长蛸脑显微结构及视腺的超微结构

为研究长蛸神经系统结构及神经调控机制,通过解剖学和石蜡组织切片技术对长蛸的脑部结构进行观察。结果显示,以食道为参照,根据所处位置将脑分为3部分:食道上神经团、食道下神经团以及位于食道上下神经团两侧的视叶区。食道上神经团包含垂直叶、上额叶、下额叶、前基底叶和后基底叶,食道下神经团包含腕叶、足叶、巨细胞叶、色素细胞叶、内脏叶、外套内脏叶和血管舒缩叶,视叶区包含视神经、视叶、视腺、嗅叶、脑脚叶和视神经束。采用石蜡组织切片、光镜和透射电镜技术对视腺进行显微和超显微结构观察,结果发现视腺外有一层结缔组织包裹,位于视神经束区上,与嗅叶和脑脚叶相邻;内部可观察到大量分泌细胞,细胞核较大,直径范围为4～8μm;分泌细胞含有丰富的粗面内质网、高尔基体及高尔基体分泌的分泌小泡与大泡。研究表明,长蛸视腺结构特征与曼氏无针乌贼和真蛸的高度相似。     

栉江珧染色体制备及核型分析

为了解栉江珧(Atrina pectinata)的细胞遗传学特征,取暂养促熟的雌雄亲贝共12枚为研究对象,通过调节暂养水温、采用鳃丝及鳃丝对应部位创面的愈合增生组织为染色体制备材料来改良染色体制备方法,采用常规的热滴片法制备出大量形态好且分散均匀的染色体标本,并进行染色体核型分析。结果显示,适度调节暂养水温和给鳃组织制造微创并以创面愈合增生组织为染色体制备材料均能有效增加组织细胞的分裂增生能力,为染色体制备提供了充足的材料;栉江珧二倍体染色体数目2n=34,雄性染色体组型为2n=8m+10sm+16st,雌性染色体组型为2n=6m+10sm+18st,染色体组型中,雌雄两性中期分裂相的染色体排序基本一致,都有1对染色体相对长度明显大于其他染色体;两性染色体组型有两处明显不同,其一,雄性第14对染色体为中着丝粒染色体,而雌性相对应的是亚端着丝粒染色体;其二,雄性栉江珧相对长度最大的染色体存在异形情形,雌性最大的染色体对则为同形,基本确定栉江珧存在初级的性染色体分化,属于XX/XY型性别决定方式。大型贝类染色体制备方法的改进将有助于丰富贝类细胞遗传学和分类学的研究内容。     

圆斑星鲽piwil2基因的克隆与表达分析

本研究采用RACE末端扩增方法，得到全长为3872 bp的圆斑星鲽(Verasper variegatus) piwil2基因序列，命名为Vvpiwil2，开放阅读框(ORF)长为3192 bp，编码1063个氨基酸，5?-UTR和3?-UTR的长度分别140 bp和540 bp。基于ExPASy、SMART、Signal4.1和NCBI的保守结构域(CDD)数据库在线分析对蛋白序列结构进行预测，推断Vvpiwil2编码的氨基酸分子量为118.6 kDa，理论等电点为9.02，无跨膜结构及信号肽，有3个结构域：ArgoL1结构域、PAZ结构域及PIWI结构域。利用实时荧光定量PCR技术对圆斑星鲽不同发育时期的胚胎、仔稚鱼以及雌雄成鱼的不同组织表达模式进行分析。结果显示，Vvpiwil2基因从胚胎发育早期至高囊胚期均大量表达，之后呈下降趋势，直至孵化阶段。由于胚胎从卵裂至囊胚时期的发育过程主要受细胞质成分引导，直至原肠早期，mRNA开始大量转录合成，实现由母源型向合子型的过渡，推断Vvpiwil2是母源性基因。孵化后仔稚鱼68 d时，Vvpiwil2基因表达量显著高于其他时期，表明Vvpiwil2的功能可能与圆斑星鲽性腺分化过程相关；Vvpiwil2基因在雌雄成鱼性腺中的表达量显著高于其他组织，且卵巢中的表达量显著高于精巢，推测Vvpiwil2基因在卵巢功能的维持中发挥重要作用。本研究结果为解析圆斑星鲽性别决定机制提供了新的靶标基因，为建立全雌化苗种繁育技术打下坚实的理论基础。     

莱氏拟乌贼成体副缠卵腺超显微结构

通过组织学和透射电镜技术对莱氏拟乌贼副缠卵腺的超显微结构进行了研究。结果显示,副缠卵腺由腺壁组织、腺体小管和结缔组织组成,其中腺壁组织由柱状上皮细胞和肌肉细胞组成；腺体小管由单层上皮细胞环绕构成,上皮细胞内细胞器数量丰富,包括线粒体、内质网和高尔基复合体等,管道数量众多且排列紧密,在管腔中可见大量杆状细菌和上皮细胞的分泌物质,管腔内壁着生微绒毛和纤毛；腺体小管外充满结缔组织,其中分布着少量血管和肌纤维。分析认为,莱氏拟乌贼副缠卵腺属于分泌型腺体,分泌物质包括形成卵鞘的凝胶状物质和为共生菌提供营养的物质,共生菌来源属于“水平传递”,其分泌物质具有抗菌活性。     

莱氏拟乌贼纳精囊超显微结构

本研究采用组织切片和透射电镜技术，对莱氏拟乌贼(Sepioteuthis lessoniana)纳精囊进行超显微结构分析，并通过扫描电镜和投射电镜技术观察纳精囊中精子的形态构造。结果显示，莱氏拟乌贼口膜具有1个椭圆形的纳精囊，呈乳白色，交配后雌体的口膜内侧散布大量精子囊。纳精囊由囊壁组织、中心管腔和储精小囊组成，储精小囊数量较多，少数呈圆形或椭圆形，2个或多个储精小囊形成中心管腔，二者的囊腔中均分布大量精子。储精小囊和中心管腔由上皮细胞组成，细胞间排列紧密，其细胞核较大，细胞质中含有多种细胞器，包括线粒体、内质网、高尔基复合体和囊泡等；中心管腔中精子大多排列紧密有序，精子头部朝向纤毛，鞭毛位于囊腔中间。莱氏拟乌贼的精子头部细长，由圆屋顶形的顶体和细长圆柱形的精核组成，线粒体距位于精核后端，尾部为细长鞭毛。研究表明，莱氏拟乌贼纳精囊具有储存精子的功能。其中，储精小囊的上皮细胞具备一定分泌功能，其分泌物质能吸引精子进入纳精囊。