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1.
以兰属花卉虎雪兰组培原球茎为试材,采用玻璃化超低温法对兰花病毒脱除进行了研究,以期为虎雪兰玻璃化超低温法脱毒体系的建立提供参考依据。结果表明:在蔗糖浓度0.5 mol·L-1预培养4 d,然后在蔗糖0.6 mol·L-1加载液冰上处理50 min,之后转入PVS2溶液冰上玻璃化处理120 min,再液氮冷冻40 min,37℃水浴解冻3 min,最后卸载液(1/2MS+1.2 mol·L-1蔗糖)卸载20 min,待恢复培养后,原球茎成活率可达到65%以上,随机检测不同处理样品的脱毒率可达97%。  相似文献   
2.
6种草本药用植物种子超低温保存技术研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
以草本药用植物杜若、过江藤、夏枯草、皱果苋、罗勒和山香的成熟种子为材料,探讨了含水量和冷冻方法对种子超低温保存的影响。结果表明,经液氮超低温冷冻后,6种草本药用植物种子发芽率较对照组均有显著差异(p0.05);适宜的含水量下,种子经过超低温冷冻后其发芽率甚至高于对照组。3种冷冻方法中,玻璃化冷冻法更适合过江藤和山香种子的超低温保存,缓慢冷冻法更适合皱果苋、杜若和夏枯草种子的超低温保存,直接冷冻法适合于杜若和罗勒种子的超低温保存。所以,液氮超低温冷冻法保存杜若等6种草本药用植物种子是可行的;含水量对超低温保存前后夏枯草、山香和罗勒种子的发芽率影响显著。  相似文献   
3.
植物组织培养:最新进展和潜在的应用(英文)   总被引:3,自引:0,他引:3  
植物组织培养体系在基础研究和商业应用中具有巨大的潜能,例如园艺产业。组织培养过程伴随着一系列关于形态学、生理学、生物化学、分子和表观遗传的改变。分子水平的改变主要包括基因突变、DNA重组、染色体变异和表观遗传调控(DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、小RNA调节)。这些改变被认为能促进外植体对培养环境的适应并有益于随后的形态发生。目前,组培已在商业应用和细胞生物学、遗传学、生物化学等基本研究中发挥了重要作用。本文重点介绍了植物组织培养的原理概念、培养基的制作、外植体的选择、各种激素的作用机理、植物离体快速繁殖的3大难题(外植体的污染、褐变、试管苗的玻璃化)以及防止措施,并详细阐述了植物离体快繁、无病毒苗木培育、培养细胞突变体、人工种子和离体培养期间分子水平的变化。  相似文献   
4.
以鲫鱼Carassius cuvieri未成熟的卵细胞为材料,研究了玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞的存活率及琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响。结果表明:鲫鱼卵细胞存活率在1~6 d下降明显,6~8 d下降趋势减弱,保持相对稳定;琥珀酸脱氢酶活性呈显著下降(P<0.05)。玻璃化冻存液VSd组的冻存效果最好,其组分为180.0 g·L-11,2-丙二醇,110.0 g·L-1甲醇,0.1 mol·L-1海藻糖和40.0 g·L-1聚乙二醇。该玻璃化冻存液配方及方法在一定时间内保存鲫鱼未成熟卵细胞具有一定的应用价值。图4表2参22  相似文献   
5.
Two-cell stage and blastocyst stage mouse embryos were equilibrated in a medium containing 7.5% ethylene glycol (EG) and 7.5% dimethyl sulfoxide (DMSO) for 8–15 min. Vitrification was performed in a medium containing 0.5 M sucrose and either 15% EG + 15% DMSO, 17.5% EG + 17.5% DMSO, or 20% EG + 20% DMSO for 30 s. They were then placed either on a hemi-straw (HS) or a hollow fiber vitrification (HFV) device and vitrified by cooled air inside a 0.5-ml straw. In two-cell embryos, a 100% survival rate was obtained from all groups except the 20% HS group (P > .05). All vitrified two-cell groups showed similar rates of blastocyst development to that of fresh control group (P > .05), except 17.5% and 20% HFV groups, which were significantly lower than the other groups (P < .05). In the blastocyst embryos, the HFV groups were divided into two subgroups (non-collapsed; HFV-NC and collapsed; HFV-C blastocyst). Re-expansion rate in 15% HFV-NC, 17.5% HFV-NC, and 15% HFV-C groups was reduced (P < .05), whereas the rest were similar to control. In conclusion, we established a simplified, reliable, and closed system for HFV vitrification applying hemi-straw, which does not require skilled practitioners.  相似文献   
6.
