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1.
通过体外DNA重组技术将P25基因连接在pET28a(+)载体上,构建成重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及DNA序列分析,融合的P25基因序列正确。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经过亲和层析得到纯品目的蛋白P25。  相似文献
2.
 将人工合成的人胸腺肽α1(Tα1)基因插入到载体pBV222,转化大肠杆菌DH5α菌株并置42℃诱导表达可溶性融合蛋白。融合蛋白经镍亲和层析柱纯化,加入肠激酶切割,再将酶切反应体系回到镍亲和层析柱。所获穿过液中的重组胸腺肽α1(rTα1),经十二烷基硫酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和反相高效液相色谱(RP HPLC)分离及分析,纯度分别为94.5%和72%。以癌症患者外周血淋巴细胞开展玫瑰花环试验,所获rTα1纯品显示出与化学合成Tα1(sTα1)相同的生物学活性。  相似文献
3.
[目的]研究半胱氨酸(Cys58)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)与农药化合物结合特性的影响。[方法]利用重叠延伸PCR法,将PlxyCSP1中Cys58突变成色氨酸(Trp58),获得突变体PlxyCSP1-M2。构建表达载体,表达突变蛋白,并进行Western Blot检测。[结果]构建了突变基因的原核蛋白表达载体pET32a-PlxyCSP1-M2,并表达了大小为35 kDa的融合蛋白。[结论]利用重叠延伸PCR法成功在原核系统中表达了PlxyCSP1突变蛋白。  相似文献
4.
分析甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)围食膜几丁质结合蛋白SeCBP66氨基酸序列,利用PCR技术扩增获得缺失信号肽编码区围食膜几丁质结合蛋白的基因△(s)-secbp66。将△(s)-secbp66克隆到表达载体pET28a和pPIC9K,分别转化大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115进行原核及真核表达;将△(s)-secbp66克隆到质粒pFastBacTM,转化大肠杆菌DH10Bac构建重组Bacmid,转染昆虫细胞系Sf9及BTI-TN-5B1-4(HighFive)从而在昆虫细胞系中进行表达。结果表明:SeCBP66在原核细胞中未见表达,在酵母细胞中表达产物呈弥散状,而在昆虫细胞系中则能稳定的表达116kDa的特异蛋白。  相似文献
5.
[目的]研究半胱氨酸(Cys58)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)与农药化合物结合特性的影响。[方法]利用重叠延伸PCR法,将PlxyCSP1中Cys58突变成色氨酸(Trp58),获得突变体PlxyCSP1-M2。构建表达载体表达突变蛋白,并进行Western Blot检测。[结果]构建了突变基因的原核蛋白表达载体pET32a-PlxyCSP1-M2,并表达35kDa融合蛋白[结论]利用重叠延伸PCR法成功在原核系统中表达了PlxyC-SP1突变蛋白。  相似文献
6.
为了研制番茄口服疫苗,按番茄偏爱密码子设计合成了编码诺如病毒(Norovirus,NVs)VA387毒株P粒子(P particles)基因PGENE(1 039 bp),并在该基因5'端添加了编码His-tag(6×His)的DNA序列。将构建的原核表达载体pMAL-c2-PGENE导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3 free),用1 mmol/L的IPTG(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)诱导P粒子在BL21(E.coli)中表达。依据SDS-PAGE胶检测结果,对诱导温度(37℃)和时间(6 h)进行了优化,用Western blot技术证实了重组P粒子特异性和免疫活性,为研制番茄口服NVs(VA387)亚基疫苗-P粒子做了必要的准备。  相似文献
7.
将含缺失跨膜区M2蛋白重组质粒pGEXsM2的大肠杆菌,用终浓度为0.6mmol/L IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白;在Western blot试验中,M2特异性单克隆抗体14C2与目的蛋白发生反应,在35kD处有一条特异性条带,表明表达的重组M2蛋白具有免疫学活性;表达产物使用GST亲和吸附柱进行纯化,获得了大量的目的蛋白及微量的GST蛋白,使用分光光度仪确定纯化后M2蛋白的浓度约为5.6mg/mL。本实验为进一步研究M2生物学特性、建立M2特异性抗体的间接ELISA检测方法及研制M2亚单位疫苗奠定了基础。  相似文献
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