RNA干扰对大鲵蛙病毒主要功能基因表达及其增殖的影响

采用q PCR与病毒滴度测定观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)对大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)、甲基转移酶(methyltransferases,MTases)、DNA多聚酶(DNA polymerase)基因表达与病毒增殖的影响。结果表明,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能推迟鲤鱼上皮瘤细胞(epithelioma papillosum cyprini,EPC)出现病变,且病变程度也较对照组轻。在各功能基因表达量上,NC-FAM对照组与阴性对照组差异不显著(P0.05);而干扰组的干扰率极显著高于阴性对照组,其中siR-DP-1组siRNA对MCP基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P0.01);siR-MT-1、siR-MT-2组siRNA对MTases基因的干扰率为77%,极显著高于其余组(P0.01);siR-DP-1组siRNA对DNA polymerase基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P0.01)。干扰实验组病毒滴度与NC-FAM对照组和阴性对照组相比也有不同程度的降低。阴性对照组lg TCID50为8.362,NC-FAM对照组lg TCID50为7.848,siR-MCP、siR-MT、siR-DP实验组最低lg TCID50分别为5.764、5.317、5.362。证实RNAi能够抑制CGSRV主要功能基因的表达并影响病毒的复制。     

鮰爱德华菌外膜微孔蛋白ompN1、ompN2和ompN3基因生物信息学分析及截段基因的原核表达与其抗原性检测

根据GenBank中鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)外膜微孔蛋白N(outer membrane porin protein,OMP)基因序列(NC_012779.2)设计引物,以鮰爱德华菌Ms12基因组DNA为模板,经PCR扩增后克隆至pMD19-T载体,将阳性克隆菌送公司测序。测序结果通过生物信息学软件对ompN1、ompN2和ompN3序列的氨基酸序列相对分子质量、分子式、信号肽、跨膜区、亲/疏水性、B细胞表位进行预测,并构建系统发育树;根据去信号肽的B细胞表位相对集中区域设计特异性引物,经PCR扩增后,将截段序列克隆至pMD19-T载体,鉴定成功后克隆至原核表达载体pET32a(+)并转化至BL21(DE3)/Rosseta(DE3)进行IPTG诱导表达,最后用兔抗鮰爱德华菌血清对重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3进行免疫原性检测。结果显示扩增得到ompN1(1 143bp)、ompN2(1 056bp)和ompN3(1 053bp)的序列,获得的基因登录号分别为KJ831564、KJ831565和KJ831566。经生物信息学分析显示,OmpN1、OmpN2和OmpN3蛋白分子式分别为C1940H2993N543O622S7、C1817H2723N497O579S5和C1896H2843N519O563S7,相对分子质量大小分别为44 100、40 900和41 800,均为含有1个信号肽和跨膜区的疏水性蛋白,具有1个革兰阴性细菌OM_channels超家族结构域,是1种嵌入型的膜外蛋白;SDS-PAGE电泳检测发现,诱导表达的融合重组蛋白均以包涵体的形式出现在沉淀中,大小分别约为61 800、58 700和59 100;Western-blot分析表明,重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3均能与兔抗鮰爱德华菌全菌血清结合,表明鮰爱德华菌外膜微孔蛋白N具有亚单位疫苗开发的潜力。     

斑点叉尾鮰 链球菌病的发生与诊治

2006年6月到9月，广西横县西津水库网箱养殖的斑点叉尾鮰暴发了一种急性传染病，在发病一周左右时间内就造成了大批斑点叉尾鮰死亡，病害波及4000多口网箱，造成经济损失上百万元。2007年6月5日，广西横县西津水库某养殖户300箱斑点叉尾鮰中10箱出现死亡，3天后波及到80个网箱，死亡率高达90%，至12日死亡达10吨以上。与此同时，同一水域其他养殖户的斑点叉尾鮰也相继发病，     

斑点叉尾 源嗜麦芽寡养单胞菌的脂质体疫苗研究

采用反相蒸发法制备嗜麦芽寡养单胞菌的脂质体疫苗,通过灌胃分别给予各组斑点叉尾(鮰)(Ictalurus punctatus)脂质体疫苗(Ⅰ-Ⅲ组)、嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗(Ⅳ组)和生理盐水(Ⅴ组),每2周给药1次,共3次.于接种疫苗后第1天、14天、28天和第49天采集静脉血,测定白细胞的杀菌活性和血清抗体IgM含量的变化,并用细菌攻毒实验检测免疫保护效应.结果显示,本实验制备的脂质体疫苗粒径约为(0.9±0.3)μm,包封率为53.23%,与嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗相比能显著增强斑点叉尾(鮰)吞噬细胞的杀菌活性和血清抗体:IgM水平.腹腔注射活菌攻毒后,脂质体疫苗免疫的Ⅰ-Ⅲ组的相对免疫保护率分别为34.8%、48.2%和55.4%;而嗜麦芽寡养单胞菌灭活苗免疫的Ⅳ组的相对免疫保护率仅有6.7%,生理盐水对照Ⅴ组保护率则为零.研究表明,口服脂质体疫苗对斑点又尾(鮰)具有显著的免疫保护效应,可作为预防嗜麦芽寡养单胞菌感染的疫苗.     

