嗜水气单胞菌ompA、flaA基因重组干酪乳杆菌对鲤生长及免疫效果分析

为构建嗜水气单胞菌ompA和flaA基因重组干酪乳杆菌并分别检测其表达产物对鲤生长及免疫效果的影响,实验将目的基因克隆至乳酸菌穿梭表达质粒pPG612中,并电转至干酪乳杆菌中,经诱导后包被饲料对鲤进行饲养56 d,称重并采集血清及组织,分析生长指标及免疫指标变化。在56 d饲养免疫结束后结果显示,生长指标显示重组干酪乳杆菌组与对照组无显著差异,表明重组干酪乳杆菌对生长无影响;免疫效果分析显示,血清中IgM表达水平显著上升。血清中AKP、LZM、SOD、CAT、C3和C4也均显著升高。荧光定量PCR检测发现,免疫后肝脏、脾脏、头肾及肠组织中的细胞免疫因子基因IL-1β、IL-8、TNF-α、 NF-κB、 TLR5及MYD88的表达水平有不同程度的显著提升;其中TLR5及MYD88表达量在Lc-mcs-flaA组高于Lc-mcs-ompA组。攻毒后Lc-mcs-ompA与Lc-mcs-flaA组免疫保护率分别为59%与54%,显著高于对照组。研究表明,本实验构建的重组干酪乳杆菌Lc-mcs-ompA与Lc-mcs-flaA免疫鲤能刺激机体产生免疫应答反应,进而提高自身存活率,为预防鱼类嗜...     

水产动物益生菌及其对肠道菌群影响的研究进展

随着水产动物肠道微生态学的发展,人们已逐步意识到益生菌对水产动物肠道发挥的重要作用,益生菌可通过调节肠道菌群平衡、改善肠道菌群组成等提高水产动物的免疫功能。本文综述了水产动物益生菌及其对肠道菌群的影响。     

查干湖鲢源豚鼠气单胞菌分离鉴定及生物学特性研究

为了探讨2020年初吉林省查干湖分支甩湾子出现鲢大面积死亡现象的原因,从发病鲢中分离纯化出1株具有生长优势的菌株,并对分离菌株进行细菌形态观察和生理生化试验,用16SrDNA和管家基因的序列分析进行分子水平鉴定及系统进化树分析,之后对分离株进行携带毒力基因情况、生长曲线测定、人工感染试验及药敏试验.结果显示,分离菌株为...     

细胞肿大虹彩病毒的研究现状

细胞肿大虹彩病毒(Megalocytivirus)是目前发现的危害鱼类健康的重要病毒性病原,该属病毒广泛分布于日本、韩国、中国、泰国等东南亚许多亚洲国家和地区的近百种淡水、海水鱼类中,致使感染鱼类出现大面积死亡,给水产养殖者造成重大经济损失。文章综述了近年来国内外对细胞肿大虹彩病毒的研究现状,主要对该病毒的流行病学研究、检测方法、疫苗免疫研究方面取得的成果进行综述,并对其今后的研究趋势进行展望。     

3种乳酸菌对乌鳢生长、抗氧化及免疫功能的影响

为研究3种乳酸菌对乌鳢生长、抗氧化及免疫功能的影响,实验选用初始体质量为(3.43±0.05) g的乌鳢360尾,随机分成4组,每组设3个重复,每个重复30尾鱼。分别投喂基础饲料和添加了10~8 CFU/g的乳酸乳球菌L21(L21组)、植物乳杆菌W21(W21组)、粪肠球菌L2(L2组)的实验饲料,8周后,采集乌鳢血清、肝脏、脾脏、肾脏和肠道,以检测相关指标以及基因表达水平的变化。结果显示,与对照组相比,饲料中添加的3种乳酸菌均可显著提高乌鳢的平均增重率(AWGR)、特定生长率(SGR)及饲料效率(FER),其中L21组显著高于其他各组。与对照组相比,L2组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)及碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于对照组,W21和L2组溶菌酶(LZM)活性显著高于对照组,各组免疫球蛋白M(IgM)活性均不显著。各组织中IL-1β、IL-8、IL-10和TNF-α基因表达水平均有不同程度升高,乳酸菌对肠道中免疫相关基因表达均有显著的促进作用。研究表明,本实验条件下,乳酸乳球菌L21对乌鳢的应用效果最好,能够提高乌鳢的生长性能、饲料利用及免疫基因表达,但对血清抗氧化能力并无显著影响。     

鱼类脂肪肝的特征及发病原因研究概况

脂肪肝是养殖鱼类常见的营养性疾病之一,病鱼出现生长缓慢、抗应激能力较差、抗病能力降低等症状。出现脂肪肝病变的成鱼肌肉脂肪含量明显升高,导致其品质下降,严重阻碍了水产养殖业持续健康发展。本文就脂肪肝的症状及组织学特征、鱼类脂肪肝的成因、影响脂肪肝的形成关键基因等方面的研究加以综述,以期为鱼类脂肪肝的防治和更进一步深入研究提供参考。     

