海洋芽孢杆菌N11-8产蛋白酶的发酵条件优化

本研究采用响应面法(RSM)对南极海洋芽孢杆菌(Bacillus sp.)N11-8液体发酵产蛋白酶PBN11-8的发酵条件进行快速优化。通过单因素实验初步确定南极海洋芽孢杆菌N11-8产蛋白酶的最佳碳源和氮源分别为可溶性淀粉和蛋白胨；并通过Plackett-Burman(PB)设计对影响其产酶相关因素进行评估，筛选出具有显著效应的3个因素：温度、氮源和碳源；以最陡爬坡实验逼近至上述因子最大响应区域，进而采用RSM法对其最佳水平范围进行研究，确定最优发酵条件为：可溶性淀粉3 g/L，蛋白胨13.1 g/L，酵母浸粉2.9 g/L，NaCl 5 g/L，KH2PO4 1 g/L，FeCl3·6H2O 2 mmol/L，初始pH值为7.0，温度为34.0℃，转速为200 r/min，装液量为50 ml/250 ml，接种量为4%，培养时间为60 h。最终优化后的酶活达到90.5 U/ml，比初始酶活提高了23.6%。     

南极半岛周边水域南极磷虾渔场特征分析#br#

为了解南极半岛周边水域内南极磷虾(以下简称磷虾)拖网渔场的特征,基于2013年1月至2019年5月"福荣海"轮在南极半岛周边水域的生产数据,分析了水域内磷虾中心渔场年际空间分布和生产特征。结果表明,南极半岛周边水域内磷虾拖网渔场主要分布于布兰斯菲尔德海峡(Bransfield Strait)、乔治王岛(King George Island)和斯诺岛(Snow Island)3个区域;其中布兰斯菲尔德海峡内是历年磷虾生产最稳定的区域,尤以海峡中部靠近南极半岛一侧水域(58°~60°W、63°~64°S)的作业天数和年产量占比最高;乔治王岛和斯诺岛区域的作业天数和年产量占比较低,且主要分布在岛屿周边近岸水域;布兰斯菲尔德海峡内区域、乔治王岛区域和斯诺岛区域的历年产量占比分别为60.00%~99.97%、0.03%~21.15%和0.01%~17.25%,历年作业天数占比分别为61.76%~98.75%、1.25%~28.68%和0.84%~16.67%。布兰斯菲尔德海峡内渔场的生产主要在3—5月,日产量主要为150 t以下;乔治王岛区域生产主要在1月份,日产量以150 t以下为主;斯诺岛区域的日产量在3月份较高,主要以150~250 t为主。各年度的连续生产期分布区域以布兰斯菲尔德海峡中部水域为主;各日产量区间的生产日历年主要分布在布兰斯菲尔德海峡中部,各日单位小时产量生产日也呈现逐渐集中到布兰斯菲尔德海峡的趋势;各级别亚渔场历年主要分布区域均在布兰斯菲尔德海峡内。     

响应面分析法优化α-环糊精的酶转化工艺

为获得较高的α-环糊精转化产率,采用单因素实验和响应面实验方法,筛选底物种类、底物浓度、加酶量、酶作用时间、作用温度和pH等多个单因素,对海洋芽孢杆菌Y112产的α-环糊精葡萄糖基转移酶产α-环糊精的条件进行了优化。然后利用Plackett-Burman实验筛选得到影响α-环糊精转化率的3个主要因素:底物浓度、温度和pH值。最终采用响应面分析法得到的最佳转化条件为马铃薯淀粉浓度为5%,加酶量200 U/g(淀粉),pH值为8.4,温度30℃,200 r/min反应6 h,α-环糊精转化率均值为28.67%,比优化前的产率提高了2.48倍。     

