超表达OsPR1A增强了Xa21介导的水稻对白叶枯病的抗性反应

【背景】前期研究发现,水稻病程相关蛋白质OsPR1A的表达受上游抗病基因Xa21调控,接菌后早期启动Xa21介导的OsPR1A较高水平表达对水稻抵抗白叶枯病菌至关重要。同时OsPR1A也受到水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae,Xoo）的诱导表达。对于OsPR1A的研究绝大部分是作为抗性反应发生的标志基因佐证其他基因或途径在抗性中的作用,缺乏直接的证据证实OsPR1A本身的生物学功能。【目的】通过获得OsPR1a-OX超表达转基因植株,调查其表型及农艺性状,并明确OsPR1A蛋白质表达与抗性的关系,为鉴定OsPR1A功能提供依据。【方法】通过农杆菌介导法,将构建的OsPR1a-OX转化载体转入到水稻受体4021中,利用PCR和免疫印迹（western blot,WB）技术分别在基因水平和蛋白质水平上筛选并鉴定OsPR1A超表达阳性纯合株系。在成熟期,调查OsPR1A超表达转基因植株的表型及农艺性状（株高、穗长、分蘖数、结实率和籽粒大小等）。在31℃条件下,将生长2周的水稻幼苗TP309、4021和OsPR1A超表达转基因植株接种水稻白叶枯病菌,并在接菌0、2、4、6、8、10和12 d时测量病斑长度。在接菌0、4和6 d时,收集TP309、4021和OsPR1A超表达转基因植株的水稻叶片,提取蛋白质,利用WB技术检测OsPR1A的表达特征。【结果】构建了OsPR1a-OX转化载体,并转入到受体4021中,筛选并鉴定到2个OsPR1A超表达转基因纯合株系（#704和#709）。调查了OsPR1A超表达转基因植株在成熟期的表型及农艺性状,与对照4021相比,#704和#709的株高较矮、穗长较短、分蘖数减少、结实率降低,但籽粒稍大,可能与结实率低有关。在31℃条件下,OsPR1A超表达转基因植株的病斑长度与对照4021相比明显缩短,结果具有显著性差异（P<0.05）。在接菌0、4和6 d的材料中,超表达转基因植株#704和#709中OsPR1A始终有较高水平的表达丰度,从而提高了对白叶枯病菌的抗性。【结论】采用农杆菌介导法,获得OsPR1A超表达转基因植株;超表达OsPR1A影响到水稻的正常发育过程;超表达OsPR1A后增强了Xa21介导的水稻对白叶枯病的抗性。     

FGF-21对大鼠血小板聚集和活化的抑制作用

临床上大部分抗血小板药物存在继发性出血等副作用,亟需寻找一种安全有效的抗血小板药物。二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)是介导血小板聚集的主要物质,文章探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是否抑制ADP或AA诱导大鼠血小板聚集和活化。将大鼠分为正常对照组、正常鼠血小板活化组、阿司匹林干预后血小板活化组、FGF-21高、中、低剂量干预后血小板活化组。给药干预后提取各组血小板,分别用ADP或AA处理,观察处理后血小板聚集情况以及P选择素和血栓素(TXB2)表达水平。与正常对照组相比,正常鼠血小板经ADP或AA处理活化后,血小板聚集率显著升高,血浆中P选择素和TXB2含量明显上升;与正常鼠血小板经ADP或AA处理活化后相比,经阿司匹林和FGF-21干预后分别经ADP或AA处理活化后的血小板聚集率显著下降,血浆中P选择素和TXB2含量显著下降;FGF-21干预组经ADP或AA活化后,血小板聚集率、P选择素和TXB2含量下降水平呈明显剂量依赖性。目前国内外尚未发现FGF-21对血小板聚集与活化作用的相关报道,研究首次证明FGF-21具有抑制ADP和AA诱导血小板聚集和活化作用及明显的抗血凝作用,填补FGF-21在抗血凝研究领域空白,为开发安全有效的抗血凝药物提供理论依据。     

