蛋白核小球藻psbA基因的克隆及其在自养和异养培养的表达变化

psbA基因是高等植物和藻类中介导光合电子传递D1蛋白的编码基因,该基因受光照等因素的调控。以单细胞绿藻蛋白核小球藻为材料,克隆了psbA全编码序列并用荧光定量PCR的方法研究了自养和异养藻psbA基因转录水平的变化,以揭示不同培养方式下psbA基因表达变化规律。结果克隆到2 595 bp psbA序列,包括676 bp的 5′-非翻译区和857 bp的3′非翻译区。该psbA基因开放阅读框编码353个氨基酸,A+T百分含量为58.0%,其成熟的D1蛋白加工方式与高等植物高粱相似。荧光定量结果表明,自养藻在光周期内psbA基因表达量先升高后下降,而异养藻psbA表达变化不明显。从自养转为异养2 h 时psbA表达量略有升高,4 h后下降至转化前的0.41倍并缓慢下降,而从异养转为自养psbA表达量增加,4 h时增加至1.69倍,4 h后趋于稳定。不同浓度光合抑制剂DCMU降低自养小球藻psbA转录活性至未添加组的40%~59%,而不同程度地促进了异养藻psbA的转录表达。     

新型风味素对养殖脊尾白虾海鲜风味的影响

运用感官分析和GC/MS技术研究了两种新型海洋风味素对养殖脊尾白虾的感官特征和海鲜风味的影响,以及在暂养过程中的吸收规律。在脊尾白虾室内暂养的饲料中添加从海藻中提取的两种新型风味素DBP和TBP,经过一段时间的暂养后分别测定其体内的风味素含量,并进行感官分析,对各个实验组的明度、色调、香味、风味、异味、滋味、味觉、弹性和嫩度等感官指标进行分析比较、打分,并对虾的色泽、嗅觉、味觉、触觉等感官特征进行整体的描述与评价。结果表明:脊尾白虾能通过饲料添加的途径吸收一定浓度的风味素,两种风味素在脊尾白虾体内的累积能力各不相同。在实验条件下,脊尾白虾肉中风味素TBP的最大累积量为754.5ng·g-1,而对DBP的最大累积量为172.2ng·g-1。感官分析表明,通过在暂养过程中添加适量的风味素TBP可提高脊尾白虾的总体口感和海鲜风味。在脊尾白虾肉中的TBP含量在162.6～451.8ng·g-1时,脊尾白虾具有最好的口感和海鲜味。     

浒苔中MnSOD和CAT基因克隆和表达分析

实验以大型绿藻浒苔为材料,克隆了其抗氧化系统关键酶锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)基因的部分片段,利用荧光定量PCR技术研究了Mn SOD和CAT对温度和水杨酸作用的响应规律。结果获得浒苔318 bp的Mn SOD基因,该Mn SOD推测的氨基酸序列与裂片石莼Mn SOD相似性最高为89%;获得了229 bp的CAT基因,该浒苔CAT编码氨基酸序列与裂片石莼和雨生红球藻CAT序列相似性分别为99%和93%。在利用M n SOD和CAT氨基酸序列构建的系统树中,浒苔均先与裂片石莼聚类,再与其他绿藻聚在一起。不同温度对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响表明,35℃高温培养对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响最显著,其表达量分别为25℃培养的2.18倍和2.05倍;5℃低温培养次之;而15℃与25℃培养对M n SOD和CAT基因表达影响差异不显著(P0.05)。在高温35℃下,添加0.1 mmol/L水杨酸后Mn SOD和CAT基因表达量分别为各自对照的2.08倍和5.30倍,而0.01 mmol/L水杨酸添加后基因表达与对照差异不显著(P0.05)。研究表明,Mn SOD和CAT基因表达的增强不仅是浒苔对高温胁迫的响应,而且也是水杨酸缓解高温对浒苔不利影响的方式之一。     