维氏气单胞菌AcrV基因的克隆与原核表达

【目的】克隆维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）低钙反应蛋白（AcrV）并进行原核表达，为进一步研究AcrV蛋白的结构功能及AcrV基因工程亚单位疫苗的制备奠定基础。【方法】克隆维氏气单胞菌TH0426菌株AcrV基因，通过生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、二级结构及三级结构。将AcrV基因克隆到pET-30a(+)原核表达载体上，构建原核重组表达质粒pET-30a(+)-AcrV，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，进行EcoR Ⅴ和Xho Ⅰ双酶切鉴定和测序鉴定。用IPTG对 pET-30a(+)-AcrV进行诱导表达，对IPTG浓度（0.2，0.4，0.6和0.8 mmol/L）和诱导时间（2，3，4和5 h）进行优化。在最佳条件下诱导表达重组蛋白AcrV，经镍柱纯化且尿素梯度复性后免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体，进行SDS-PAGE及Western blot分析，对目的蛋白的免疫原性进行检测。【结果】成功获得了1 086 bp的AcrV全基因，编码361个氨基酸。AcrV蛋白是无跨膜结构且不编码信号肽的蛋白，有2个高度保守的结构功能域，属于全α型蛋白。成功构建了原核重组表达质粒pET-30a(+)-AcrV，其最佳诱导表达条件为IPTG 0.8 mmol/L诱导5 h。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示，AcrV蛋白能被鼠抗阳性血清识别，表明其具有一定的反应原性。【结论】成功克隆了1 086 bp的AcrV基因，分析了其编码蛋白的生物信息；获得了免疫原性良好的重组AcrV蛋白。     

粪肠球菌B-8和棒状乳杆菌W-17对鲫鱼非特异性免疫基因表达的影响

为了探究乳酸菌在鲫鱼微生态制剂中的应用，选取鱼源棒状乳杆菌W-17和粪肠球菌B-8饲喂鲫鱼，对比研究2株乳酸菌对鲫鱼免疫指标的不同影响以及各脏器中非特异性免疫基因表达的影响。试验在每克鲫鱼饲料中分别添加1.0×10⁸CFU/mL的粪肠球菌B-8和1.0×10⁸ CFU/mL的棒状乳杆菌W-17，饲喂初始体质量为(30.0±1.0) g的鲫鱼，持续4周。应用ELISA方法检测IL-1β、TNF-α、IL-10、IFN-γ及IgM的含量。并提取鲫鱼心脏、肝脏、脾脏、肾脏和肠道的RNA进行RT-PCR，测定IL-1β、TNF-α、IL-10和IFN-γ的基因表达量。结果表明：在免疫28 d时，乳酸菌组血清中各非特异性抗体含量均高于对照组，且粪肠球菌B-8组高于棒状乳杆菌W-17组。乳酸菌组各脏器中非特异性免疫基因表达量均显著高于对照组，且粪肠球菌B-8组各脏器中非特异性免疫基因表达量高于棒状乳杆菌W-17组。说明粪肠球菌B-8可以在一定程度上增强鲫鱼的非特异性免疫，为该株乳酸菌在鲫鱼养殖业中的应用奠定理论基础。     

饲料中赖氨酸水平对勃氏雅罗鱼生长、饲料利用、血液生化指标、赖氨酸代谢酶活性及相关基因表达的影响

为探讨赖氨酸对勃氏雅罗鱼生长、饲料利用、血液生化指标、赖氨酸代谢酶活性及相关基因表达的影响,配制6种等能(17 MJ/kg)、等氮(37%CP)且不同赖氨酸水平(1.82%、2.27%、2.72%、3.17%、3.62%和4.07%)的实验饲料,以初始体质量为(13.44±1.10) g的勃氏雅罗鱼为实验对象,分6组,每组3重复,每重复50尾,分别投喂6种实验饲料,养殖周期为8周。结果显示:饲料中赖氨酸水平达到3.17%时,该组的勃氏雅罗鱼平均增重率(WG)和特定生长率(SGR)与3.62%组无显著性差异,但显著高于其他各组。2.27%组、2.72%组、3.17%组、3.62%组和4.07%组的饲料效率(FE)和蛋白质效率(PER)均显著高于1.82%组。3.17%组的血清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、总胆固醇(TC)、总氨基酸(TAA)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)和白蛋白(ALB)含量显著高于1.82%组;血清中尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量显著低于1.82%组。各实验组的肝胰脏赖氨酸酮戊二酸还原酶(LKR)活性均存在显著性差异,且随赖氨酸水平的升高而显著升高;2.72%组、3.17%组、3.62%组和4.07%组的肝胰脏氨基乙二酸半醛合成酶(AASS)活性差异不显著,但均显著高于1.82%组和2.27%组。2.72%组、3.17%组、3.62%组的血清LKR活性差异不显著,但均显著高于1.82%组和4.07%组;2.72%组和3.17%组的血清AASS活性显著高于1.82%组和2.27%组,显著低于3.62%组和4.07%组。肝胰脏中AASS基因表达量在2.72%组、3.17%组、3.62%组和4.07%组差异不显著,但均显著高于1.82%组;肝胰脏中阳离子氨基酸转运蛋白-1(CAT1)基因表达量在3.17%组和3.62%组差异不显著,但均显著高于1.82%组、2.27%组、2.72%组和4.07%组。在本实验条件下,饲料中赖氨酸水平为3.17%或赖蛋比为8.5%时,能够提高勃氏雅罗鱼的生长、饲料利用率、蛋白质代谢、赖氨酸代谢和转运能力。