延迟排卵对红鳍东方鲀卵子质量的影响

为探究红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)延迟排卵对卵子生理生化变化及卵质的影响,人为对性成熟亲鱼推迟1~2周挤卵,并将未推迟挤卵组记为A组,推迟1周挤卵组记为B组,推迟2周挤卵组记为C组,研究推迟排卵后卵子内磷酸酶、苹果酸脱氢酶、唾液酸、总氨基酸以及脂肪酸含量等生化参数变化规律及延迟排卵与受精率的相关性。结果显示,推迟1周排卵后,B组受精率显著下降(P0.05),受精率由A组的86.66%降至57.14%;推迟2周后,C组受精率降至31.89%;卵内酸性磷酸酶活力随产卵期推迟而显著下降(P0.05),并与受精率存在显著正相关(P0.05,R~2=0.705);A组苹果酸脱氢酶活力显著高于B、C两组(P0.05,R~2=0.630),总氨基酸含量亦存在相似变化趋势,A、B组显著高于C组(P0.05,R~2=0.706);此外十四烷酸(C_(14:0))、十五烷酸(C_(15:0))、棕榈酸(C_(16:0))、棕榈油酸(C_(16:1n-7))、a-亚麻酸(C_(18:3n-3))、二十碳五烯酸(EPA)在总脂中比例均在正常组中最高,并与受精率存在显著正相关(P0.05),二十二碳五烯酸(C_(22:5n-3))、二十二碳六烯酸(DHA):二十碳五烯酸(EPA)均与受精率呈显著负相关(P0.05)。结果表明,卵子中磷酸酶、苹果酸脱氢酶、总氨基酸、脂肪酸含量与卵子活力存在相关性,在红鳍东方鲀人工授精时,在亲鱼卵子成熟后1周内进行人工挤卵最为适宜。     

大菱鲆水通道蛋白(AQP1、AQP3)以及离子通道蛋白(CFTR、NHE1)对低盐胁迫的响应

在鱼类适应环境盐度变化的过程中，鳃、肾、肠是主要的渗透调节器官，而水通道蛋白(Aquaporins, AQPs)、囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)、钠氢交换体(NHE)又是这些器官中重要的渗透调节基因。为研究AQP1、AQP3、CFTR、NHE1在大菱鲆(Scophthalmus maximus)低盐胁迫过程中的渗透调节功能，本研究采用荧光定量PCR技术，对4种基因在盐度5和盐度10下大菱鲆鳃、肾、肠中表达量随时间的变化进行检测。结果显示，AQP1表达量在鳃中极少(P<0.05)，在肾和肠中较高，低盐胁迫下，盐度5组和盐度10组在鳃中的表达量无显著变化，在肾和肠中均显著上升(P<0.05)。AQP3表达量在肾中极少(P<0.05)，在鳃中较高，在肠中较少，低盐胁迫下，盐度5组和盐度10组在肾中的表达量无显著变化，在鳃和肠中均显著上升(P<0.05)。CFTR表达量在肾中极少，在鳃中较高，在肠中较少，低盐胁迫下，盐度5组和盐度10组在肾中的表达量无显著变化，在鳃和肠中均显著下降(P<0.05)。NHE1在鳃和肠中表达量较少，在肾中较高，低盐胁迫下，盐度5组和盐度10组在鳃中的表达量无显著变化，在肾和肠中均显著上升(P<0.05)。这些结果表明，4种基因表达水平因组织、盐度和时间的不同而不同，反映了这4种基因的功能特异性；在低盐胁迫下，4种基因积极响应，表达量均发生不同程度的变化，表明AQP1、AQP3、CFTR和NHE1在大菱鲆低盐环境适应中可能具有潜在的重要作用。另外，本研究结果可为大菱鲆半咸水养殖和淡化养殖提供理论依据，同时为培育适应低盐环境大菱鲆良种提供理论和技术支撑。     

环境胁迫对大菱鲆C-型凝集素功能的影响

大菱鲆C-型凝集素(SmLec1)是一种重要的免疫因子,本实验通过分析其活性特点以及环境胁迫对其表达调控的影响,探讨其在大菱鲆先天免疫应答过程中的潜在功能以及养殖环境中的应用。实验利用原核表达系统进行重组表达,并通过纯化获得19 ku重组目的蛋白;活性分析结果显示,SmLec1对所选6种细菌的凝集作用存在差异,其中对鳗弧菌和爱德华氏菌具有明显的凝集作用;在选取的8种糖类中,木糖、果糖、蔗糖、乳糖和甘露糖能够抑制SmLec1的凝集活性;在理化因子(pH、温度)中,pH7和温度37°C时对SmLec1的凝集活性产生抑制;鳗弧菌感染实验显示,感染6 h时肝组织的SmLec1表达量明显上升,在12 h时达到最高值,随后有所下降;温度胁迫时肝组织的SmLec1 m RNA表达量受到温度的影响显著,在19°C开始升高,22~27°C呈降低趋势,其他组织变化不显著。盐度胁迫对SmLec1在各盐度的表达量变化不显著。研究表明,SmLec1能够抑制鳗弧菌的感染,其表达受到温度的影响,本研究为进一步明确SmLec1蛋白的抗菌机理和探索对大菱鲆疾病的免疫学防治途径提供科学依据。     

大菱鲆(Scophthalmus maximus)PRL基因、Na+-K+-ATPase a1基因对盐度胁迫的响应

采用荧光定量PCR技术对不同盐度胁迫下各时间点大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼肠、鳃中催乳素(PRL)基因和Na+-K+-ATPase a1两种基因的表达量进行检测。以盐度30为对照组，盐度5、10、40和50为实验组进行数据分析。结果显示，两种基因在两种组织中均有表达，且基因的表达量具有组织和时间特异性。肠组织PRL、Na+-K+-ATPase a1基因的表达量，在盐度50和5条件下，随胁迫时间的延长呈先升高后降低的变化趋势；鳃组织PRL基因表达量，在盐度50和盐度5条件下，随胁迫时间延长先升高后降低，而Na+-K+-ATPase a1基因表达量在低盐条件下(盐度5)没有显著变化，在高盐条件下(盐度50)随时间延长呈现先降低后升高的变化趋势。在肠组织中，两种基因存在极显著的协同作用，随着盐度的升高，两种基因的表达量都呈现先升高后降低的趋势，且相关系数均接近于1；在鳃组织中，在10–40盐度范围内，两种基因的表达存在明显的拮抗作用，当PRL基因的表达量呈现升高(或下降)趋势时，Na+-K+-ATPase a1基因的表达量呈现下降(或升高)趋势，且两种基因的相关系数均为负值。研究表明，PRL具有抑制Na+/K+-ATP酶活性的作用，为今后盐度胁迫分子调控机理研究提供理论依据。