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1.
为研究凡纳滨对虾围食膜蛋白在IHHNV感染虾体过程中的作用,实验采用SMART技术构建了凡纳滨对虾肠道组织的全长cDNA文库,电子拼接获得了对虾围食膜蛋白基因全长cDNA序列,并进行了功能分析。全长cDNA文库的库容达1.05×106pfu/mL,重组率为95%。随机挑选1 600个克隆进行测序,去除载体后得到插入长度≥450 bp的有效序列1 531条,根据同源片段长度不小于100 bp,90%同源性的原则对这些序列归并unigene,得到unigene 399条。从所测克隆中得到一个围食膜蛋白基因,其cDNA序列长度为1 002 bp,编码由303个氨基酸组成的蛋白,基因序列比对发现该序列与斑节对虾卵巢围食膜蛋白1和2、围食膜蛋白前体3,短钩对虾围食膜蛋白1、2,以及中国对虾围食膜蛋白编码序列的同源性较高,均达到80%以上。通过半定量RT-PCR对该基因在不同组织的表达分析结果表明该基因在抗感染对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的对虾的心脏和胃中高表达,在肝脏、肠和肌肉中表达较低,在鳃中表达最弱,在眼中不表达;该基因在感染IHHNV病毒的对虾的心脏表达明显减弱,在肝脏、眼、肌肉和鳃中表达较低,在肠道和胃中几乎不表达,说明该基因参与对虾抵御病原体侵入过程。  相似文献
2.
运用生物素与链霉亲和素的强亲和性原理,用生物素-磁珠吸附微卫星富集法,筛选企鹅珍珠贝(Pteria penguin)的微卫星分子标记序列,进而对南海区企鹅珍珠贝的遗传多样性进行分析。对136个菌落中的85个阳性克隆进行微卫星测序,获得64个序列,达到85.93%。所得到的55个重复6次以上的微卫星序列中,除生物素探针中使用的CA重复外,还得到TG、TC、GA的重复序列。重复序列中完美型36个,占65.5%;不完美型14个,占25.5%;混合型5个,占9.1%。利用Primer Premier5.0设计引物  相似文献
3.
运用SMART技术成功构建了低温处理凡纳滨对虾仔虾的全长cDNA文库,文库的滴度为1.05×106 pfu/mL,重组率94%,插入片段平均长度为1.0 kb.随机选取116个克隆进行测序鉴定,获得111条有效序列,其unigene比例79.2%,涵盖了蛋白质合成、细胞骨架、核糖体结构、信号传导、代谢、细胞周期、能量产生与转换、转录、抗逆及防御、生物发育等10多种功能类别,其中与发育(10.34%)及抗逆及防御(10.34%)相关基因占2o.68%.对测序获得的肌肉发育相关trioponinⅠ基因的3个不同拷贝进行了序列和进化比较分析.研究为发育和耐寒相关分子调控机制的探索创造了基础条件.  相似文献
4.
应用光学显微镜和电子显微镜对超低温保存前后南美白对虾精子的形态和超微结构进行了观察。结果发现,正常精子由圆球形的主体部和棘突组成,主体部由顶体、亚顶体区、细胞核和环核细胞质带组成。超低温冷冻处理及升温复苏后受损精子棘突脱落,顶体囊泡化,精子细胞膜皱缩、肿胀,膜间腔增大,损伤严重者,顶体脱落,核变形,核膜破裂,核出现空泡化。结果表明,超低温冷冻处理及升温复苏过程主要造成南美白对虾精子的顶体和膜结构的损伤,致使精子成活率降低。  相似文献
5.
分别以生理盐水、柠檬酸钠-甘氨酸液、海水、KCl-NaCl溶液、Hank’s液、D-Hank’s液为稀释液,不同浓度二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)及海藻糖为抗冻剂,研究超低温冷冻保存香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)精子方法及不同浓度含氨海水对复苏精子的激活效果,以筛选出最适宜精子冷冻保存的稀释液和抗冻剂及其浓度。结果显示,柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液复苏后精子成活率最高,为(82.90%±0.19%);其次是生理盐水(77.57%±0.49%)、D-Hank’s液(72.22%±0.36%)、Hank’s液(70.00%±0.28%)。氨海水终浓度为0.0313%时,复苏后精子活力最强,柠檬酸钠-甘氨酸溶液为稀释液精子活力为(61.25%±3.06%),生理盐水为稀释液精子活力为(68.70%±0.74%)。以生理盐水为稀释液、DMSO浓度为14%冷冻保存时,复苏精子存活率最高,含海藻糖精子存活率为(86.91%±3.14%),不含海藻糖精子存活率为(81.81%±3.68%),以柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液、DMSO浓度为12%时,复苏后精子存活率最高,含海藻糖的为(79.62%±1.95%),不含海藻糖的为(70.58%±2.41%)。  相似文献
6.