This study assessed the effects of cryoprotectant concentration during equilibration on the efficiency of bovine blastocyst vitrification and the expression of selected developmentally important genes. In vitro produced bovine blastocysts were equilibrated in either 7.5% ethylene glycol (EG) + 7.5% DMSO (Va group) or in 2% EG + 2% DMSO (Vb group) then vitrified on Cryotop® sheets in 16.5% EG + 16.5% DMSO + 0.5M sucrose. After warming, embryos were cultured for 48 hr. Re‐expansion, hatching, and the numbers of total and membrane damaged cells were compared among vitrified groups and a control. There was no significant difference between the vitrified groups in survival, cell numbers and the extent of membrane damage. Vitrification increased the number of membrane‐damaged cells in both groups, however, in a greater extent in the Vb group. Vitrification increased (p < .05) the expression of the HSP70 gene in Va but not in Vb embryos. The expression of IGF2R, SNRPN, HDAC1, DNMT3B, BAX, OCT4, and IFN‐t genes were the same in control and vitrified groups. In conclusion, the concentration of cryoprotectants during equilibration did not affect survival rates; however, normal cell numbers could be maintained only by equilibration in 15% cryoprotectants which was associated with increased HSP70 expression.  相似文献   
7.
8.
张娟  王新建  闫福军 《新疆农业科学》2011,48(12):2255-2260
【目的】采用玻璃化法对杏资源茎尖进行超低温保存。超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的最好方法,保存后的材料遗传上较为稳定。【方法】以库车小白杏为试材,对茎尖(外植体)组织培养的培养基及激素浓度做了初步选择。【结果】选择MS+0.5NAA+0.2 6-BA激素配方可使杏的茎尖最易形成愈伤材料,而选择MS+0.1 NAA+0.1 6-BA+0.1GA激素配方可使由茎尖获得的愈伤材料最易分化出根。【结论】用玻璃化法对组织培养获得的愈伤材料结合不同的低温保存时间、脱水处理时间与化冻方法进行比较试验可知,预冻温度-30℃、玻璃化液保护剂脱水60 min、40℃水浴5 min解冻,可使超低温保存的材料复活率最高。  相似文献   
9.
【目的】研究胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)在猪孤雌囊胚玻璃化冷冻后恢复培养中的作用。【方法】本试验以体外培养第5天的猪孤雌激活囊胚为材料,将新鲜和冷冻囊胚分别在含10% FBS(V/V)的胚胎培养液中继续培养48 h,即分为新鲜组(Fresh)、新鲜+FBS组(Fresh+FBS)、冷冻组(Vitrified)、冷冻+FBS组(Vitrified+FBS)。观察各组囊胚的扩张和孵化能力,检测胚胎的细胞膜损伤、凋亡细胞数目、总细胞数目、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体活性以及发育相关基因的表达水平。【结果】与Fresh和Vitrified组相比,Fresh+FBS和Vitrified+FBS组的完全扩张率、孵化率和囊胚细胞总数均显著提高(P<0.05),细胞膜损伤率和细胞凋亡率均显著降低(P<0.05)。与Fresh组相比,Vitrified组ROS水平显著升高(P<0.05),Fresh+FBS和Vitrified+FBS组ROS水平均显著降低(P<0.05)。Vitrified+FBS组的线粒体活性显著高于Vitrified组(P<0.05)、显著低于Fresh+FBS组(P<0.05),与Fresh组无显著差异(P>0.05)。相比于Fresh组,Vitrified组POU结构域与类转录因子1(POU5F1)表达水平显著上升(P<0.05)、过氧化氢酶(CAT)表达水平显著下降(P<0.05)。增殖细胞核抗原(PCNA)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、BCL2相关X蛋白(BAX)/BCL2L1的表达水平在Fresh和Vitrified组之间均无显著性差异(P>0.05)。Fresh+FBS和Vitrified+FBS组中PCNASOD1和CAT的表达水平显著高于Fresh和Vitrified组(P<0.05)。【结论】体外培养第5天的新鲜和冷冻猪孤雌囊胚在10% FBS中继续培养,其发育能力及胚胎质量均得到明显改善。  相似文献   
10.
Our goal was to develop a standardized approach for sperm vitrification of marine fish that can be applied generally in aquatic species. The objectives were to: (i) estimate acute toxicity of cryoprotectants over a range of concentrations; (ii) evaluate the properties of vitrification solutions (VS); (iii) evaluate different thawing solutions and (iv) evaluate sperm quality after thawing by examination of motility and membrane integrity. Sperm were collected from red snapper (Lutjanus campechanus), spotted seatrout (Cynoscion nebulosus) and red drum (Sciaenops ocellatus). A total of 29 combinations of cryoprotectants were evaluated for toxicity and glass formation. Samples were loaded onto 10‐μL polystyrene loops and plunged into liquid nitrogen. There was a significant difference (P < 0.05) in post‐thaw motility among VS and among species when using the same VS. The sperm in VS of 15% DMSO + 15% ethylene glycol + 10% glycerol + 1% X‐1000? + 1% Z‐1000? had an average post‐thaw motility of 58% and membrane integrity of 19% for spotted seatrout, 38% and 9% for red snapper, and 30% and 19% for red drum. Adaptations by marine fish to higher osmotic pressures could explain the survival in the high cryoprotectant concentrations. Vitrification offers an alternative to conventional cryopreservation.  相似文献   
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