实时定量PCR检测蛋壳形成时骨桥蛋白表达变化的研究

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种具有多种功能分泌型钙结合磷酸化糖蛋白。为了从基因表达的角度来解析蛋鸡蛋壳形成的分子机理,本研究以产蛋鸡为试验动物,采用实时定量PCR技术对与蛋壳形成有关的骨桥蛋白基因在子宫中不同时间段(蛋进入子宫前2 h、进入子宫前1 h、进入子宫后5 h、进入子宫后15 h、产蛋后1 h、产蛋后2 h)的表达丰度进行了研究。结果表明,在蛋进入子宫前2 h、蛋进入子宫前1 h、蛋进入子宫后5 h OPN的表达量逐渐升高,之后在蛋进入子宫后15 h、产蛋后1 h、产蛋后2 h又逐渐下降,这一规律性的变化与蛋壳的钙化密切相关。     

A note on cloning and analysis of the osteopontin gene with egg quality traits in two Chinese domestic ducks

ABSTRACT

1. Osteopontin (OPN) is a highly phosphorylated acidic glycoprotein that plays a crucial role in eggshell formation. In this study, an 893-bp cDNA sequence of the OPN gene, which encodes 180 amino acids, was obtained.

2. Polymorphisms of the OPN gene were analysed with DNA sequencing and polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism methods in two Chinese domestic laying ducks (Jingding n = 100, Youxian n = 478, respectively).

3. One polymorphism was identified in exon 7 (NM_ 004676534.1:c.267T>C) of the OPN gene, with three genotypes: TT (both T allels weren’t mutated (wild type)), TC (one T allel was mutated to C (heterozygote genotype)) and CC. (both T allels were mutated to C (homozygote 20 genotype)) Association analysis with egg quality traits in the two Chinese domestic laying ducks showed that the ducks with the CC genotype had significantly greater eggshell strength and eggshell thickness (p < 0.05). Hence, the exon 7 267T>C polymorphism of the OPN gene is a potentially valuable genetic marker for laying duck breeding programmes.     

壮骨止痛胶囊调控OSX、OPN蛋白对去势大鼠成骨细胞分化的影响

目的 探究壮骨止痛胶囊含药血清调控成骨相关转录因子抗体（osterix,OSX）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）对去势大鼠成骨细胞分化的机制。方法 50只3月龄雌性大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型组、骨松宝组和壮骨止痛胶囊组,10只/组,除空白组及假手术组外,摘除双侧完整卵巢,然后各组分别予以相应干预,获取相应血清;10只新生SD乳鼠提取原代成骨细胞,培养至第三代后添加上述分组相应10%血清,银染及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色鉴定成骨细胞,免疫组化检测OSX、OPN蛋白的表达。结果 各组中的成骨细胞银染呈褐色、碱性磷酸酶染色呈蓝紫色;免疫组化结果表明,骨松宝组、壮骨止痛胶囊组中细胞质呈棕色;空白组和假手术组呈浅棕黄色;模型组几乎不见棕黄色。与假手术组比,模型组OSX、OPN蛋白的表达率降低（P<0.05）;壮骨止痛方及骨松宝干预后OSX、OPN蛋白表达率较模型组显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 壮骨止痛胶囊组含药血清能促进OSX、OPN蛋白分泌,从而促进成骨细胞增殖、分化,发挥抗绝经后骨质疏松作用。     

雌激素受体基因和骨调素基因对苏钟猪初生重和乳头数量的影响

本文研究了雌激素受体基因和骨调素基因对苏钟猪生长繁殖性能的影响。41头母猪120多窝产仔数记录用来分析雌激素受体和骨调素基因型对仔猪初生重、母猪乳头个数和仔猪乳头个数的影响。在母猪乳头个数方面,骨调素142/152和168/170、142/168基因型之间差异显著(P<0.05);在经产胎次中,仔猪初生重140/152和168/170、164/168、142/168、142/152基因型之间差异显著(P<0.05)。母猪乳头个数雌激素受体AA型和AB型之间差异显著(P<0.05)。     

骨调素和雌激素受体基因型合并对苏钟猪和二花脸猪产仔数的影响

选择52头二花脸猪和41头苏钟猪用来探索骨调素(OPN)和雌激素受体(ESR)基因型合并多态性与猪产仔性能的关系。OPN和ESR基因型合并分析表明,OPN基因的效应独立,不受ESR基因制约,可同时以ESR和OPN基因作为标记来提高猪产仔数遗传进展。     

猪骨调素基因多态性对产仔性状的影响1

本文研究了骨调素基因对苏钟猪和二花脸猪繁殖性能的影响。93头母猪660多窝产仔数记录被用来分析骨调素基因型与总产仔数和产活仔数的关系。结果表明,二花脸猪经产总产仔数基因型158/142和170/152、168/140之间差异显著(P<0.05),产活仔数基因型158/142和170/152之间差异显著(P<0.05)。苏钟猪头胎产活仔数基因型164/168和140/152、142/168、152/170之间差异显著(P<0.05),经产总产仔数基因型152/170和130/142之间差异显著(P<0.05)。     

ESR、FSHβ及OPN基因多态性与母猪繁殖性状的关联分析

采用PCR-RFLP法对大白猪和长白猪猪群进行了雌激素受体基因（ESR）、卵泡促激素β亚基基因（FSHβ）和骨桥蛋白基因（OPN）等3个与繁殖性能相关的基因多态性检测，并对不同基因型的总产仔数、产活仔数及出生窝重进行了相关分析。结果表明：①在长白猪中，ESR和OPN基因的优势基因是A等位基因，FSHβ基因的优势基因是B等位基因；在初产母猪中，ESR基因BB型个体比AA型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重高，FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重上高，OPN基因BB基因型个体比AA基因型个体总产仔数少1.20头，差异显著（P＜0.05）；在经产母猪中，OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高，ESR基因总产仔数、产活仔数规律与初产母猪相反。②在大白猪群体中，ESR基因的优势基因是A等位基因，FSHβ和OPN基因的优势基因是B等位基因；在初产母猪中，ESR基因AA型比BB型个体产活仔数和出生窝重高，OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高；在经产母猪中，ESR、FSHβ及OPN基因全都表现出BB型比AA型个体总产仔数和产活仔数高的趋势。     

牛乳骨桥蛋白诱导破骨细胞γ-H2AX焦点的形成

文章探讨了牛乳骨桥蛋白(bovine Osteopontin,bOPN)是否可引起大鼠破骨细胞(Osteoclasts,OC)γ-H2AX焦点的形成的可能性。采用全骨髓培养法培养破骨细胞,用bOPN处理破骨细胞,MTT比色法测定bOPN对破骨细胞的增殖影响,应用免疫荧光试验检测细胞核内DNA双链断裂(γ-H2AX焦点)的形成。在细胞增殖实验中,bOPN 100μg.mL-1浓度组在24 h较对照组差异显著(P<0.05);100μg.mL-1浓度组在72 h较对照组差异极显著(P<0.01);在免疫荧光试验中,1、10、100和1 000μg.mL-1处理组都可以使OC形成焦点,尤其1 000μg.mL-1处理组时数量虽不多,强度却明显增加。总之bOPN可使H2AX磷酸化,进而诱导γ-H2AX焦点的形成。