龙须菜多糖对肺癌细胞增殖能力及形态的影响

为了探讨龙须菜多糖（PGL）对肺癌细胞增殖活力的抑制作用及其形态学的影响,将不同浓度的PGL分别作用24、48、72h于肺癌A549细胞,采用CCK-8和台盼兰拒染法检测PGL对细胞增殖活力及生长的抑制作用,计算死亡细胞数及细胞存活率;相差显微镜和DAPI染色观察PGL对肺癌细胞的形态学影响;AnnexinV-FITC/PI双染法和流式细胞术检测PGL对细胞凋亡的作用。结果显示,随PGL作用浓度及时间的增加,细胞增殖能力及存活率逐渐降低,抑制率逐渐增加,以50 g/mL 作用72 h 最为显著（P<0.01）。细胞形态发生不规则改变,接触生长状态减少,数量减少,细胞核受到损伤,细胞发生凋亡,72h后上述改变更为明显。研究表明,PGL能够抑制肺癌细胞增殖能力、降低细胞活力、改变细胞形态、诱导细胞凋亡,且具有时间—浓度的依赖性;龙须菜的抗肿瘤活性是多种机制共同作用的结果。     

24-表油菜素内酯对海洋红藻龙须菜琼胶合成及其相关基因表达的影响

研究了不同浓度24-表油菜素内酯对3种温度培养龙须菜的生长、琼胶含量及2种琼胶合成相关基因表达的影响。结果显示在15和31 ℃培养时,添加0.1 mg/L的24-表油菜素内酯时龙须菜生长速率最高分别为9.22%和11.73%,而在25 ℃培养时,0.5 mg/L的24-表油菜素内酯对龙须菜生长促进作用最强,为14.98%;在15 ℃培养时,0.5 mg/L的24-表油菜素内酯添加后琼胶合成量最高,为7.76%,而25和31 ℃时则是1.0 mg/L的24-表油菜素内酯添加后琼胶合成量最高,分别为9.82%和6.60%。本研究还扩增得到了分别编码585个和249个氨基酸的葡萄糖磷酸变位酶基因（pgm）和甘露糖磷酸变位酶基因（pmm）,这2条基因都与邹波角叉菜的相应基因相似性最高;利用实时荧光定量PCR检测pmm和pgm基因的相对表达量,结果显示15 ℃时,24-表油菜素内酯浓度为0.5 mg/L时pgm表达量最高,为对照组的1.72倍; 25和31 ℃时在24-表油菜素内酯浓度为1.0 mg/L时pgm表达量最高,分别为对照组的2.38倍和1.51倍;而25和31 ℃时24-表油菜素内酯对pmm基因的表达具有一定的促进作用。研究表明,一定浓度的24-表油菜素内酯能促进龙须菜的生长和琼胶合成,并且pgm基因的表达量与琼胶含量密切相关,能在一定程度上指示琼胶含量的高低。     

水杨酸对龙须菜抗高温生理的影响

以龙须菜为材料,研究了不同浓度水杨酸对高温下龙须菜的生长速率、抗氧化酶、渗透调节物质、藻胆蛋白、叶绿素荧光特性和HSP70基因的影响。结果表明,水杨酸处理组不论是生长、酶活性和膜脂受损情况都不同程度优于对照组,其中5.0、10.0μg/mL处理组效果较好。10.0μg/mL水杨酸处理组效果最为明显,日生长速率与对照组相比增长了340%。在处理第3天,10.0μg/mL处理组各指标达到最大,SOD增长了74%,POD增长了70%,CAT增长了40%。脯氨酸和甘露醇分别增长了70%和26%。藻红蛋白增加了46.2%,藻蓝蛋白增长了40%。与对照组相比,MDA含量第1天下降最为显著,下降了10%。高温胁迫下,龙须菜叶绿素荧光参数Fv/Fm、Fv/Fo、qP和ΦPSⅡ均明显降低,非光化学淬灭(NPQ)呈现先上升后下降的趋势。水杨酸处理能有效减缓5种龙须菜叶绿素荧光参数的降低程度。水杨酸处理后HSP70基因表达量较对照组低。本实验结果表明水杨酸具有增强龙须菜抗高温胁迫的作用。     

