8种水产药物对长薄鳅幼鱼的急性毒性试验

在水温(22±1)℃、溶氧量(6.7±0.5)mg/L、p H值7.9±0.2的条件下,采用静态方式水生生物急性毒性试验法,研究8种水产药物对长薄鳅幼鱼(1.95±0.24)g的急性毒性,旨在为长薄鳅的幼鱼培育阶段常规药物的合理使用提供参考数据,并为养殖生产提供有效指导。试验结果显示:氟苯尼考、盐酸强力霉素、聚维酮碘、氯胺T、盐酸奎宁、亚甲基蓝、阿维菌素、敌百虫8种水产药物对长薄鳅幼鱼24 h半致死质量浓度分别为1 691.18、606.03、51.49、32.80、35.97、12.80、0.25、1.54 mg/L;48 h半致死质量浓度分别为1 626.97、486.18、45.51、30.98、26.93、11.16、0.18、1.41 mg/L;72 h半致死质量浓度分别为1 575.34、390.03、40.23、27.96、24.10、9.56、0.16、1.16 mg/L;96 h半致死质量浓度分别为1 515.53、359.99、34.23、27.65、20.17、8.63、0.13、1.10 mg/L;其安全质量浓度分别为451.73、93.87、10.67、8.29、4.53、2.55、0.03、0.35 mg/L。其中,阿维菌素对长薄鳅幼鱼高毒,亚甲基蓝和敌百虫对其中毒,氟苯尼考、盐酸强力霉素、聚维酮碘、氯胺T、盐酸奎宁对其低毒。     

4种中药复方对长江鲟幼鱼抗氧化和抗应激指标的影响

【目的】探讨不同中药复方对长江鲟幼鱼抗氧化和抗应激指标的影响,筛选能有效提高长江鲟幼鱼免疫力及抗病力的中药复方,为中药在长江鲟养殖生产中的推广应用提供参考依据。【方法】将17味中药按照中药配伍理论设计4种中药复方,分别是复方I（鱼腥草:金银花:大黄:茯苓:甘草︰黄芪=3:3:1:2:1:2）、复方II（板蓝根:大黄:五加皮:党参=3:3:4:3）、复方III（金银花:杏仁:贯众:大青叶:山豆根:桔梗=3:2:2:2:3:2）、复方IV（黄芪:黄柏:甘草:山楂:五味子:大黄:党参=3:3:1:2:2:2:2）,以不添加中药为对照组,按0.5 g/kg的添加量进行长江鲟幼鱼饲喂试验,并于第7和第14 d采集血样测定各项血清生理指标。【结果】与对照组相比,复方I组和复方II组可不同程度地提高长江鲟血清超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化物酶（POD）、碱性磷酸酶（AKP）活性及总抗氧化能力（T-AOC）、热休克蛋白70（HSP70）含量,降低丙二醛（MDA）含量,但仅部分指标差异达显著水平（P<0.05,下同）;复方III组和复方IV组可明显提高长江鲟血清SOD、CAT、GSH-Px、POD、AKP活性及T-AOC,降低MDA和皮质醇（COR）含量,且大部分指标与对照组的差异达显著水平。相关分析结果表明,SOD活性与GSH-Px活性及T-AOC、POD活性与GSH-Px活性呈极显著正相关（P<0.01,下同）,POD活性与SOD活性、CAT活性及T-AOC呈显著正相关,SOD活性与COR含量、T-AOC与COR含量呈极显著负相关,GSH-Px活性与COR含量、T-AOC与MDA含量呈显著负相关。【结论】在基础饲料中添加适宜的中药复方对长江鲟幼鱼抗氧化和抗应激能力有显著促进作用,尤其以复方III（金银花、杏仁、贯众、大青叶、山豆根、桔梗）和复方IV（黄芪、黄柏、甘草、山楂、五味子、大黄、党参）的效果最佳,可有效缓解长江鲟幼鱼机体面临的应激反应,达到保护效果。     