基于线粒体COI基因序列的磷虾目分子系统进化

为探讨磷虾目物种的系统进化关系,以磷虾目的 50种磷虾为研究对象,分析其线粒体COI基因序列的分子变异,构建系统发育树,初步探讨了磷虾种属间亲缘关系。所分析COI基因可比序列长度为519 bp,共包含258个变异位点,全部为碱基替换,无插入/缺失位点。四种碱基含量分别为A 27.58%、T 35.47%、G 18.88%、C 18.07%,碱基A+T含量(63.05%)显著高于G+C含量(36.95%),表现出明显的T偏倚特点。50种磷虾的种间遗传距离为0.065~0.306,其平均值为0.186;而种内遗传距离为0~0.071,其平均值为0.017,平均种间距离约为种内距离的11倍。根据物种鉴定最小种间遗传距离0.020的观点,COI基因序列间的差异能够很好地区分各磷虾种。基于COI基因分别构建了4种系统进化树:邻接树(neighbor-joining,NJ)、极大似然树(maximum likelihood,ML)、最大简约树(maximum parsimony,MP)及UPGMA(unweighted pair-group method with arithmetic means)树。它们拓扑结构基本一致,均可分为三大支系:假磷虾属处于系统树的基部,是磷虾目中最早分化出来的一支;而包含磷虾种类最多的磷虾属则最后分化出来,表明其为磷虾类中相对较新的一个属。本研究较全面地阐述了磷虾目的系统进化关系,结果表明磷虾目的线粒体COI序列变异可以用来研究磷虾属、种的分类单元及其系统进化问题,具有较好的理论和应用价值。     

豆油替代鱼油对圆斑星鲽幼鱼生长和肌肉脂肪酸的影响

本实验旨在研究饲料中豆油替代鱼油对圆斑星鲽(Verasper variegatus)幼鱼生长和肌肉脂肪酸组成的影响。用豆油分别替代0、25%、50%和75%的鱼油,配制4组等氮、等脂肪的饲料。选择初始体重为(65.47±1.57)g的圆斑星鲽幼鱼360尾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,养殖56 d。结果显示,(1)随着豆油替代水平的升高,增重率(WGR)呈现降低的趋势(P0.05),饲料系数(FCR)呈现升高的趋势(P0.05),25%替代组的WGR高于鱼油组(P0.05)。(2)豆油替代鱼油对圆斑星鲽肌肉的粗蛋白、粗脂肪、灰分和水分含量无显著性影响(P0.05),对肝体比(HSI)、脏体比(VSI)和肥满度(CF)无显著性影响(P0.05),豆油替代组肝脏的脂肪含量显著高于鱼油组(P0.05)。(3)随着饲料中豆油水平的增加,圆斑星鲽幼鱼肌肉亚油酸(C18:2n-6)和亚麻酸(C18:3n-3)显著升高(P0.05),而二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)则显著降低(P0.05)。研究结果表明,在该实验条件下,饲料中高比例的豆油替代鱼油会降低鱼体的生长性能和肌肉脂肪酸营养品质。     

《南印度洋渔业协定》管理措施的新进展及我国的应对策略

印度洋海域是世界渔业的主要作业渔场之一。为管理和养护南印度洋渔业资源，自《南印度洋渔业协定（the Southern Indian Ocean Fisheries Agreement，SIOFA）》生效以来，该组织颁布了16项渔业管理措施，并持续更新。目前，我国鲜有文章对其进行研究。为稳定和拓展我国在南印度洋上的渔业空间，保障我国远洋渔业的权益，密切跟踪南印度洋渔业组织的最新管理动态和履约要求，阐述了组织构架、最新管理措施对我国的影响、目前协定区域的渔情渔况及资源评估状况，为我国适时加入该组织提供参考。研究结果表明，在2019年7月第六次缔约方大会上，SIOFA修订了临时管理底层渔业的养护管理措施，数据收集、报送、验证和交换标准，捕鱼授权和通知养护管理措施，渔业监控养护管理措施4项养护管理措施。新增有关公海登检(high seas boarding and inspection procedures)、降低海鸟兼捕量(the mitigation of seabird bycatch)、底层鲨鱼(management of sharks)、底层鱼种管理(management of demersal stocks)与修正保护区和生态系统工作组工作职责(amendment terms of reference for the PAEWG or new CMM)的5项新养护管理措施。截至目前，该组织设立了Atlantis bank、Coral feature、Fool’s flat feature、Middle of What feature、Walter’s Shoal feature 5个保护区，对金眼鲷(alfonsino)、胸棘鲷（orange roughy）和犬牙鱼（Patagonian toothfish)等底层鱼种初步进行了资源评估，其中，胸棘鲷评估结果为尚未过度捕捞，金眼鲷和犬牙鱼还未完成评估。该渔业组织的管理措施与我国相比较更严谨、更全面，我国作业渔船应当严格遵守该渔业组织的管理要求。目前，该组织还在不断完善相关养护和管理措施，尽早加入该组织才能有助于我国远洋渔业持续、健康、有序地发展，体现国际影响和负责任渔业国家形象。     

