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2.
主要探讨猪手工克隆(HMC)胚胎和体外受精(IVF)胚胎及孤雌激活(PA)早期胚胎发育过程中6 h内的单细胞核全基因组DNA甲基化模式.运用抗5-甲基胞嘧啶抗体免疫荧光和激光共聚焦显微镜检测相对荧先强度的方法,检测猪手工克隆胚在融合后6 h内全基因组DNA甲基化模式,并与同时期猪体外受精胚及孤雌激活胚胎进行比较,从而探讨这3种胚胎变化模式的异同.结果显示:3种不同来源的胚胎在培养后不同时间点比较时,2、4、6 h均呈强甲基化状态,且均呈下降趋势;在同时间点比较时,2 h和6 h这两个时间点检测到3种胚胎的相对荧光强度均差异不显著(P>0.05),而在4 h时,HMC胚胎显著高于PA和IVF胚(P<0.05).结论:猪手工克隆胚在融合后6h内虽然也发生类似IVF胚的全基因组DNA去甲基化,但其去甲基化不充分,甲基化程度偏高,这可能是导致核移植胚胎核重编程不充分、发育能力低的一个原因. 相似文献
3.
DAI Jian-jun WU Cai-feng ZHANG Shu-shan GU Xiao-long ZHANG Ting-yu WU Zhi-qiang ZHANG De-fu 《中国畜牧兽医》2014,41(11):1-6
In order to get porcine phytase salivary glands specific express cloned embryos,this study used phytase specific expressed plasmid DNA (including the promotor and terminater sequences of parotid secretary protein (PSP) gene,Neo selected gene and EGFP report gene and high enzymatic activity phytase gene (appA)) and transfected it into porcine fetal fibroblast cells with liposome.The stably transfected cell lines were screened by G418 selection,and positive phytase transgenic embryos were constructured by somatic cell nuclear transfer.The results showed that the phytase plasmid of this experiment could be used to carry on the cell selection,and the more smaller of plasmid DNA size,the more higher transfected efficiency was got.The plasmid YM6552 with 14.89 kb size only got 7.1% transfected efficiency,while EGPF plasmid got 43.4%.In the formation of single cell colony,pYN3600 (more smaller DNA size) got 25 colony numbers,and 14 of them expressed green fluorescent protein,11 of them were phytase PCR positive.They were much higher than those of YM6552 (19,8 and 6).All the reconstructed transgenic embryoes from the positive cell lines were expressed green fluorescent protein.Though the in vitro development ability of transgenic cloned embryos were a little lower than that of control group,there were no significant differences between them (P>0.05).In conclusion,all the phytase plasmid,cell selection method and nuclear transfer techniques could be used to produce porcine phytase salivary glands specific express embryos. 相似文献
4.
5.
为研究5-aza—dC和TSA提高核移植胚胎体外发育能力的作用是否有供体细胞特异性,实验选择皮肤成纤维细胞、胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞作为核供体细胞进行核移植,联合使用20nM(72h)5-aza—dc和50nM(12h)TSA处理供体细胞和重构胚,比较5-ttZa—dC+TSA对不同供体细胞来源核移植胚胎体外发育的影响。实验结果表明,经5-azaLdC+TSA处理后,极显著提高了3种供体细胞来源核移植胚胎的体外囊胚发育率(P〈0.01)。虽然胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞得到的发育率稍高于皮肤成纤维细胞组,但各对照组之间以及各处理组之间的体外发育率没有明显差异,5-aza—dC和TSA对核移植胚胎体外发育的影响没有供体细胞特异性。 相似文献
6.
为了检验发情牛(Bos taurus)血清在猪卵母细胞成熟中的应用,实验分别在成熟培养液中加入不同的血清,观察卵母细胞的成熟效果,并通过孤雌激活胚胎和重构胚的体外发育能力来判断血清对卵母细胞质量的影响:研究还进行了用发情牛血清成熟的卵母细胞构建的核移植胚胎的体内发育试验.结果表明,发情牛血清,成年牛血清和胎牛血清在猪卵母细胞的成熟率方面没有显著差异(P>0.05);卵母细胞成熟时加入不同的血清,对卵母细胞体外发育能力的影响不显著(P>0.05);来自含发情牛血清成熟液培养的卵母细胞,与胎儿成纤维细胞构建的克隆胚胎能够完成全期发育. 相似文献
7.
8.
对供体细胞制备过程中影响细胞重量和核移植效率的因素进行了总结,从供体细胞类型、体外传代次数、细胞周期同步化、细胞基因修饰、细胞凋亡诱导等途径作简要综述. 相似文献
9.
10.
[目的]探讨Roscovitine同期化供核细胞对食蟹猴—猪异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为提高灵长类的核移植效率奠定基础.[方法]活体采集4岁雄性食蟹猴的耳组织,经组织块培养获得纯化的食蟹猴耳成纤维细胞,细胞经固定、染色后用流式细胞仪分析细胞周期分布.以不同同期化方法处理的食蟹猴耳纤维细胞为供体细胞,以体外成熟、去核的猪卵母细胞为受体细胞,利用电融合法构建食蟹猴—猪异种核移植胚胎,观察异种核移植重构胚胎的体外发育情况.[结果]以15 μmol/L Roscovitine处理食蟹猴耳成纤维细胞24、48、72 h获得的G0/G1期细胞比率分别为76.51%、89.69%和90.49%,其中处理48和72h的G0/G1期细胞比率显著高于对照组(P<0.05).血清饥饿、接触抑制72 h同期化获得的G0/G1期细胞比率分别为91.12%和90.46%.Roscovitine同期化处理食蟹猴耳成纤维细胞48 h可有效提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率(15.05%),显著高于血清饥饿同期化处理和接触抑制同期化处理的效果(P<0.05).[结论]Roscovitine可有效同期化食蟹猴耳成纤维细胞在G0/G1期,最终提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率. 相似文献