外源因子介导调控ROS对中国鲎血淋巴细胞参数的影响

以鲎血为主要原料制备鲎试剂是我国鲎资源开发的关键产业链。我国鲎种群数量逐年下降,为实现鲎资源的保护和可持续利用,开展对中国鲎造血作用机理的相关研究刻不容缓。本研究向中国鲎体内注射N-乙酰半胱氨酸(NAC)和灭活鳗弧菌(V),比较注射后0, 6, 12, 24, 48小时(h)中国鲎的血淋巴细胞总数、活性氧含量及非特异性免疫酶活性变化。结果表明,与对照组相比,注射NAC后血淋巴细胞总数(THC)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)活性均有下降趋势,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化酶(T-AOC)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)活性均有升高趋势。NAC与不同浓度V共同刺激下,THC、ROS、MDA含量相对仅注射NAC的下降有所减缓,其它酶活性有所升高。而血蓝蛋白(HC)在整个实验中无明显变化。6-48h,NAC组的THC、ROS与V组、NAC和V共刺激组相比呈降低趋势,共同刺激下SOD活性显著高于其它组。48h,NAC、V及共刺激下CAT、T-AOC组间无显著差异,但均高于对照组。NAC+10⁶V的MDA含量在48h最低,AKP活性在12-48h呈升高趋势,而NAC组的LZM活性在48h最高。注射NAC可降低THC、ROS,共刺激可缓和下降,V组THC、ROS升高,但其余血淋巴参数均提高,由此推测NAC和V均能刺激中国鲎血淋巴细胞的免疫机能;机体内的ROS含量对中国鲎血淋巴细胞增殖及再生起着重要作用。     

中国鲎血蓝蛋白提纯及其纯化物的液相色谱串联质谱分析

为了获得高纯度的中国鲎血蓝蛋白并探究其潜在的应用价值，本研究从中国鲎血淋巴中提取了血蓝蛋白并用AKTA蛋白纯化系统进行纯化，使用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术对纯化后的血蓝蛋白进行定性分析，最后从uniprot蛋白数据库下载了22条分属5个物种的血蓝蛋白的氨基酸序列并构建了N-J系统进化树。结果表明，制备的血蓝蛋白纯度较高，从纯化后的中国鲎血蓝蛋白中鉴定到了12种血蓝蛋白的亚基，包括Hemocyanin subunit I、Hemocyanin subunit II、Hemocyanin subunit IIIa、Hemocyanin subunit IIIb、Hemocyanin subunit IV、Hemocyanin subunit V、Hemocyanin subunit VI等，uniprot数据库显示，这些亚基最早在圆尾鲎和美洲鲎体内被发现。N-J系统进化树显示中国鲎血蓝蛋白与圆尾鲎和美洲鲎血蓝蛋白具有高度的同源性，并且鲎科动物血蓝蛋白与凡纳滨对虾、锯缘青蟹的血蓝蛋白有较近的进化关系，这意味着可根据虾蟹血蓝蛋白的功能推测中国鲎血蓝蛋白的功能。本研究结果有助于中国鲎血蓝蛋白的功能预测和应用研究。