沙雷氏蛋白酶MP及其抑制剂LupI的复合物纯化及结晶

沙雷氏蛋白酶属于锌金属蛋白酶M10B亚家族，是一些细菌性疾病的关键致病因子。专一性沙雷氏蛋白酶抑制剂在体外可靶向抑制沙雷氏蛋白酶，从而减弱产沙雷氏蛋白酶的细菌病原体的活性，成为疾病治疗的新思路。沙雷氏蛋白酶MP和其抑制剂LupI均来源于海洋微生物Flavobacterium sp. YS-80-122，本研究分别纯化了蛋白酶MP、抑制剂LupI及MP-LupI的复合物，对MP-LupI复合物进行结晶条件筛选，成功在2种条件下获得MP-LupI复合物晶体，并经X-射线衍射收集到分辨率达2 Å的高质量衍射数据，其晶胞空间为P1 21 1，晶胞参数为a=51.66 Å、b=51.85 Å、c=102.14 Å、α=γ=90°、β=97.68°。     

南极磷虾油中砷甜菜碱在大鼠体内的代谢

为研究南极磷虾(Euphausia superba)油中的砷甜菜碱在大鼠体内的吸收、分布和蓄积情况，随机将雄性Wistar大鼠分为3组：大豆油对照组、磷虾油组、添加100 mg/kg砷甜菜碱的磷虾油组，灌胃剂量为2.625 g油/kg·bw。于灌胃后1、2、4、6、12、24 h，经戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血处死大鼠，并收集12 h和24 h尿液，ICP-MS法检测血浆、肝脏、肾脏、脾和尿液中总砷含量。另连续灌胃同等剂量油脂7 d和30 d，检测肝脏和肾脏中总砷含量。结果显示，磷虾油组和对照组大鼠血浆和脏器中总砷含量各时间点无显著变化；砷甜菜碱磷虾油组大鼠血浆中总砷含量于1 h达到最高，脏器中总砷含量均在6 h达到最高，24 h后降低至最高值的30%以下；85%的砷会在24 h之内随尿液排出体外。7 d和30 d连续灌胃后，2个实验组大鼠脏器中总砷含量较对照组均无显著变化。南极磷虾油中的砷甜菜碱在大鼠体内很少蓄积，大部分于24 h内随尿液排出体外，而长期摄食也未出现脏器蓄积现象。本研究对于指导南极磷虾油及其相关产品的科学消费和拓展应用具有重要意义。     

秋季莱州湾弓子网网囊网目尺寸选择性研究

单船框架拖网(俗称弓子网)是渤海海区常见的作业渔具，对底栖渔业生物选择性差，作业过程中产生大量副渔获物。为改善网囊网目的选择性，2017年9月在莱州湾海域采用“套网法”对网囊网目尺寸分别为15、25、35、45和55 mm的5种网囊进行了选择性实验。结果显示，弓子网对渔获物种类的选择能力较差，具有捕获栖息于作业海域绝大多数底栖种类的能力。随网囊网目尺寸的增加，渔获物质量、尾数逃逸率和产值损失率逐渐增大，短吻红舌鳎(Cynoglossus joyneri)、口虾蛄(Oratosquilla oratoria)、鹰爪虾(Trachypenaeus curvirostris)和日本鼓虾(Alpheus japonicas)的选择性参数(L0.5、SR)呈线性增加。口虾蛄和鹰爪虾的50%选择体长(L0.5)与网目尺寸(m)的线性回归方程分别为L0.5=1.472m+12.63(R2=0.934)和L0.5=1.394m+0.724(R2=0.920)。在目前的渔业资源状况下，为保护口虾蛄和鹰爪虾等经济渔获物资源，兼顾生产效益和幼鱼资源保护，建议将弓子网最小网目尺寸放大至45 mm。