21世纪以来河南省植被覆盖变化及气候驱动解析

借助MODIS NDVI数据和气象插值数据,采用一元线性回归、Hurst指数及相关分析等方法,从年际尺度探讨河南省21世纪以来植被覆盖时空变化规律,并分析其对气候因素的响应特征。结果表明:河南省植被覆盖区域差异较大,NDVI频度呈单峰结构;近16年来,河南省大部分地区植被覆盖呈现增加趋势,10年平均增速约为4%(P0.01),且阶段性明显;河南省植被变化的同向特征强于反向特征,植被覆盖整体上呈持续改善态势,但郑州、洛阳、焦作等市域局部地区存在持续减小现象;年平均温度的上升是平原区植被覆盖增加的主要驱动因子,但升温尤其是年平均最高温度增加抑制了山区植被生长,植被覆盖对气候因子的敏感程度地域异质性明显。     

壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞CDK4和p21表达的影响

目的 观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞CDK4和p21表达的影响，探讨壮骨止痛胶囊治疗骨质疏松症的机制。方法 40只SD雌性大鼠随机分为模型组、阳性对照组、壮骨止痛胶囊组、假手术组，每组10只。模型组、阳性对照组以及壮骨止痛胶囊组的SD大鼠制作骨质疏松大鼠模型，假手术组SD大鼠作为对照。不同组SD大鼠喂养不同药物，假手术组和模型组大鼠灌胃生理盐水，阳性对照组灌胃尼尔雌醇，壮骨止痛胶囊组灌胃壮骨止痛胶囊药物，连续喂养13周之后，处死大鼠，提取各组大鼠含药血清备用。另取5只新生SD小鼠颅骨的成骨细胞，应用上述各组含药血清进行细胞培养，连续培养3代后，采用碱性磷酸酶染色和茜素红染色法鉴定成骨细胞，细胞免疫组化法检测各组含药血清培养的成骨细胞CDK4蛋白和p21蛋白的表达。结果 CDK4和p21蛋白阳性表达主要在成骨细胞的细胞核。与假手术组比较，模型组CDK4表达轻度降低，p21表达轻度升高（P>0.05）；与模型组比较，阳性对照组和壮骨止痛胶囊组CDK4表达均升高，p21表达均下降（P<0.01）；与阳性对照组比较，壮骨止痛胶囊组CDK4表达升高，p21表达下降（P<0.01）。结论 壮骨止痛胶囊可通过提高成骨细胞CDK4的表达，抑制p21的表达，从而增加成骨细胞G1期调节蛋白的表达，推动增殖周期的完成，达到治疗骨质疏松症的目的。     

Expression and mechanisms of hsa_circ_087631 in patients with primary biliary cholangitis

AIM To explore the expression and mechanisms of circular RNA hsa_circ_087631 in the patients with primary biliary cholangitis （PBC）. METHODS RT-qPCR was used to detect the expression of hsa_circ_087631 in PBC patients and healthy controls. Hsa-miR-346-overexpressing lentiviral vector pLenti-EF1a-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS was constructed and transfected into human acute T cell leukemia Jurkat cells， and then the expression levels of hsa_circ_087631， Bcl-6 mRNA and interleukin-21 （IL-21） mRNA were detected by RT-qPCR. Dual-luciferase reporter assay was performed to identify the interactions between hsa_circ_087631 and hsa-miR-346. RESULTS The expression of hsa_circ_087631 in the PBC patients was significantly increased compared with the healthy subjects. Hsa-miR-346-overexpressing lentiviral vector pLenti-EF1a-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS was successfully constructed. The expression of hsa-miR-346 was significantly increased after the hsa-miR-346-overexpressing lentiviral vector was transfected into the Jurkat cells， while the expression levels of hsa_circ_0087631， Bcl-6 mRNA and IL-21 mRNA were significantly decreased. After wild-type or mutant hsa_circ_087631 vector and hsa-miR-346 mimics were transfected into 293T cells， the results of dual-luciferase reporter assay showed that hsa-miR-346 significantly decreased the luciferase activity of wild-type hsa_circ_087631 （P<0.01）， but the regulation did not change significantly after mutation of the predicted binding site. CONCLUSION Peripheral blood hsa_circ_087631 level is elevated in the PBC patients. The hsa_circ_087631/hsa-miR-346/Bcl-6 signaling may take effect in human T cells. Hsa-miR-346 significantly reduces the expression of hsa_circ_087631， but it may not be regulated by predicted binding sites.     

