牛双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染的诊治

为了对贵州省贵定县某种牛养殖场种牛死亡原因进行确诊,采用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、细菌分离培养、寄生虫和支原体检测等方法对发病死亡的种牛进行诊断。结果表明:根据流行病学调查、病理剖检初步诊断送检的病死种牛疑似血液原虫、支原体感染后支原体病原核酸检测出特异性条带;血涂片染色镜检观察到大量附红细胞体,感染率为80%(8/10),且红细胞内有典型双芽巴贝斯虫虫体,感染率为40%(4/10)。确诊造成该种牛养殖场种牛发病死亡的原因为双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染。     

贵州水域乌鳢含肉率及肌肉营养成分分析

对贵州水域乌鳢(Channa argus)的含肉率及肌肉营养成分进行了分析测定,采用重量法、索氏提取法、凯氏定氮法分别测定了乌鳢肌肉(鲜样)中水分、灰分、粗脂肪和粗蛋白质。结果表明:贵州水域乌鳢含肉率为68.24%±1.4%;肌肉中(鲜样)水分、灰分、脂肪和蛋白质含量分别为78.48%±1.23%、1.65%±0.11%、3.02%±0.13%、16.74%±0.35%;肌肉中17种氨基酸(除色氨酸)总量为57.687%,乌鳢肌肉中所含人体所需必需氨基酸为28.980%,占氨基酸总含量的50.24%;鲜味氨基酸为22.65%,占乌鳢氨基酸总量的38.33%。乌鳢肌肉中所测得的必需氨基酸比例与FAO评价的标准相近似,所测得第一限制性氨基酸为蛋氨酸和胱氨酸,第二限制性氨基酸是苏氨酸和缬氨酸。     

7个猪品种IBSP基因结构变异SV13的群体分析

应用Hiseq 2000平台测定了香猪的全基因组序列,从中发现整合素结合涎蛋白(IBSP)基因内含子4中存在结构变异,命名为SV13,为了进一步探究SV13在猪群体中的分布,采用PCR技术检测了7个猪品种的SV13基因型。7个猪品种群体中均存在DD、DA和AA三种基因型,对纯合的DD和AA基因型测序,明确D等位基因缺失了227 bp。香猪、可乐猪和糯谷猪群体以DD为优势基因型,大白猪以AA基因型为主,6个地方猪品种群体中D的基因频率明显高于大白猪品种(P0.01),香猪和大白猪群体基因型频率处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P0.05)。SV13可以作为辅助鉴别6个地方猪品种和大白猪的分子标记。     

山羊疱疹病毒Ⅰ型的分离鉴定与致病性

为了查明引起2013—2014年江苏多地育肥羊出现呼吸道症状为主的疾病的病因,通过采集发病羊场鼻拭子,采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒形态结构观察和病毒核酸鉴定,分离到一株山羊疱疹病毒Ⅰ型(caprine herpesvirus 1,CpHV-1),命名为JSHA1405;并对其进行了致病性试验。分离鉴定结果表明:病料接种MDBK细胞后,盲传至第3代时产生明显细胞病变;电镜下可见直径约100nm有囊膜的病毒粒子;gB全基因测序表明其为CpHV-1,序列比对显示JSHA1405株与CpHV-1瑞士分离毒E/CH株相似性最高,为99.2%。致病性试验表明,JSHA1405分离株可导致山羊发热持续一周以上,体温最高可达41.8℃。山羊感染后临床症状明显,表现为精神沉郁、流浆液性或脓性鼻涕,可通过鼻腔/粪便排毒。山羊感染后第7天出现中和抗体,第28天达到最高。这是国内首次报道CpHV-1的分离鉴定及致病性,分离毒JSHA1405具有较强的致病性,为CpHV-1病原学及防控技术研究提供依据与参考。     

2株PEDV贵州分离株M基因的克隆及相似性分析

为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株M基因的变异及分子进化情况,试验采用RT-PCR扩增、目的基因克隆与测序及生物信息学软件对贵州省分离的PEDV-GZAS株和PEDVGZHZ株M基因进行序列分析。结果表明:经RT-PCR扩增,得到的片段大小为695 bp;测序结果证实,贵州分离株M基因核苷酸序列大小为695 bp;贵州分离株PEDV-GZAS株与PEDV-GZHZ株之间同源性为84.2%;PEDV-GZHZ株与瑞士疫苗株(AF353511)之间的同源性为97.7%,与中国贵州(KF150217)、泰国(FJ158546)和美国(KF272920)分离株同源性最高为99.4%;贵州分离株PEDVGZAS株与瑞士疫苗株(AF353511)之间的同源性为97.5%,与中国贵州(KF150217)、泰国(FJ158546)和美国(KF272920)分离株同源性最高为99.3%;此次分离的2株分离株都与中国河南(EU287429)分离株同源性最低为83.1%。PEDV贵州分离株PEDV-GZAS株M基因与泰国(FJ158546)分离株遗传进化关系最近,与中国河北(JF508465)分离株亲缘关系较近;PEDV-GZHZ株与PEDV-GZAS株及参考毒株之间遗传进化关系较远。     

稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP_2细胞株的建立及其对p65核转位影响的研究

为建立一株稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP_2)的细胞株,本研究通过脂质体2000介导的方法将携带有PRRSV NSP_2基因序列的真核表达载体(pcDNA3.1-5'Flag-Nsp_2)瞬时转染于HEK293细胞,应用G418筛选、间接免疫荧光(IFA)与western blot方法进行鉴定,获得了1株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,命名为NSP_2-11C1-HEK293;将TNF-α作用于该细胞株,采用IFA分析稳转细胞内NSP_2对p65入核的影响。IFA结果显示NSP_2主要在细胞浆中围绕细胞核表达,在细胞中的表达率达95%以上;western blot结果显示出现120 ku的蛋白条带,与预期相符。结果表明本研究获得了一株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,在该稳转细胞内NSP_2对p65的入核并没有影响,这为进一步研究揭示PRRSV的致病机理奠定基础。     

遵义市宠物犬细小病毒感染情况调查

为了解遵义市宠物犬细小病毒的感染情况,对遵义市2家宠物医院2016年3月至2017年3月接诊的1 090个疑似犬细小病毒感染病例进行实验室胶体金快速检测诊断。结果:确诊犬细小病毒阳性232例,发病率为21.28%(232/1 090);犬年龄越小、体型(体重)越小,发病率和死亡率越高;公犬发病率明显高于母犬;春、秋季多发,以春季发病率最高。     

半滑舌鳎溃疡病原杀鲑气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)是广受我国消费者认可的名优鱼类,具有很高的营养价值和经济价值,然而,随着工厂化养殖模式的不断发展,疾病成为制约半滑舌鳎养殖业健康发展的关键因素,其中,体表溃疡病为其常见病症。从严重溃疡病半滑舌鳎体内分离到1株优势菌株HX0416,该菌可在TCBS培养基上生长,并可在绵羊血平板上形成清晰的β-溶血环;经过16S rRNA和rpo D基因序列同源性分析并结合生化特性鉴定为杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)。健康半滑舌鳎幼鱼感染试验表明,该菌对半滑舌鳎具有较强致病性,感染72 h(1.04×106cfu·m L-1)对攻毒鱼的致死率达91.7%。药敏试验结果显示,该菌对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星等喹诺酮类和头孢曲松、头孢吡肟等头孢菌素类药物比较敏感,而对硫酸新霉素、土霉素等氨基糖苷类和四环素类药物多重耐药,尤其是对磺胺甲噁唑、氨苄西林等磺胺类和β-内酰胺类药物严重耐药。     

犬IFN-β的克隆及其序列分析

为了分析犬干扰素β(IFN-β)基因分子特征,预测其编码蛋白质的生物学功能,根据GenBank登录的犬IFN-β基因序列(FJ194477)设计合成特异性引物,通过PCR从外周血淋巴细胞总DNA中扩增IFN-β基因CDS区并克隆,应用生物信息学方法对犬IFN-β基因进行序列分析,并对其理化性质以及编码蛋白的二级结构、三级结构进行预测,构建分子系统进化树。结果表明:犬IFN-β基因编码区全长561 bp,共编码186个氨基酸,其分子式可表示为C_(1014)H_(1593)N_(263)O_(290)S_9,分子质量为22.40 ku;属于亲水性蛋白,理论等电点为5.98;含有丰富的二级结构,以α-螺旋(76.88%)和无规则卷曲(19.35%)为主,蛋白三级结构呈弯曲螺旋结构;与貉、威德尔海豹、金钱豹、家猫、宽吻海豚、人、鸡和绿头鸭相对应序列核苷酸序列同源性分别为98.4%、87.2%、85.2%、84.7%、79.0%、74.9%、43.9%和43.3%。说明犬与貉IFN-β核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。     

OCX-32基因内含子变异对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的影响

[目的]探讨OCX-32基因对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的遗传效应,为长顺绿壳蛋鸡的保种选育及开发利用提供参考依据.[方法]以长顺绿壳蛋鸡为材料,采用PCR产物直接测序法筛选OCX-32基因SNP多态位点,实时荧光定量PCR检测组织表达谱,运用SPSS 19.0广义线性模型(GLM)分析SNP位点基因型或双倍型与所测定性状指标的相关性.[结果]在长顺绿壳蛋鸡OCX-32基因中检测到3个SNPs位点,分别是位于内含子1上的g.22592323G>T及内含子3上的g.22597350T>C和g.22597555G>A.卡方(χ2)检测结果发现,g.22597350T>C位点的基因型分布显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05,下同).连锁不平衡分析结果显示,3个SNPs突变位点不存在强连锁不平衡,共发现4种单倍型和8种双倍型,单倍型H1和双倍型H1H2频率最高,分别为0.523和0.345.实时荧光定量PCR检测结果显示,OCX-32基因在长顺绿壳蛋鸡12个组织中存在不同程度的表达,表达量排序为肾脏>心脏>子宫>腹脂>小肠>脾脏>肝脏>腺胃>胸肌>胰腺>肺脏>肌胃.关联分析结果显示,g.22597350T>C位点CC基因型在蛋壳强度和蛋壳重2个品质指标上显著高于CT基因型和TT基因型;双倍型H4H4个体的蛋壳强度显著高于其他7种双倍型个体,蛋壳重显著高于H2H4个体.[结论]OCX-32基因内含子变异能影响长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质,检测到的3个SNPs位点可作为鸡蛋壳品质选择的遗传分子标记,其中突变位点g.22597350T>C的CC基因型和双倍型H4H4是影响蛋壳强度和蛋壳重的关键基因型和双倍型,有利改善蛋壳品质.