大眼鳜和斑鳜肌肉营养成分分析

[目的]分析大眼鳜和斑鳜肌肉的营养成分。[方法]以翘嘴鳜为对照,对大眼鳜和斑鳜肌肉蛋白质含量、含水量、脂肪含量、脂肪酸含量、氨基酸含量进行分析。[结果]大眼鳜和斑鳜肌肉蛋白质含量分别为18.71%和18.99%,含水量分别为76.06%和76.16%,肌肉中脂肪含量虽然不高,但其不饱和脂肪酸含量较高,都在20%以上,特别是具有丰富的EPA和DHA,不饱和脂肪酸的含量高于饱和脂肪酸含量;肌肉中蛋白质含量丰富,氨基酸含量高,能补充人体必需氨基酸,其鲜味氨基酸的含量也非常丰富。[结论]大眼鳜和斑鳜具有较高的营养价值和巨大的市场潜力,是值得人工养殖的鳜鱼品种。     

草鱼MYH mRNA表达量分析中采用的内参基因稳定性比较

本研究分别以β-actin、18SrRNA和GAPDH为内参基因,采用实时荧光定量PCR对草鱼早期发育时期肌球蛋白重链（myosin heavy light,MYH）基因的mRNA表达量进行分析,并比较不同内参基因对MYH基因mRNA表达水平检测结果的准确性。研究结果表明,以β-actin和GAPDH作为内参,MYH基因mRNA表达水平完全一致,其表达量从原肠到仔鱼阶段逐次递增,仔鱼与原肠期阶段相比表达量差异显著;当采用18S rRNA作为内参时,MYH基因mRNA在发育阶段的表达量呈不稳定状态。因此,β-actin和GAPDH均可作为内参基因,用于草鱼早期发育中MYH基因mRNA的相对定量研究;而18S rRNA作为内参时,可能会对检测结果造成偏差。本研究不仅准确的揭示了草鱼MYH基因mRNA的表达特征,并且为荧光定量PCR技术在鱼类基因表达研究方面提供了有价值的参考。     

施肥对湘云鲫混养池塘浮游生物变化的研究

1999年3月￣5月和8月,通过对益阳农科所湘云鲫混养池所采水样浮游生物进行镜检分析,结果表明:施肥对浮游生物量的变化有显著的影响,施肥后浮游植物在第3天达到高峰,而浮游动物在施肥后持续增加,直至第5天达到高峰,同时浮游生物的组成与数量随不同季节而变化。施肥前后,水中浮游生物的优势种群与数量呈现一定差异。周期性施肥,能使得浮游生物高峰期持续下去,而且,其优势种群的高峰也能得以持续。     

鱼类生长激素基因的研究现状及展望

鱼类的生长激素基因在鱼类生长发育和新陈代谢过程中发挥着极其重要的生物学作用。就鱼类生长激素基因(fGHG)的分离、活性检测、结构、分子克隆及在体外表达与基因转移等方面的研究进行了综述,并对其未来的研究策略和发展方向进行了展望。     

藏猪兴奋性氨基酸转运载体EAAC1基因的克隆与原核表达

兴奋性氨基酸转运载体EAAC1是肠道内谷氨酸的主要载体.本研究根据人的基因编码区设计一对特异性引物,以藏猪空肠总RNA为模板,通过RT-PCR获得一长约1600 bp的cDNA片段,T/A克隆后测序,并进行序列分析；将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达.测序结果显示,获得的cDNA全长为1575 bp,编码524个氨基酸；EAAC1分子量为57 kD,等电点为5.34,GenBank登录号为GQ375513;该蛋白质具有3个N-糖基化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点和1个cAMP/cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,含有7个跨膜结构域和一个信号肽序列；SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白质与预期蛋白质大小一致.上述结果为进一步研究EAAC1的功能及其调控奠定了基础.     

黄鳝微卫星引物筛选及其在保护遗传学上的应用

研究了远缘种鲤的微卫星引物对黄鳝的适用性。结果显示，31对鲤微卫星引物中有11对引物能对黄鳝DNA模饭扩增出特异性带谱。每对引物扩增的等位基因数在3～13个，平均每个位点有5．6个等位基因，显示了较高的多态性。其中引物P1最理想，其PCR扩增产物能区分来自湖南、广东和孟加拉3个不同地域的黄鳝种群。应用微卫星技术对3个不同地域的黄鳝基因组DNA多态性分析结果显示，湖南、广东和孟加拉黄鳝群体内平均相似率依次为95．5％，95.8％和93．5％，平均变异度依次为0．045，0．042，0．063。群体间的相似率及变异度分析显示：湖南黄鳝和广东黄鳝群体间平均相似率为91．0％，变异度为0．045；湖南黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为55．7％和0．443；广东黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为58．6％和0．414。综合微卫星分析结果、黄鳝的外形特征及地理位置，可以推测，广东黄鳝与湖南黄鳝为同一个生物种的不同地理种群，而孟加拉黄鳝为同属中另一个种。     

