液氮冻融前处理优化测定浮游植物叶绿素a的初步研究

叶绿素a是水环境评价和水生态研究中的一项重要指标。针对叶绿素a测定中前处理耗时长、提取不完全等问题,研究了液氮冻融前处理对叶绿素a测定效率的影响。以实验室培养的小球藻(Chlorella pyrenoidosa)和微囊藻(Microcystis aeruginosa)藻液为实验材料,通过单因素实验和正交实验设计,探究速冻时间、冻融次数、浸提时间等主要参数对提取效率的影响,并确定液氮冻融前处理测定叶绿素a的最优条件。结果表明,液氮冻融前处理测定叶绿素a的最优条件为速冻30 s、冻融4次、90%的丙酮浸提4 h,在此条件下,小球藻和微囊藻叶绿素a浓度测定相对标准偏差分别为0.57%和2.25%,变异系数CV分别为0.46%和1.84%。野外水样测定结果显示,与丙酮-研磨法、分光光度法(SL 88-2012)、分光光度法(HJ 897-2017)和反复冻融浸提法相比,液氮冻融前处理法的提取效率高于其他方法且测定结果相对偏差更小,浸提时间较其他4种方法缩短50%以上,其浸提效率达93%以上。液氮冻融前处理法对叶绿素a的提取效率明显高于其他方法且数据重现性较好,具有操作简单、结果准确、操作耗时短等特点。