低盐胁迫下模拟酸雨对裂片石莼光合作用生理特性的影响

为探讨低盐胁迫下模拟酸雨对裂片石莼光合作用、抗氧化活性等生理特性的影响,实验设置3个盐度梯度、2个p H水平,运用叶绿素荧光仪、液相氧电极等仪器测定叶绿素荧光参数和光合放氧速率,采用氮蓝四唑法、考马斯亮蓝G250法及蒽酮硫酸比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、可溶性蛋白和糖含量。结果发现:(1)模拟酸雨(pH 4.4)处理显著抑制了裂片石莼的生长,且受盐度的影响。p H 8.1、盐度10处理的裂片石莼具有较高的生长速率;盐度越高,模拟酸雨的影响越大。(2)模拟酸雨(pH 4.4)处理显著抑制了裂片石莼的最大光合效率(F_v/F_m)和有效光化学效率(F_v′/F_m′),但受盐度的影响不显著;模拟酸雨和低盐度协同降低了裂片石莼的最大相对电子传递速率(rETRmax)。(3)模拟酸雨(pH 4.4)降低了裂片石莼的暗呼吸和光合放氧速率,但受盐度的影响不显著。(4)正常盐度及正常p H处理的裂片石莼SOD活性最高;在盐度(10、25)处理下,模拟酸雨抑制了裂片石莼的SOD活性;而在盐度5处理时,模拟酸雨提高了SOD活性。(5)相对于海水正常p H处理,模拟酸雨显著降低了裂片石莼可溶性蛋白含量,但其可溶性糖含量显著提高,尤其是在低盐条件下。研究表明,模拟酸雨对裂片石莼生长的影响受海水盐度的调控,这在一定程度上也将影响近岸海域大型海藻的生态群落组成。     

龙须菜多糖的提取纯化及生物活性研究进展

红藻龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)是沿海地区重要的经济海藻,含丰富的蛋白质、碳水化合物、钙、铁等。近年来,龙须菜在食品、化工、医药领域得到广泛应用,引起越来越多研究者的关注。其中,龙须菜中丰富的多糖成分是主要研究对象。综述了近20年来龙须菜多糖的提取纯化方法及其生物活性的研究进展,旨在为龙须菜多糖的应用开发提供参考,也为龙须菜的高值化综合利用提供借鉴。     

海带多酚的提取和抑菌研究

[目的]对海带多酚的提取进行优化,并研究其分离纯化和抑菌作用。[方法]以新鲜海带为试验材料,采用以乙醇为溶剂反复冻融法提取海带多酚,液相色谱分离纯化海带多酚,并利用96孔板进行抑菌试验。[结果]海带多酚提取的最佳条件为:80%的乙醇浸提,60℃浸提3～5 h,提取效果最好。海带多酚的最大吸收在波长574 nm。高效液相色谱分析得到9种组分,经过抑菌试验获得5种抑菌组分。多酚对副溶血弧菌、大肠杆菌、藤黄叠球菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用,对枯草芽孢杆菌无抑菌效应。[结论]试验为深入研究海带多酚提供了参考依据,同时也为海带的高值化利用及新的抗肿瘤药物开发提供一种新的思路。     

海洋生物ACE抑制肽研究进展

血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽是一类通过抑制ACE活性实现降压作用的多肽类物质。天然来源的ACE抑制肽具有安全性高、毒副作用小、可长期服用等优点,目前已经从陆源性植物蛋白、动物蛋白中发现了多种ACE抑制肽。海洋生物是一类重要的新型生物资源,含有大量的蛋白质类物质,通过降解可得到ACE抑制肽。本文运用生物信息学检索方法,对国内外主要海洋生物ACE抑制肽的研究进行了综述,主要从材料来源、降解酶、氨基酸序列以及IC50值4个方面重点介绍海洋鱼、虾、贝、藻等来源的ACE抑制肽,比较了其可能的区别和特征,并对海洋生物ACE抑制肽应用前景进行了展望,旨在为开发和利用海洋生物蛋白,促进海洋生物活性物质的研发提供指导。