鲫鱼4群体基因组DNA遗传多样性及亲缘关系的微卫星分析

采用微卫星技术，用9对微卫星引物对4个鲫鱼群体普通鲫鱼(C．auratus auratus)、红鲫(C．suratus red var)、白鲫(C．auratus cuvieri)和彭泽鲫(C．auratus auratus var．Pengze)的遗传多样性及亲缘关系进行研究。结果表明，4种鲫鱼的平均遗传杂合度值在0．607～0．721，其中自鲫0．721、红鲫0．652、彭泽鲫0．629、鲫鱼0．607；平均多态信息含量值在0．530～0．670，其中自鲫0．670、红鲫0．586、彭泽鲫0．549、鲫鱼0．530。由此可见，4个鲫鱼群体的遗传多样性总体水平较高，但白鲫的遗传多样性最高，鲫鱼的遗传多样性最低。在4种鲫鱼群体间，鲫鱼和白鲫群体间的遗传相似性指数最小(0．714)，遗传距离值最大(0．286)，说明这两种群体亲缘关系较远；白鲫与红鲫群体间遗传相似性指数最大(0．812)，遗传距离值最小(0．188)，这可推断白鲫与红鲫亲缘关系较近。聚类分析结果表明，白鲫和红鲫亲缘关系较近，而鲫鱼和彭泽鲫亲缘关系较近。研究鲫鱼遗传多样性对鲫鱼种质资源的保护和遗传改良具有重要意义。     

FIASCO法筛选鳜鱼微卫星标记

通过FIASCO(Fast Isolation by AFLP Sequences Containing repeats)法构建鳜鱼(Siniperca chuatsi)基因组微卫星富集文库,分离微卫星DNA序列并对其特征进行分析。鳜鱼基因组DNA经MseⅠ限制性内切酶消化后,选取200~800 bp的片段与MseⅠ接头连接,用生物素标记的寡核苷酸探针(AC)8、(CT)8、(AT)7、(GATA)8、(GATT)7与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,变性洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增形成双链,然后克隆到pGEM-T载体上,转化至DH5α中,首次成功构建鳜鱼基因组微卫星富集文库。对其中100个阳性克隆进行测序,60个(60%)含有微卫星序列(GenBank Accession Number:DQ789247~DQ789306)。成功设计了47对鳜鱼微卫星引物,并合成21对引物进行PCR扩增,结果筛选出18个多态性微卫星标记。结果表明:FIASCO法能有效提高筛选微卫星标记的效率。本研究筛选的微卫星标记可以用于鳜鱼遗传背景分析和遗传连锁图谱构建,并将为鳜鱼基因组结构分析、标记辅助育种以及数量性状位点(QTL)基因的定位等研究提供候选微卫星标记。     

黄鳝微卫星标记筛选及其在不同性别表型群体中的遗传多态性

采用FIASCO(Fast isolation by AFLP sequences containing repeats)法进行黄鳝微卫星标记筛选并将其应用于黄鳝性别差异群体的遗传变异分析.黄鳝基因组DNA经酶切、微卫星核心序列探针杂交、T载体连接并转化至DH5a中,构建黄鳝基因组微卫星富集文库.随机挑选75个阳性克隆测序,结果发现其中20个含有微卫星序列,利用软件成功设计了15对微卫星引物,经过黄鳝基因组DNA的PCR扩增及电泳检测,筛选8对多态性微卫星引物并对黄鳝3种不同性别表型群体的基因组DNA进行PCR扫描,结果显示:在8个微卫星座位中,共检测到51个等位基因,平均每个座位的等位基因数为6.375个,等位基因频率分布为0.001 2～0.603 3;黄鳝雌性表型群体、间性表型群体、雄性表型群体的平均遗传杂合度分别为0.637 1、0.696 9、0.734 5;平均多态信息含量分别为0.565 6、0.641 6、0.685 8,表明这些微卫星标记在黄鳝不同性别表型群体的遗传多态性发生了改变,它们可作为黄鳝遗传背景分析的分子标记.     

鲢肌肉脂肪酸分离方法效果比较及组成特征分析

采用了三种不同方法,即超声波提取法、索氏提取法和氯仿-甲醇法,从鲢(Hypophthalmichys molitrix)肌肉中提取鱼油,继而进行酸性或碱性甲酯化,经气相色谱/质谱联用技术,对其脂肪酸组成特征进行了定性和定量分析。结果显示:鲢肌肉检测出25种脂肪酸,其中包括7种饱和脂肪酸,8种单不饱和脂肪酸和10种多不饱和脂肪酸。获得不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸含量分别为41.39%、36.15%、33.55%,可见三种分离方法间存在明显分离效果差异。因此得出石油醚作溶剂的超声波萃取法是提取和分析鱼类脂肪酸较理想的方法。