细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白单抗的制备及夹心ELISA检测方法的建立

为建立一种早期诊断动物细粒棘球蚴病的方法,诱导表达含PET-EgAgB8/2载体的原核表达菌,以表达纯化蛋白为抗原,制备单克隆抗体,并以制备的抗体建立检测细粒棘球蚴病夹心ELISA方法。结果显示,原核表达菌在37℃诱导培养,菌体上清中大量表达,经验证为目的蛋白,用纯化蛋白免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选得到9株具有良好特异性、稳定分泌单克隆抗体的细胞株,经两两配对,选择75C86/15作为包被抗体,27E57/32为酶标二抗,当包被抗体浓度为1.42μg/mL, 4℃包被过夜、用含50 g/L脱脂奶粉的PBST封闭、抗原作1∶100稀释、酶标二抗1∶1 000稀释、反应底物作用15 min时效果最佳,检测方法的特异性为98.8%,敏感性为95.3%。成功制备细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白单克隆抗体并建立了ELISA检测方法。     

高寒草原天然牧草营养品质近红外光谱预测模型的建立

本研究旨在探讨近红外光谱(NIRS)技术在定量分析高寒草原天然牧草营养品质的可行性。试验于2015—2018年,每年6—9月份,从青藏高原高寒草原放牧研究样地收集不同放牧强度(0、3.6、5.3、7.6只/hm2)的混合和4个优势种(莎草科矮生嵩草、蓼科珠芽蓼、蔷薇科金露梅和豆科锦鸡儿)牧草样品共计1 280份,随机分为定标样品集(n=854)和预测样品集(n=426),建立天然牧草干物质(DM)、粗脂肪(EE)、粗蛋白质(CP)、酸性洗涤纤维(ADF)、中性洗涤纤维(NDF)含量及体外干物质消化率(IVDMD)和估算代谢能(EME)营养品质近红外光谱(NIRS)预测模型,实现天然牧草营养品质的快速和准确评估。结果显示:牧草DM、CP、EE、ADF、NDF含量及IVDMD和ME变异较大;DM、CP、ADF、NDF含量及IVDMD和EME的NIRS预测模型的验证决定系数(R2CV)为0.992～0.999,外部验证相对分析误差(RPD)为3.82～5.97,取得了最佳的定标效果,且定标方程均具较好的预测能力,能够成功应用于日常分析。EE含量的NIRS预测模型的R2CV为0.837,外部RPD为2.30,定标效果不理想,定标模型虽不能用于准确的定量分析测定,但仍能应用于牧草EE含量的粗略测定。综上所述,本研究建立的高寒草原天然牧草DM、CP、ADF、NDF含量及IVDMD和EME的NIRS预测模型能够成功应用于日常分析。     

不同精粗比饲粮对育肥前期牦牛生长性能、血清生化指标及瘤胃发酵参数的影响

本试验旨在研究不同精粗比饲粮对育肥前期牦牛生长性能、血清生化指标及瘤胃发酵参数的影响。选取3周岁、体重[(164.9±12.9) kg]相近、体况良好的公牦牛48头,随机分为4组,每组12头。4组牦牛分别饲喂精粗比为35∶55(C35组)、50∶50(C50组)、65∶35(C65组)和80∶20(C80组)的试验饲粮。预试期为15 d,正试期为90 d。结果表明:1) C65和C80组的平均日增重(ADG)和干物质采食量(DMI)显著高于C35组(P0.05),C35组的料重比(F/G)显著高于其他3组(P0.05)。2) C65和C80组的血清葡萄糖含量显著高于C35和C50组(P0.05),C65组的血清总蛋白显含量著高于C35组(P0.05),C65组的血清尿素氮含量显著低于C35和C80组(P0.05),C80组的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著高于其他3组(P0.05)。3)C80组的瘤胃液pH显著低于其他3组(P0.05),C65组的瘤胃液氨态氮含量显著低于C30和C80组(P0.05),C80组的瘤胃液总挥发性脂肪酸含量显著高于其他3组(P 0.05),C35和C80组的瘤胃液乙酸含量显著高于C50和C65组(P0.05),C65和C80组的瘤胃液丙酸、丁酸和异丁酸含量显著高于C35和C50组(P0.05),C65组的瘤胃液乙酸/丙酸显著低于其他3组(P0.05)。综上所述,综合育肥前期牦牛生长性能、血清生化指标及瘤胃发酵参数,饲粮精粗比为65∶35时效果最佳。     

