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1.
玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR 检测方法的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】由大斑突脐蠕孢(Exserohilum turcicum)和玉蜀黍平脐蠕孢(Bipolaris maydis)引起的玉米大斑病和小斑病是玉米生产上重要的叶部真菌病害,本研究旨在建立玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法,为玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型田间分布和有性生殖研究提供技术方法。【方法】根据GenBank中已登录的玉米大斑病菌(登录号MAT1-1:GU997138和MAT1-2:GU997137)和小斑病菌(登录号MAT1-1:X68399和MAT1-2:X68398)交配型基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计2种病原菌交配型多重PCR检测特异性引物,采用单因素法对引物的退火温度以及扩增程序中延伸时间和循环数等重要参数进行优化,建立玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法,并对2种病原菌的交配型多重PCR检测灵敏度和特异性进行检验。同时,对田间采集的129株玉米大斑病菌和194株玉米小斑病菌单孢菌株的交配型进行多重PCR检测,以明确建立的交配型多重PCR检测方法的适用性。【结果】建立的多重PCR方法和设计的交配型特异引物StMAT01-2F/R、StMAT02-3F/R、ChMAT01-3F/R和ChMAT02-2F/R可分别扩增出MAT1-1、MAT1-2型菌株大小为816、132 bp(大病斑菌)与490、136 bp(小病斑菌)的特异性目的条带。25 μL多重PCR扩增体系:2×Multiplex PCR Mix 12.5 μL,引物各10 pmol,DNA模板100 ng,退火温度为57.2℃(大病斑菌)和55.0℃(小斑病菌),35个循环。该多重PCR对玉米大斑病菌MAT1-1、MAT1-2型单孢菌株的检测灵敏度分别为0.1、0.01 ng基因组DNA,而对玉米小斑病菌MAT1-1、MAT1-2交配型的检测灵敏度均为0.1 ng基因组DNA。该交配型多重PCR检测方法对玉米大斑病菌和小斑病菌特异性很强,能够很好地区分玉米大斑病菌和小斑病菌相应的近缘种和14株其他真菌菌株。不同地理来源的玉米大斑病菌和小斑病菌交配型检测结果表明,该多重PCR能够准确地检出129株玉米大斑病菌和194株玉米小斑病菌的交配型,且检测结果与随机抽取的菌株杂交验证结果完全吻合。【结论】构建的玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法灵敏度高、特异性好、操作简便,能够准确、快速地检测出玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型,为玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型田间分布和监测及有性生殖研究提供了可靠的技术方法。 相似文献
2.
对分离于云南省部分地区的24个大斑病单孢菌株生理小种鉴定结果表明:0号生理小种仍然是云南省的优势小种,占供试菌株的41.7%;23N号生理小种占33.3%;1号、3号及23号各占供试菌株的8.3%。 相似文献
3.
[目的]从天然植物中寻找新型植物源农药防治玉米大斑病.[方法]通过室内抑菌试验研究核桃青皮、连翘、大黄、柴胡、黄芪和党参6种中草药水提物对大斑病凸脐蠕孢菌[Exserohilum turcicum(Pass.) Leonard et Suggs]的抑制作用.[结果]6种中草药提取物对该菌均具有明显的抑制作用,不同中药的抑菌作用存在一定差异,以核桃青皮的抑菌效果最佳,其次为连翘、大黄、柴胡、黄芪和党参,各药物抑制该菌的半数有效浓度分别为1.04、1.12、1.18、1.39、1.48和1.57 g/ml.[结论]核桃青皮、连翘和大黄水提取物对植物病原菌有良好的抑制效果,为新型天然杀菌剂的研制和开发提供了新途径. 相似文献
4.
5.