miR-21与Nocodazole联合作用对小鼠成肌细胞C2C12周期的影响

观察miR-21与Nocodazole联合作用对小鼠成肌细胞C2C12周期的影响。分别以0、200、300、400、500、600 nmol/L Nocodazole处理C2C12细胞24 h,流式细胞仪检测细胞周期,间接免疫染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器α-微管蛋白(α-tubulin)排列。转染miR-21 mimics/NC和inhibitors/NC,24 h后,添加400 nmol/L的Nocodazole处理24 h,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明:Nocodazole使C2C12细胞同步化的最佳浓度是400 nmol/L;过表达miR-21 mimics之后,与对照组相比,G0/G1,S期细胞百分比极显著增加,G2/M期细胞百分比极显著减少(P0.01);添加抑制剂后,与对照组相比,添加抑制剂(inhibitors)的C2C12细胞中处于G0/G1期的细胞比例显著高于对照组,而处于G2/M期的细胞比例显著低于对照组细胞(P0.05);正反试验结果证明,miR-21促进C2C12细胞周期进入S期。为进一步研究miR-21对C2C12细胞的作用机制奠定基础。     

稳定表达山羊SLAM受体的BHK-21细胞系的建立及应用

信号淋巴激活分子(SLAM)又称为CD150,是小反刍兽疫病毒(PPRV)和犬瘟热病毒(CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥重要作用。为建立稳定表达山羊SLAM(g SLAM)的真核细胞系,本研究将人工合成的g SLAM基因克隆至真核表达质粒p IRESpuro3中,并在该基因的3'端引入Flag标签序列作为分子标记,构建了重组质粒p IRES3-g SLAM。将该重组质粒转染BHK-21细胞,经嘌呤霉素加压筛选及采用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组PPRV病毒(r PPRV/GFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达g SLAM基因的细胞系。r PPRV/GFP感染和western blot鉴定表明,无论是否有嘌呤霉素压力的存在,该细胞系在传代至第20代,仍能稳定表达g SLAM蛋白。由于g SLAM氨基酸序列与犬的同源性较高,以表达GFP重组CDV强毒株(r CDV/GFP)感染该细胞系,病毒可以感染且能形成明显的细胞病变,表明该细胞系可用于CDV强毒分离和致弱机制等相关研究。     

辣椒新品种驻椒21的选育

驻椒21是以辣椒雄性不育两用系AB0582为母本,以自交系B0318为父本选育而成的辣椒一代杂种。早熟,全生育182d(天)果实羊角形,果长19.2cm,果宽3.7cm,平均单果质量44.6g,青熟果黄绿色,每667m2产量3380kg左右,辣椒素含量26.2mg·kg-1,VC含量1040mg·kg-1。适宜早春保护地和春露地地膜覆盖栽培。     

Expression and clinical significance of PAK4 in non-small cell lung cancer

AIM: To investigate the expression and clinical significance of PAK4 in the cell lines and tissues of non-small cell lung cancer (NSCLC). METHODS: PAK4 expression in human bronchial epithelial (HBE) cells, NSCLC cell lines, NSCLC tissues and adjacent non-tumor tissues were assessed by immunohistochemistry, real-time PCR and Western blot. Prognostic value of PAK4 expression was evaluated by Kaplan-Meier analysis and Cox regression. RESULTS: PAK4 was over-expressed in the NSCLC cell lines at both mRNA and protein levels compared with HBE cells (P<0.05). PAK4 was over-expressed in the NSCLC tissues at both mRNA and protein levels compared with adjacent non-tumor tissues (P<0.05). PAK4 was over-expressed in the metastatic NSCLC tissues compared with the primary NSCLC tissues (P<0.05). Higher PAK4 staining scores were positively correlated with differentiation, lymph node metastasis, distant metastasis, and clinical stage. Kaplan-Meier analysis and log-rank test showed that overall survival was significantly different between the patients with up-regulated PAK4 and the patients with down-regulated PAK4(P<0.05). PAK4 over-expression was associated with NSCLC progression.CONCLUSION: Increased PAK4 expression was associated with tumor invasion, metastasis and prognosis in the patients with NSCLC. PAK4 is an important prognostic marker and potential therapeutic target in NSCLC.