禾谷镰刀菌Tri8基因敲除及产毒类型分析

禾谷镰刀菌(F.graminearum)产生的单端孢霉烯族毒素会污染小麦籽粒,给人类及家畜健康带来严重威胁。 Tri8基因编码一种分泌型乙酰转移酶,催化毒素前体双乙酰DON(3,15-diAcDON)脱去一个乙酰基,形成3-乙酰DON(3-AcDON)或15-乙酰DON(15-AcDON)。本研究利用重叠PCR及无缝克隆技术构建了 Tri8基因敲除载体pOSCAR-△ Tri8,通过农杆菌介导的遗传转化方法筛选获得 Tri8基因敲除菌株PH-1-△ Tri8,最后利用液质联用仪对原始菌株和PH-1-△ Tri8菌株中的毒素类型进行分析。结果表明,对照菌株毒素以DON为主,未检测到3,15-diAcDON,而突变菌种毒素以3-AcDON和15-AcDON为主,并出现一定数量的3,15-diAcDON。本研究为后续3,15-diAcDON标准品的制备及利用,以及Tri8蛋白结构和体外功能研究奠定了基础。