青海贵南某牧场犊牦牛腹泻病原的分子鉴定分析

青海省贵南县某牧场发生犊牦牛腹泻疾病,为快速确诊发病犊牦牛腹泻的致病原因,及时防控和治疗,采集犊牦牛腹泻样品15份,利用形态学方法和分子生物学方法进行鉴定与分析。结果显示:引发该牧场犊牦牛腹泻的病原是隐孢子虫(Cryptosporidium)和邱氏艾美耳球虫(Eimeria zurnii,E.zurnii)、牛艾美耳球虫(Eimeria bovi,E.bovi)、椭圆艾美耳球虫(Eimeria ellipsoidalis,E.ellipsoidalis)的混合感染,测序结果显示,瑞氏隐孢子虫(Cryptosporidium ryanae,C.ryanae)的18S rRNA基因与参考序列中国株CP031554/3/2/1同源性在99%以上,各个种球虫与引用参考序列的同源性均在98%以上。同时,遗传进化树显示:本次检测的C.ryanae与中国株C.ryanae 18S rRNA基因同源性关系近,聚成一大支;三种球虫分别与其相同种聚集在一支上。结果表明,该牧场犊牛腹泻是由隐孢子虫和球虫的混合感染造成的,该研究为犊牛腹泻的病原学研究和流行病学调查提供了参考数据,为寄生虫性病原的对症治疗、对因治疗和辅助支持治疗提供了帮助。     

具有除草活性的生防菌株GD-9发酵条件优化及菌剂制备

为了明确具有除草活性的生防菌株GD-9发酵过程中各因子的配比和最优条件,采用单因素试验对菌株最适碳源、氮源、载体、固态发酵基质进行了筛选,应用正交试验设计研究了碳源、氮源、初始含水量、接种量、初始pH、培养时间、培养温度7种因素对菌株活菌数的影响。试验结果表明菌株GD-9最佳固态发酵条件为:氮源NaNO_3 58.4 mg/g,碳源葡萄糖48.4 mg/g,培养基质最适初始含水量为258 mg/g,最适接种量为0.26 mL/g,初始pH 7.6,最佳培养时间147.8 h,最佳培养温度30.7℃,最适宜的载体为黏土,分散剂为聚乙烯醇,稳定剂为膨润土,润湿剂为糊精。通过发酵试验结果制备生防菌株GD-9的固体菌剂,该研究为菌剂的商品化生产奠定基础。     

松弛素对动物乳腺的影响

松弛素是与胰岛素相类似的肽类激素,参与动物复杂多样的生理病理调节,具有很大的应用前景。本文主要对松弛素在动物乳腺发育、泌乳的影响以及参与乳腺癌调节的相关研究进行综述。     

不同动物源志贺菌的分离鉴定及耐药性检测

采用常规法对青海省牦牛、藏羊、猪、鸡等4种动物新鲜粪便中志贺菌进行了分离鉴定,并检测其耐药性。结果显示,475份样品经分离培养、染色镜检、生化试验及血清型检测分离鉴定出72株志贺菌,平均分离率为15.16%(72/475)。血清学鉴定结果为,痢疾1~4型9株、痢疾1型25株、痢疾2型17株、痢疾5~8型15株、痢疾9~12型5株、宋氏2相1株。在刚果红琼脂培养基上27株为Crb+表型,45株为Crb-表型,与致死性试验无显著相关性。72株分离菌对15种抗生素的平均耐药率为28.15%。不同动物源菌株耐药性有较大差异,鸡源、猪源、羊源、牛源志贺菌耐药现象顺序由高到低。阿莫西林+头孢噻吩为主要耐药谱。氨基糖苷类抗生素(丁胺卡那)、喹诺酮类抗生素(氧氟沙星、环丙沙星)、头孢类抗生素(头孢他啶、头孢噻吩)可作为相关疾病的首选药物。