齐口裂腹鱼鳃丝细胞系的建立、鉴定及免疫研究

齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)是长江上游水域的珍稀鱼类, 近年来由于环境变化和疾病爆发野外齐口裂腹鱼数量急剧减少, 现已被列入长江上游二级急切保护的特有鱼类, 因此, 对齐口裂腹鱼的保护刻不容缓。建立齐口裂腹鱼细胞系是保护其种质资源的有效手段, 也可以在不伤害现有鱼群的条件下进行多种齐口裂腹鱼相关生物学研究。本研究建立了首个来源于齐口裂腹鱼的细胞系, SPG 细胞系。原代细胞分离自齐口裂腹鱼鳃丝组织, 呈均一的上皮状, 使用含 15%血清的 L-15 培养, 在 15 个月时间里成功传至 55 代。线粒体 COI 基因鉴定, 证明该细胞来源于齐口裂腹鱼, 核型检测细胞染色体数目为 2n=96。在液氮中保存 12 个月的细胞, 复苏后能保持 75%以上活力。EGFP-N3 质粒转染 SPG 细胞后观察到明显的绿色荧光蛋白表达。病毒类似物 poly(I:C)和大肠杆菌脂多糖 LPS 可引起细胞 IL-1β、IL-8、TNFa 和 TLR22 等免疫相关基因表达量升高。表明本研究建立的齐口裂腹鱼鳃丝细胞系可用于免疫学研究。此外, 此细胞系还将在种质保存, 外源蛋白表达和齐口裂腹鱼体外生物学研究中发挥重要作用。     

投喂频率对史氏鲟幼鱼生长、抗氧化和免疫指标的影响

为探究史氏鲟(Acipenser schrenckii)幼鱼的最低适宜投喂频率,将实验鱼的投喂频率分别设定为2、1、0.5、0.25、0.125次/d,养殖56 d后测定其生长、抗氧化和免疫指标。结果显示,随着投喂频率降低,史氏鲟幼鱼的增重率、特定生长率、肝体比和脏体比显著降低(P0.05),但存活率和肥满度无显著性变化(P0.05)。在抗氧化指标中,随着投喂频率降低,肝脏T-AOC、SOD活性呈逐渐降低的趋势,2次/d组T-AOC活性与0.5、0.25、0.125次/d组均存在显著差异(P0.05),但各组之间SOD活性差异不显著(P0.05);肝脏CAT活性和GSH含量呈先升高、后降低的趋势,0.5、0.25次/d组肝脏CAT活性显著高于0.125次/d组(P0.05),1次/d组GSH含量显著高于0.5、0.25和0.125次/d组(P0.05);肝脏MDA含量呈逐渐增加的趋势,0.5、0.25、0.125次/d组MDA含量显著高于2、1次/d组(P0.05)。免疫指标中,随着投喂频率降低,实验鱼肝脏LZM活性逐渐降低,2次/d组与0.125次/组差异显著(P0.05);而肝脏IgM含量呈先升高、后降低的趋势,0.25次/d组显著高于2、0.125次/d组(P0.05)。综合各项指标,建议史氏鲟幼鱼的最低适宜投喂频率为1次/d,以避免投喂频率过低对鱼体造成的胁迫氧化损伤。     

鲈鲤仔鱼饥饿试验及不可逆生长点的确定

[目的]全面掌握鲈鲤仔鱼早期培育过程的摄食特点和饥饿耐受力,为其苗种规模化培育提供技术支撑.[方法]在18.5~21.9℃水温条件下,利用人工繁殖孵化获得的鲈鲤初孵仔鱼进行饥饿试验,研究饥饿胁迫对鲈鲤仔鱼生长、发育、存活、卵黄囊吸收、摄食率及摄食强度的影响,并确定鲈鲤仔鱼的不可逆生长点(PNR).[结果]饥饿对鲈鲤仔鱼全长、体长、体高及肛前长等生长指标有极显著影响(P<0.01,下同),对眼径和鳔等组织器官发育也有明显影响.鲈鲤仔鱼5日龄开口摄食,进入混合营养期,10日龄时仔鱼卵黄囊基本消耗殆尽,鲈鲤仔鱼混合营养期维持5 d.鲈鲤仔鱼5日龄开始摄食外源性营养,初次摄食率约20%,随后逐步提高,至13日龄时达最高值(100%),之后开始下降,在17日龄时下降至40%,低于最大初次摄食率的50%.根据PNR定义,即17日龄是鲈鲤仔鱼的PNR.在5~11日龄期间(饥饿7 d内),鲈鲤仔鱼的初次摄食强度和摄食能力随着饥饿天数的增加呈上升趋势,12日龄后(饥饿7 d以上)则随着饥饿天数的增加呈迅速下降趋势.饥饿组仔鱼的累计死亡率在17日龄(饥饿13 d)时剧增,到18日龄(饥饿14 d)时其累计死亡率达88.00%,而摄食组仔鱼的累计死亡率仅为14.75%;至19日龄(饥饿15 d)时饥饿组仔鱼的累计死亡率高达100.00%,摄食组仔鱼的累计死亡率仍为14.75%.饥饿组鲈鲤仔鱼的50.00%累计死亡率出现日龄为18日龄,即在PNR出现之后.[结论]在18.5~21.9℃水温条件下,鲈鲤仔鱼混合营养期为5 d,PNR发生在17日龄.鲈鲤仔鱼可在5日龄后开始投喂,最佳投喂时间为8日龄,但最晚投喂时间不宜超过13日龄.     

