黄沙鳖β-防御素基因克隆及其表达分析

[目的]明确β-防御素在黄沙鳖先天免疫中的潜在作用,为开展黄沙鳖绿色病害防治及促进其养殖业健康发展打下基础.[方法]运用RACE克隆黄沙鳖β-防御素基因(Hs-BD1)cDNA序列,采用SignalP-5.0、PredictProtein、PSIPRED、Robetta和Clustal X等在线软件进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR检测Hs-BD1基因在黄沙鳖不同组织中的表达特征及细菌感染前后的表达变化.[结果]Hs-BD1基因cDNA序列全长493 bp,包括72 bp的5'非编码区(5'-UTR)、201 bp的开放阅读框(ORF)及220 bp的3'非编码区(3'-UTR).Hs-BD1基因编码66个氨基酸残基,包括22个氨基酸残基组成的信号肽区、3个氨基酸残基组成的前肽区和41个氨基酸组成的成熟肽区.其中,成熟肽区具有6个保守的半胱氨酸残基(31Cys、58Cys、38Cys、52Cys、42Cys和59Cys)及位于C1和C2间的甘氨酸残基(Gly),即Hs-BD1基因属于β-防御素家族.Hs-BD1氨基酸序列与中华鳖β-防御素16的相似性最高(93.9%),基于β-防御素序列相似性构建的系统发育进化树也显示黄沙鳖与中华鳖和西部锦龟聚为一支,其亲缘关系相对较近.6个保守的半胱氨酸残基分别以C1-C5、C2-C4和C3-C6的连接方式形成3个二硫键;Hs-BD1成熟蛋白三级结构是由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲组成.Hs-BD1基因在黄沙鳖肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的相对表达量较高,在心脏、肠道、肌肉、脑组织和表皮中的相对表达量均较低;以温和气单胞菌攻毒后,Hs-BD1基因在黄沙鳖脾脏中的相对表达量呈上升—下降—上升—下降的变化趋势,在攻毒后第3和36 h共出现2个表达峰值,对应的相对表达量分别是攻毒前(0 h)的20.8和10.6倍,差异均极显著(P<0.01).[结论]Hs-BD1基因在黄沙鳖的多个组织中均有表达,尤其在肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的相对表达量较高,且可被温和气单胞菌感染诱导表达,说明Hs-BD1基因在黄沙鳖抵抗病原感染的过程中发挥调控作用.     

水产养殖病害防治用药急需规范

正一、特别警示2015年9月23日,福建泉州市惠安某水产养殖场场长魏某、副场长林某因涉嫌生产有毒、有害食品案,分别被法院一审判决10年有期徒刑、120万元罚金和7年有期徒刑、65万元罚金。案件起因主要是:养殖场为治疗碰伤的青石斑鱼,在鱼池中非法添加禁药"呋喃西林",15池涉药青石斑鱼约2.7万尾,总价值约65万元。     

黄颡鱼暴发性流行病病原的分离鉴定及其3种毒力基因检测

为查明黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)暴发性流行病的病原菌及其3种毒力基因的携带情况,以常规方法进行细菌分离,人工感染试验确定病原菌的致病性,API 20NE和16S rRNA基因序列分析进行细菌鉴定,PCR扩增法检测病原菌的3种毒力基因。结果显示,从发病症状典型的黄颡鱼肝脏中分离到1株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)GXGP1,与嗜水气单胞菌标准株ATCC 7966T的同源性为99.9%,对黄颡鱼有很强致病力,是引起黄颡鱼暴发性流行病的病原菌,该菌携带有Aer、hly和ahp 3种毒力基因。     

12种药物对罗非鱼无乳链球菌的抑菌试验

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)普遍存在于养殖水体中,可产生外毒素,对动物具有致死性,由无乳链球菌和海豚链球菌(Streptococcus inia)引起的罗非鱼链球菌病被认为是对罗非鱼危害最严重的细菌性疾病,而且链球菌还可随伤口感染人类.近几年来,因罗非鱼链球菌病的暴发流行,给罗非鱼养殖业造成极大的危害,甚至威胁到罗非鱼养殖产业的稳定发展.2011年5月～10月,广西多地暴发罗非鱼链球菌病,危害各种规格的养殖罗非鱼,共造成7127吨鱼死亡,经济损失8610.8万元,已严重制约了广西罗非鱼养殖业的健康发展.研究结果表明,近两年广西养殖罗非鱼链球菌病的病原菌为无乳链球菌,且大多表现为多重耐药菌株.而生产实际中,药物防治仍是目前养殖户针对罗非鱼链球菌病普遍采用的主要控制措施.本试验选取12种常用国标渔药,研究其对无乳链球菌的抑菌作用,旨在为罗非鱼无乳链球菌病的药物防治提供参考.     

广谱高效有机氯杀菌剂--养邦

养邦又名优氯净,是广西梧州市二化厂(邮码:543000)开发生产的新一代广谱高效有机氯杀菌剂,其主要成分为二氯异氰尿酸钠,有效氯含量在55%～60%之间,具有性能稳定,贮存损失少,无刺激性气味,易溶于水,使用安全、方便等优点.与强氯精相比,无论是从经济实用、使用效果,还是从包装贮运等方面都具有很大优势.其最低有效杀菌浓度为0.156毫克/升,鱼类96小时最低半致死浓度为0.5毫克/升,用0.2～0.4毫克/升浓度对鱼、虾、鳖等水生动物细菌性疾病的防治均有功效,特别是常见的细菌性虾病、草鱼三大细菌性疾病的防治效果更显著.在有效防治浓度内,鱼、虾、鳖等均无不良反应(斑禁用).该药在广西推广使用2年多,效果显著,现已逐渐取代强氯精,特别是在对虾养殖上使用,对预防虾病的发生、流行效果非常突出.     

广西水产养殖病害分析及对策

随着水产养殖业的迅猛发展,养殖病害的泛滥流行、乱用滥用药物现象普遍存在,严重影响了水产养殖产品的质量安全,已成为水产养殖业健康发展的"瓶颈".开展水产养殖病害监测,及时发布病害信息,分析病害流行趋势,提出防治措施,是加强水生动物防疫最基础的工作内容之一.2003年,广西水产技术推广总站在广西14个地市58个县区对水产养殖主要品种的病害进行定期定点监测,初步了解了广西水产养殖病害流行及危害情况,分析了病害流行原因和流行趋势,提出了防治措施.