高度的同源性(79%~9l%),还与该激素同一家族的性腺抑制激素、大颚器抑制激素的氨基酸序列具有较高的相似性。RNA斑点杂交结果显示,MIH基因在眼柄神经节及脑组织中均有表达,而在肌肉、中肠腺中不表达。  相似文献
5.
分子生物学与动物善养研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
综述了分子生物学在动物营养研究中的应用:从分子水平上阐述营养与基因表达、调控的关系;利用生物学技术改变动物体内的代谢途径或生产酶制剂、氨基酸等动物营养物质前景广阔。  相似文献
6.
黄颡鱼卵巢P-450arom基因的克隆及组织表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本研究采用RT-PCR和RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法,分离和克隆了黄颡鱼(Pelteobasrus fulvidraco)卵巢P450芳香化酶基因HP450arom A,并使用荧光实时定量RT—PCR对其组织表达进行了分析。结果表明,HP450arom A cDNA全长1914bp[不包括poly(A)],5’端非翻译区有13bp,3’端362bp[不包含poly(A)],阅读框(Open Reading Frame,ORF)1539bp,翻译成513个氨基酸,计算的蛋白质分子量为58.7kD。同源性分析显示,HP450aromA的氨基酸序列与其他鱼卵巢P450arom具有60%~90%的同源性,与其他鱼脑P450arom为57%-60%同源,与鸡卵巢和人胚盘P450arom则为51%和52%同源;但芳香化酶高保守区包括Ⅰ-螺旋区,芳香化酶特异保守区Ⅱ和血红素结合区Ⅲ和其他鱼芳香化酶相比同源性分别高达68%~97%、78%-91%和71%~100%。系统发育分析表明,HP450arom A与鱼类卵巢P450arom属于同一分支,黄颡鱼和鲇鱼亲缘关系最近,这和传统的分类方法结论一致。荧光实时定量RT-PCR研究结果显示,HP450arom A在前脑、下丘脑、脑垂体、精巢、肝脏中不表达,只在卵巢中表达。这说明HP450arom A的表达具有组织特异性,并可推测其对卵巢发育起着重要作用。与本室分离的HP450arom B在卵巢的表达量相比,卵巢中HP450arom A的表达量是HP450arom B的18.7倍。  相似文献
7.
半滑舌鳎髓样分化因子的克隆和表达分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
髓样分化因子(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)是Toll/IL-1R家族成员,是TLR信号通路中的一个关键接头分子,在天然免疫系统中具有重要作用.迄今,在重要海水养殖鱼类半滑舌鳎中尚未见有关MyD88的研究报道.本研究克隆了半滑舌鳎(Gynoglossus semilaevis)MyD88基因,并对其表达模式进行了初步研究.半滑舌鳎MyD88基因的cDNA全长为1 612 bp,其中包括132 bp的5'非翻译区(UTR),590 bp的3'UTR和编码285个氨基酸残基的858 bp的开放阅读框(ORF).MyD88蛋白在N端具有死亡结构域(Death Domain,DD),C端具有TIR结构域(Toll/IL-1 Receptor Domain,TIR),MyD88基因组全长为2 923 bp,包括5个外显子和4个内含子.系统进化树分析表明,半滑舌鳎MyD88和牙鲆聚在一起,具有最近的亲缘关系.实时定量PCR结果显示,MyD88基因几乎在所有组织中都有表达,在血液、脾脏、头肾、肝脏等免疫组织和精巢、卵巢生殖腺中具有较高水平的表达.利用LPS(lipopolysaccharide)、PGN(peptidoglycan)和poly I:C作为免疫刺激源感染半滑舌鳎外周血淋巴细胞的结果显示,三者均可诱导MyD88基因的表达上调.鳗弧菌(Vibrio angaillarum)感染实验表明,注射鳗弧菌96h后MyD88基因在脾脏中表达量升高了近180倍、在肝脏中的表达量升高了60多倍;在注射鳗弧菌48 h后,头肾中表达量升高了近5倍.上述实验暗示,MyD88基因在半滑舌鳎天然免疫防御系统中具有重要作用.  相似文献
8.
黄芪多糖对仿刺参体腔细胞中溶菌酶基因表达量的影响   总被引:3,自引:0,他引:3  
为研究黄芪多糖诱导仿刺参体腔细胞中溶菌酶基因表达的影响,从体质量(10±1.22) g的仿刺参体腔细胞中克隆出长度为395 bp的β-actin基因部分片段作为内参,利用半定量PCR法考察体内注射不同剂量黄芪多糖(APS)后仿刺参体腔细胞中i 型溶菌酶mRNA表达量变化.研究发现,5、10 mg/kg剂量的APS可提高体细胞中溶菌酶mRNA表达量,其中5 mg/kg剂量组达显著水平,剂量为20 mg/kg时基本无效.  相似文献
9.
海带雄配子体抑制消减cDNA文库的生物信息学分析   总被引:3,自引:1,他引:2  
对海带(Landnaria japonica Axesch.)雄配子体抑制消减cDNA文库进行生物信息学分析,并通过Northern印迹杂交进一步验证了雄配子体2个优先表达的基因.结果表明,(1)由627个克隆产生的618条高质量cDNA可聚类成187条非冗余序列(NRS);其中93条Contig由524条cDNA拼接而成,剩下的94条为Singleton(只有单条cDNA),冗余率达69.74%.(2)5条NRS因与rRNA基因相匹配而不进行分析;60条NRS与GenBank中注释蛋白基因显著匹配;122条NRS无显著匹配.(3)大部分已知功能的基因与物质和能量代谢(26.7%)、生长发育(13.3%)有关,其中与叶绿体光捕获蛋白复合体有关的基因有106条cDNA,所涉及的有lhcf6基因(62条cDNA)与fcp基因(12条cDNA)等.(4)经Northern印迹杂交证实lhcf6和fcp2个基因在处于营养生长期的雄配子体中优先表达.(5)90条Contig的总G+C含量平均值为52.58%,表明了密码子的使用对G、C有明显的倾向性;20个推测功能蛋白(1520密码子)密码子第三位碱基的使用偏好C(40.7%),其次是G(33.9%);终止密码子的使用偏好TGA(54.5%).本研究为海带雌、雄配子体差异表达基因克隆、分析和功能基因组学等研究提供了信息.  相似文献
10.
根据对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)1个可能编码蛋白的开放读码框(open reading frame,ORF)的序列(WSSV A基因),结合pQE30载体的多克隆位点,设计1对引物进行PCR,扩增出大小为0.28kb的A基因片段。把目的片段克隆到pGEM-T Easy载体上,构建出重组质粒pGT-A,再用引物两端酶酶切出目的片段,并按正确的读码框顺序插入到pQE30表达载体上的乳糖操纵子中,构建出带有目的片段的重组质粒pQE30-A,然后将重组质粒转化到大肠杆菌M15细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot显示有与A基因预期大小11kD相吻合的融合蛋白带。结果表明,来源于WSSV的这一ORF是1个可表达的基因。  相似文献
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