单克隆抗体(Monoclonal antivodies)技术在水生动物疾病上的研究进展

单克隆抗体的发现和使用,大大提高免疫学检测的特异性和临床治疗的精确性,对生物、化学、医学、免疫学等多个领域的研究有着深远的影响.本文简要介绍了单克隆抗体的技术原理,回顾了单克隆抗体的应用背景,并将目前单克隆抗体在水产上各领域的应用情况进行了总结概括,对该项技术在水生动物疾病上的应用前景进行了展望.     

沙湖水产养殖场连片池塘浚淤工程综述

沙湖水产养殖场是70年代初在围垦吴县唯亭镇南侧原沙湖基础上建设起来的综合性养殖场。养殖水面2200余亩,其西部为1400亩的成鱼养殖湖泊,东部为800余亩的连片格子化池塘。共有大小不等的内塘180只,其中养殖水面为8亩的池塘24只,6～7亩池塘有56只,其余均为4亩以下鱼种池及各种试验用小池塘。（见图1） 20余年来,由于养殖过程中鱼类的排泄物和残饵的滞积以及塘埂泥剥蚀倒塌入池,导致鱼池日趋淤浅,大部份鱼池的淤泥层厚度在0.5米以上,个别池塘竟达0.8米以上。 鉴于含有大量腐植质的淤泥滞积于塘底,非但减少了池塘有效养殖水体,而且也增加了有机耗氧量,以致鱼病频发,捕鱼操作不便,抑制了塘鱼产量进一步提高。为了保持鱼池的良好生态环境,确保和提高渔场的总体经济效益,及时疏浚淤泥势在必行。     

斑点又尾鮰传染性套肠症及其防治

套肠症是近年来发生的一种新型细菌性传染病，危害对象是斑点叉尾鲴（Ictalurus punctatus），已经连续几年造成了斑点叉尾鲤f大批发病死亡，严重地威胁着斑点叉尾鲴养殖的健康发展。目前初步认为该病是由嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）引起的急性致死性传染病，以发生严重的肠炎、肠套叠和脱肛为特征，在短时间内即可引起大量死亡，我们称此病为“斑点叉尾鲴传染性套肠症（Infectious intussusception of channel catfish，IICC）”该病的致病病原和病理变化特征在水生动物疾病中是罕见的。     

斑点叉尾鲴嗜麦芽寡养单胞菌的分离鉴定及系统发育分析

从发生在四川、重庆等省市的斑点叉尾妇急性流行性传染病病鱼的肝脏、肾脏内分离到1株高致病性菌株（CCF00024），人工感染健康鱼表现出与自然痛鱼相同的症状，并从中分离获得同种细菌，证实其为斑点叉尾鲴急性流行性传染病的病原菌。形态、生理生化检测表明，该菌为非发酵型直杆菌，严格需氧，革兰氏阴性，极生多鞭毛，对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不利用产酸，氧化酶阴性，DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性，MR、VP阴性。在以该菌16SrDNA序列（GenBank登录号AY970826）和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16SrDNA序列构建的系统发育树中，分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia）聚在一簇，特剐是与5．maltophiliaM5—1的同源性最高，序列相似性达99．6％，结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia）。药敏试验结果表明，对磺胺甲口恶唑、磺胺异口恶唑、阿齐霉素、洛美沙星高度敏感，而对新霉素、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢唑啉、先锋霉素V和链霉素不敏感。     

斑点叉尾鮰“传染性套肠症”的诊治

斑点叉尾鮰“传染性套肠症”是近年来在我国发生的一种斑点叉尾鮰的新型细菌性传染病，危害很大，已经连续几年造成了大批的斑点叉尾鮰发病死亡，严重地威胁着斑点叉尾鮰养殖业的健康发展。目前初步认为该病是由嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）引起的斑点叉尾鮰的急性致死性传染病，以发生严重的肠炎、肠套叠和脱肛为特征，在短时间内即可引起大批的斑点叉尾鮰死亡，我们称此病为“斑点又尾鮰传染性套肠症（Infectious intussusception of channel catfish IICC）”。由于该病具发病突然，来势凶猛，传染快，呈流行性，死亡快，发病率和死亡率均高等特点，故初期又称其为“斑点叉尾鮰急性流行性传染病”。该病的致病病原和病理变化特征都是在水生动物疾病中罕见的，在此之前，国内外都还未见该菌感染斑点叉尾鮰致病的报道。