鲤春病毒血症病毒基质蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备

根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)基因组序列(GenBank:NC_002803),人工合成M基因开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化工程菌株BL21 (DE3),在0.1 mmol·L-1 IPTG、37℃下诱导5h,获得高效表达的M蛋白,但其主要以包涵体的形式存在,经超声破碎、包涵体纯化后,再...     

淀粉卵甲藻的危害与诊治

近年来，由于大黄鱼高密度非规范化养殖，海水污染等造成水质严重恶化，不少养殖户利用海区围垦池塘网箱养殖大黄鱼，因池塘内水体交换少，水流小以及其它外界因子的影响，易造成淀粉卵甲藻的大量繁殖，导致对大黄鱼等养殖鱼类的严重危害，现报告闽东地区发生的病例。１　病原　病原为眼点淀粉卵涡鞭虫（Ａｍｙｌｏｏｄｉｎｉｕｍｏｃｅｌｌａｔｕｍ），属于肉鞭动物门、鞭毛亚门、植鞭纲、腰鞭目、胚乳科。该虫的营养体（ｔｒｏｐｈｏｚｏｉｔｅ，ｔｒｏｐｈｏｎｔ），初期为梨形，后期则近于球形，大小为２０～１５０μｍ，最大的达３５０…     

嗜水气单胞菌ZN1攻击鳗鲡后的组织病理观察

采用1/2半致死剂量的嗜水气单胞菌ZN1对鳗鲡进行腹腔注射,在第0 d、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d采集鳗鲡肝、脾、肾、肠,观察鳗鲡经嗜水气单胞菌活菌攻击后各脏器的组织病理变化及脏器的损伤修复情况。结果显示,嗜水气单胞菌活菌ZN1攻击后鳗鲡肝、肾、脾、肠等组织细胞均出现程度不同的病变,且持续时间长达14 d以上,同时血液中的血栓细胞急剧减少,甚至全部消失。上述结果表明嗜水气单胞菌攻击后可引发鳗鲡各脏器发生明显的病理变化,并提示在病原菌攻击引起鳗鲡血栓细胞的减少并恢复缓慢可能是嗜水气单胞菌导致宿主产生败血症状的重要病理机制。     

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质,并在pH 2.5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区,经Mega-10裂解后与Quil A结合制备ISCOMs,电镜下可观察到30～40 nm的多面体的笼格状颗粒结构.经鳗鱼的免疫保护试验证实,ISCOMs组(每尾40～80 μg)保护率高达100%,同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62.5%,未加佐剂的溶血素只有50%.     

表达PRRSV GP2a/GP2b、GP3、GP4、GP5和M蛋白重组腺病毒的构建

以PRRSV FJ-1a株为模板,采用RT-PCR法分别扩增出GP2a/GP2b-3、GP3、GP4、GP5和M蛋白基因片段,双酶切后插入穿梭质粒pDC316.利用AdMaxTM法,将5个重组穿梭质粒分别与腺病毒辅助质粒共转染293细胞,得到重组腺病毒Ad-GP2a/GP2b-3、Ad-GP3、Ad-GP4、Ad-GP5和Ad-M.重组腺病毒滴度为107.7～109.0TCID50·mL-1,而以Ad-GP5滴度最低,仅为107.7TCID50·mL-1.PCR检测第3、6、9代重组腺病毒稳定性,确证重组病毒均能稳定携带目的基因.对目的基因转录的RT-PCR鉴定结果显示,重组腺病毒分别感染293细胞后能转录产生目的基因mRNA.表达PRRSV主要囊膜蛋白基因重组腺病毒的获得,为进一步研制PRRSV基因工程疫苗,解析主要囊膜蛋白功能奠定基础.     

Ⅱ耆水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素 弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。     

小瓜虫抑动抗原研究综述

小瓜虫是重要的淡水鱼类寄生虫.小瓜虫抑动抗原是重要的保护性抗原,它在防治小瓜虫这类体表寄生虫方面有着巨大应用潜力.本文阐述了小瓜虫抑动抗原的发现过程及其生物学意义,并介绍了抑动抗原免疫学研究进展.本综述旨为抑动抗原在小瓜虫疫苗研制中的应用提供理论依据,也为其他体表寄生虫保护性抗原的研究提供参考.     

嗜水气单胞菌单克隆抗体的制备及特性分析

利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT—1和AHl05012株嗜水气单胞菌的菌体单抗，筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株，并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定，这些单抗分属IgM、IgG2a2个亚类，且均具有ELISA反应特性，腹水抗体效价在1：10^4—1：10^6，其中单抗4G4、2H4、GH9具有免疫荧光特性。ELISA特异性分析结果表明，4G4、2H4、FA4、GH9、CF2为嗜水气单胞菌血清型特异性单抗，4G4、2H4识别同一种血清型的嗜水气单胞菌分离株，而FA4、GH9、CF2却识别另外一种血清型的嗜水气单胞菌，并且与其他血清型的嗜水气单胞菌、温和气单胞菌以及鳗弧菌、爱德华氏菌、克鲁氏耶尔森菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌均不反应。Western-blot结果表明，单抗4G4、2H4、FA4所针对的抗原是菌体脂多糖(LPS)，且它们所识别的LPS抗原表位不同。菌体单抗研究结果表明，4G4、2H4和GH93株单抗可应用于嗜水气单胞菌的诊断和血清分型。本研究目的旨为建立一种快速诊断鱼类嗜水气单胞菌病的方法和血清分型方法。     

优球蛋白法纯化欧鳗免疫球蛋白

采用优球蛋白法与饱和硫酸铵分步盐析法纯化欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白(Ig),利用SDSPAGE分析其纯度.试验结果显示:优球蛋白法纯化的欧鳗血清免疫球蛋白出现清晰2条带,纯度高于饱和硫酸铵分步纯化法;ELISA分析优球蛋白法纯化的欧鳗血清效价高于饱和硫酸铵纯化结果;Western-blot结果亦显示纯化的优球蛋白具有抗体免疫学活性.     

一例欧鳗拟指环虫病的诊治报道

2004年8月我省仙游县某鳗场养殖的欧鳗因严重感染拟指环虫病，且继发拟似嗜水气单胞菌感染，出现死亡，经过及时诊断和治疗，取得了较好的效果，现将诊治全过程报告如下：