Genetic differentiation in populations of Exserohilum turcicum from maize and sorghum in South Africa 下载免费PDF全文
Exserohilum turcicum is the causal agent of northern leaf blight, a devastating foliar disease of maize and sorghum. Specificity of E. turcicum to either maize or sorghum has been observed previously, but molecular evidence supporting host specialization is lacking. The aim of this study was to compare the genetic structure of E. turcicum isolates collected from adjacent maize and sorghum fields in Delmas and Greytown in South Africa. In addition, the mode of reproduction of this pathogen was investigated. Isolates from maize (N = 62) and sorghum (N = 64) were screened with 12 microsatellite markers as well as a multiplex mating type PCR assay. No shared haplotypes were observed between isolates from different hosts, although shared haplotypes were detected between isolates from maize from Delmas and Greytown. Population structure and principal coordinate analyses revealed genetic differentiation between E. turcicum isolates from maize and sorghum. Analysis of molecular variance indicated higher among‐population variation when comparing populations from different hosts, than comparing populations from different locations. Lack of shared haplotypes, high proportion of private alleles, greater among‐population variance between hosts than locations and significant pairwise population differentiation indicates genetic separation between isolates from maize and sorghum. The high haplotypic diversity in combination with unequal mating type ratios and significant linkage equilibrium indicates that both sexual and asexual reproduction contributes to the population genetic structure of E. turcicum in South Africa. 相似文献
6.
7.
单基因Ht1、Ht2、Ht3、HtN处于不同水平抗性杂合状态时对大斑病抗性的基因效应不同。通过单基因Ht1、Ht2、Ht3、HtN与同一水平抗性自交系以及与不同水平抗性自交系组配,研究单基因处于杂合状态时在控制病斑数量、面积、病斑扩展速度、产孢量和潜伏期等方面的单基因、多基因的联合效应。结果表明,抗性单基因HtN处于F1代杂合状态时,控制病斑数和病斑面积的效应最强;单基因处于杂合状态时,湿培48 h病斑全部能产生分生孢子,且处于同一水平抗性杂合状态时,Ht1控制产孢量的效应最强;Ht1处于中水平、Ht3处于高水平和HtN处于低水平垂直抗性杂合状态下,控制病斑扩展效应最强;而Ht2处于高水平垂直抗性杂合状态下,控制病斑扩展效应最弱;抗性单基因处于杂合状态下,控制潜伏期多表现超亲现象,HtN控制病害潜伏期比其它单基因显著。 相似文献
8.
The fungitoxic metabolites of Spiraea alpina Pall. were identified using inhibition of Rhizoctonia solani, Gibberella zeae, Pyricularia oryzea and Exserohilum turcicum as an end-point. The major fungitoxic constituent of S. alpina was a new diacylated sugar, structurally elucidated as 6-O-(3′,4′-dihydroxy-2′-methylenbutyryl)-1-O-trans-cinnamoyl-β-D-glucopyranose. This compound could inhibit at 0.1 mg/ml Rhizoctonia solani and Exserohilum turcicum, 87.6% and 63.2%, respectively. 相似文献
9.
CHEN Yong ZHENG Wei WANG Li-ming CUI Hai-lan LI Guo-xi LIU Xin-gui HAN Cheng-chou ZENG Ren-sen 《中国农业科学(英文版)》2009,8(8)
Exserohilum monoceras (Drechsler) Leonard and Suggs is a potential biocontrol agent for the control of Echinochloa species. This fungus causes leaf blight in Echinochloa species, but does not damage rice. Phytotoxicity of the fungal fermented broth was evaluated through the bioassay and the active ingredients were preliminarily isolated by using silica gel column chromatography (CC) in this study. The most active fraction 5-Ⅲ was obtained and analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The results show that 5-Ⅲ consisted of many compounds, in which 36 compounds accounted for 94.24% of total peak area. Di-n-butyl phthalate (DBP) displayed the highest activity accounted for 9.24% of the total peak area, suggesting that DBP may be one of the main active compounds produced by E. monoceras. 相似文献
10.
利用cDNA-AFLP技术和5'' RACE技术在玉米自交系黄早四Ht2上分离并克隆了QM(编码核糖体蛋白L10)同源基因(命名为ZmQM)。其cDNA全长为967 bp, 开放阅读框为738 bp,。该基因编码245个氨基酸的ZmQM蛋白,分子量为27.78 kD, 等电点(pI)为10.69, 预测含蛋白酶C磷酸化位点、N-酰基化位点和酰胺化等位点。玉米ZmQM蛋白与包括人类等l3个物种QM蛋白的同源性比较发现, 氨基酸序列相似性为66%~92%。RT-PCR分析表明, 在接种玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum) 1号小种12 h后, 黄早四Ht2中ZmQM基因表达量较黄早四中明显上调,推测ZmQM基因可能参与黄早四Ht2对玉米大斑病菌1号小种的抗性反应。 相似文献