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鲤细胞因子多克隆抗体的制备及检测 总被引:1,自引:1,他引:0
为从蛋白质水平研究细胞因子在鲤体内免疫应答过程中的合成变化,本研究采用PCR技术克隆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β基因含有部分抗原决定簇的片段,引入双酶切位点Bam HⅠ和HindⅢ后连接至p ET-32a/21a,构建相应的表达载体,制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,并以此作为实验工具,检测经嗜水气单胞菌感染后鲤血清中炎性细胞因子的合成变化。结果显示,基因TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β融合蛋白分子量分别约为31.8、31.7、35.3、32.5、18.0和33.6 ku;抗体效价达到2.4×106;在病原菌感染后的不同阶段,促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和抗炎细胞因子IL-10、TGF-β呈现出不同的合成变化。研究表明,制备的抗体具有较高的效价、亲和力和特异性,可用于鲤细胞因子的定量研究,该抗体的获得为鲤免疫应答与细胞因子合成的系统研究奠定了基础。同时,获取的鲤细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β的抗体亦可用于其他鱼类细胞因子蛋白质水平的定量研究。 相似文献
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淇河鲫(Carassius auratus),具有背宽体厚的特点,有较大的经济价值。[目的]探究温度对淇河鲫胚胎发育的影响。[方法]在繁殖季节通过干法授精的方法获得雌核发育淇河鲫胚胎,分别在不同的温度(室温(21℃)、24℃、27℃、30℃、33℃)下孵化,观察胚胎在不同温度下的发育情况,并统计不同孵化温度下胚胎的受精率与孵化率。[结果]根据外部形态特征可以将淇河鲫胚胎发育分为7个阶段,不同温度条件下各阶段经历的时间有显著性差异(P0.05),孵化速率与温度呈负相关,且温度过高会导致胚胎死亡;同时,温度对淇河鲫胚胎受精率和孵化率影响也较大,在21~27℃范围内,受精率与孵化率随着温度的升高而升高;在27~33℃范围内,受精率与孵化率随着温度的升高而降低。[结论]生产上为了提高胚胎孵化效率,可以在胚胎发育早期(受精关键时期)与后期分别采用不同温度以提高其受精率与孵化率。 相似文献
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河南省鳙养殖群体的遗传多样性与选择压力分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为了解人工养殖和选育活动对鳙(Hypophthalmichthys nobilis)遗传多样性的影响,利用线粒体COI基因对河南省鳙养殖群体的遗传多样性进行研究。165个样品共检测出14个单倍型,平均单倍型多样性为0.862 37,平均核苷酸多样性为0.002 23。AMOVA分析显示,大多数遗传变异存在于鳙群体内(97.65%),群体间的遗传变异为4.60%。系统发育树结果表明,养殖鳙群体交叉在一起,没有形成明显的地理格局分布。选择压力分析推测鳙养殖群体主要受到纯化选择作用,说明当前的人工选择对鳙线粒体基因的影响有限。河南省鳙养殖群体的遗传多样性差异较大,可能与其地理距离、异地引种有关。 相似文献