为了研究鲎形体与体重之间的关系,进一步探讨其生长特性,分别测定了中国鲎(Tachypleus tridentatus)和圆尾鲎(Carcinoscorpius rotundicauda) 14龄成鲎和10龄幼鲎及不同性别的形态参数(头胸甲宽度及体重)。结果表明,中国鲎和圆尾鲎14龄成鲎和10龄幼鲎以及雌、雄的头胸甲宽度与体重均表现为正相关(R2>0.88);10龄的中国鲎和圆尾鲎异速生长曲线的斜率-回归系数b分别为2.1883和2.2297,而14龄成鲎的回归系数b分别为3.1551和2.6501,10龄和14龄中国鲎雌、雄鲎b值分别为2.314(♀)、1.9626(♂)和3.2295(♀)、2.8674(♂),10龄和14龄圆尾鲎雌、雄鲎b值分别为2.5342(♀)、1.9547(♂)和2.7791(♀)、2.1803(♂),b值均大于1,表明体重增长率大于头胸甲宽度的增长率,处于正生长期,且雌鲎的异速生长率均大于雄鲎;F检验表明,中国鲎和圆尾鲎10龄及14龄不同性别的头胸甲宽度与体重存在极显著的线性关系(P<0.01)。  相似文献
7.
应用荧光标记微卫星技术对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)家系进行亲权鉴定。挑选14个多态信息含量较高的微卫星位点,以人工选育建立的凡纳滨对虾5个全同胞家系为试验材料,采用Cervus 3.0进行亲权分析,并根据家系内个体间的遗传距离进行UPGMA聚类分析。 结果表明,14个微卫星位点的平均等位基因数为 6,平均多态信息含量为0.6896,平均期望杂合度为0.7309,平均观测杂合度为0.7661,第一亲本、第二亲本和双亲的累计排除率分别为0.99721733、0.99996559和0.99999997;进一步模拟分析表明, 要达到亲权鉴定的要求在双亲性别已知时至少需要5个微卫星位点,双亲性别未知时至少需要6个微卫星位点;模拟分析及试验验证所选用的14个微卫星位点最多可以鉴定1954 个已知性别的亲本或1203 个未知性别的亲本。所选用的14个微卫星标记可在生产及科研试验中用于获取凡纳滨对虾系谱信息。  相似文献
8.
针对传统海产亲虾饵料易感染或携带与对虾共患病毒,给育种和苗种繁育工作带来巨大生物安全隐患的问题,以淡水品种水蚯蚓水丝蚓作为替代饵料进行亲虾催熟试验,并以卵黄蛋白原基因的表达水平变化验证饵料的催熟效果。设水蚯蚓水丝蚓、水蚯蚓水丝蚓组合饵料、商业亲虾饲料及传统沙蚕组合饵料等4个饵料组合,同时分别投喂南美白对虾后备亲虾,测定各投喂组的繁殖性能相关参数,并通过荧光定量PCR技术对4种饵料各投喂组进行强化培育和催熟过程中,亲虾肝胰腺和卵巢中VTG的的表达水平的变化进行了追踪研究。结果显示,“水丝蚓”组的性腺增重最高,达1475%,连续产卵率最大,平均为72.08%,与传统沙蚕合饵料组无显著差异性(P>0.05)。南美白对虾肝胰腺和卵巢组织中均存在VTG mRNA,在肝胰腺和卵巢中表达量呈接力式动态变化均呈先上升后下降的表达模式;VTG mRNA的表达量能够一定程度上反映对虾的繁殖性能,有希望发展成为亲虾繁殖性能选育指标;水蚯蚓水丝蚓在促进亲虾性腺发育方面效果较传统沙蚕饵料组合好,在改善亲虾产卵效果方面基本与沙蚕组合相当。具有促进对虾成熟成分,并在促熟过程中呈剂量效应,可作为沙蚕替代饵料用于南美白对虾苗种生产中的亲虾强化培育和催熟。  相似文献
9.
运用生物素与链霉亲和素的强亲和性原理,用生物素-磁珠吸附微卫星富集法,筛选企鹅珍珠贝(Pteria penguin)的微卫星分子标记序列,进而对南海区企鹅珍珠贝的遗传多样性进行分析。对136个菌落中的85个阳性克隆进行微卫星测序,获得64个序列,达到85.93%。所得到的55个重复6次以上的微卫星序列中,除生物素探针中使用的CA重复外,还得到TG、TC、GA的重复序列。重复序列中完美型36个,占65.5%;不完美型14个,占25.5%;混合型5个,占9.1%。利用Primer Premier5.0设计引物40对,合成其中的20对并进行PCR筛选,15对可扩增出特异性条带。研究表明,筛选出的企鹅珍珠贝微卫星分子标记可用于进一步的遗传多样性分析。  相似文献
10.
根据近源物种线粒体序列的同源比对,在16S rRNA基因上下游保守区域设计一对通用引物。PCR扩增获得特异的DNA片段,经克隆、测序和比对证实该片段包含了卵形鲳鲹线粒体16S rRNA全长序列1725bp。对5个个体分别测序后比对,发现卵形鲳鲹16S rRNA基因在钦州湾种群个体间存在至少7个变异位点,使5个个体分别具有5种不同的单倍型。将卵形鲳鲹和鲹科其它物种的16S rRNA序列进行比,根据比对结果构建的鲳鲹科各物种的系统进化树,支持鲹科下设四个亚科(鲹亚科,鰤亚科,鲳鲹亚科,鰆鲹亚科)的分类系统。综上所述,16S rRNA基因既可用于卵形鲳鲹种群遗传多样性分析,又适用于鲹科鱼类的系统进化分析。  相似文献
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