超低温冷冻保存中华鲟F_1精子授精方法研究

利用超低温冷冻保存中华鲟子一代(F_1)的精液,研究4种不同激活液、2种不同的授精方式及5种不同冻精授精量对授精效果的影响。结果表明,冷冻保存365d的中华鲟F_1冻精,用养殖水激活授精效果优于4种激活液,获得(15.04±0.58)%的受精率和(14.6±0.59)%的孵化率。相同条件下,试验1、试验2和试验3的湿法受精率和孵化率分别为(18.3±1.45)%、(13.57±0.76)%、(18.65±0.42)%和(16.82±2.01)%、(11.03±0.98)%、(15.87±1.25)%,湿法授精效果均优于干法授精。用10mL中华鲟卵与不同冻精授精量进行湿法授精,精子密度3.82×109个/mL,稀释比1∶2,冻精活力(35.45±5.26)%,冻精用量0.1~0.6mL,随着冻精用量的加大,受精率和孵化率呈现上升趋势,0.6mL时,受精率和孵化率达最高,分别为(16.43±1.57)%和(14.58±1.35)%,但随着冻精用量的继续加大,其受精率和孵化率随之下降。     

长江中游常见鱼类DNA条形码研究及其电子芯片分析

为建立长江中游常见鱼类的快速鉴别方法,文献调研了7目11科50属64种鱼类名录,GenBank共获取168条线粒体细胞色素c氧化酶I (COⅠ)序列,分析了序列特征、不同阶元Kimura-2-paramater(K2P)遗传距离及系统进化关系。结果显示,64种鱼类的种间遗传距离(平均值为0.084)明显大于种内(平均值为0.0079),NJ树上不同物种均能以较高支持度聚类成独立分支,以线粒体COⅠ序列作为DNA条形码可准确鉴定所研究鱼类;综合利用分子生物学软件筛选物种特异性探针,最终43种鱼类可筛选出112条物种特异性探针,物种识别率为67.2%。本研究验证了DNA条形码芯片技术在长江中游鱼类物种鉴定的可行性,可为该地区鱼类物种多样性保护提供技术支持。     

人工养殖条件下长薄鳅幼鱼周年生长特性的研究

【目的】研究人工养殖条件下长薄鳅(Leptobotia elongate)幼鱼的周年生长特性,揭示其在人工养殖条件下的周年生长规律。【方法】在遵循自然水温变化节律的条件下,采用微流水单养模式,定期测量长薄鳅幼鱼生物学指标,对长薄鳅1龄幼鱼的周年生长特性进行研究。【结果】①长薄鳅幼鱼周年体质量特定生长率范围在(0.18±0.06)～(1.98±0.18)之间,体长特定生长率范围在(0.06±0.02)～(0.60±0.16)之间,体质量的特定生长率大于体长的特定生长率。②长薄鳅的体长和体重的的拟合方程为y=0.018x~(2.8551)(R~2=0.9798),b值为2.8551;全长和体长的拟合方程为y=1.2246x-0.1251(R~2=0.9948)。③水温月均值变化范围在21.90～25.49℃期间,是长薄鳅快速生长阶段。④长薄鳅周年体质量变异系数范围在8.90%～24.66%之间,周年体长变异系数范围在4.74%～10.42%之间,体质量的变异系数大于体长的变异系数。⑤长薄鳅周年肥满度变化范围在(1.24±0.13)～(1.56±0.37)之间。【结论】人工养殖条件下,长薄鳅幼鱼的生长良好。在长薄鳅幼鱼培育过程中,可以根据不同生长阶段的生长特性,控制适宜的养殖条件,分阶段优化投喂策略,促进其快速生长。通过对长薄鳅幼鱼周年生长特性的研究,旨在掌握该种鱼类在人工养殖条件下的生长规律,为长薄鳅的增养殖、增殖放流及物种保护提供基础研究资料和科学依据。