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MITFa及TYR基因在红色锦鲤体色发生不同阶段的表达分析 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究描述了红色锦鲤从出膜到体色形成的过程,总结和归纳不同发育阶段体色变化异同点,筛选出6个体色变化较显著时期,分别为1、2、3、4、12、48日龄。利用荧光定量PCR分析MITFa及TYR基因在红色锦鲤6个体色变化时期的表达情况。结果显示,MITFa基因在1日龄时表达量最高,显著高于48日龄时(P0.05),极显著高于其他4个时期(P0.01)。48日龄时表达量次之,亦极显著高于2、3、4、12日龄4个时期(P0.01)。2、3、4、12日龄4个时期MITFa基因表达量较低且不存在显著差异(P0.05)。TYR基因在1日龄时表达量最高(P0.01),4日龄时表达量显著高于12、48日龄(P0.05),与2、3日龄不存在显著差异(P0.05)。TYR基因表达量在2、3、12、48日龄4个时期差异不显著(P0.05)。MITFa和TYR基因在红色锦鲤体色形成过程中,表达水平整体呈现降低的趋势,其中MITFa基因表达量表现为先降后升,TYR基因则先降后升再降。以上结果显示MITFa、TYR基因与锦鲤体色形成具有一定相关性,但MITFa和TYR基因在体色发生中的相互作用还有待进一步研究证实。 相似文献
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黄河鲤嗜水气单胞菌的分离、毒力及用药分析 总被引:2,自引:0,他引:2
自发病黄河鲤4种组织中分离致病菌,结合形态学和16SrDNA序列分析,发现分离到的细菌属气单胞菌属。回归感染试验发现,患病鱼体出现鳃盖等多处组织出血且伴随肠炎等症状,表明引起黄河鲤发病的致病菌为嗜水气单胞菌,命名为HNAh01。半致死密度测定发现,嗜水气单胞菌HNAh01的半致死密度为1.38×10~7 cfu/mL。药敏结果表明,该致病性嗜水气单胞菌是典型的多重耐药嗜水气单胞菌,但对恩诺沙星极为敏感。因此,选择恩诺沙星对分离菌株进行体外药效学和用药分析试验。药效学试验表明,恩诺沙星对嗜水气单胞菌HNAh01的最小抑菌质量浓度为1.56ng/mL,最小杀菌质量浓度为3.12ng/mL,防耐药突变质量浓度为12.5ng/mL,耐药选择窗的范围为1.56~12.5ng/mL。用药分析结果显示,黄河鲤口服剂量为10mg/kg时对嗜水气单胞菌HNAh01的相对保护率达83%。本文研究为嗜水气单胞菌的防治提供了理论基础与实践依据。 相似文献
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为探究怀山药皮(Chinese yam peel,YP)对淇河鲫免疫的影响,选取平均体重为(106.76±3.74)g的淇河鲫240尾,随机分为对照组(NC)、0.5%怀山药皮添加组(LYP)、1%怀山药皮添加组(MYP)、2%怀山药皮添加组(HYP)4组,养殖8周,检测实验鱼生长指标、血清生化指标及免疫相关基因的表达情况。结果显示:添加怀山药皮对淇河鲫生长指标没有显著性影响;血液生化指标中谷草转氨酶活性在MYP组显著性降低,碱性磷酸酶的活性显著升高;与NC组相比,怀山药皮添加组肝脏细胞膜与核膜完整性增强,胞质破碎,核溶解、偏移现象减轻;与NC组相比,添加怀山药皮上调了抑炎因子(IL-10)、紧密连接蛋白基因(Claudin-1)、抗氧化基因(CAT和GST)和TLR通路基因(TLR4)mRNA表达量。以上结果表明,饲料中添加怀山药皮,能在一定程度上增强鱼体免疫力。 相似文献
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2017年8月到9月在禹州市全境开展鱼类资源调查。根据禹州市的水系分布特征,共设置25个采样点。涵盖颍河、兰河、北汝河等淮河的一级及二级支流,纸坊水库等水库,并且结合当地的农贸市场收集鱼类样本。此次鱼类资源调查共得到鱼类样本32种,隶属于6目11科28属。其中种类最多的是鲤形目,占总数的68.75%;其次是鲈形目,占总数的12.5%;鲇形目和合鳃目各两种,各占总数的6.25%;鹤鱵目和鳉形目各一种,各占总数的3.125%。根据调查的结果显示,禹州市的鱼类资源较为丰富,鱼类在繁殖、摄食等方面呈现出多样化的特点。根据鱼类区系复合体学说,禹州市鱼类资源可以划分为:江河平原区系复合体;北方平原区系复合体;晚第三纪早期区系复合体;南方平原区系复合体。但北方平原区系复合体存在较少。 相似文献