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1.
 【目的】研究牦牛和犏牛Dmc1基因编码区序列、结构和睾丸组织mRNA表达水平,探讨Dmc1基因与犏牛雄性不育的关系,为揭示犏牛雄性不育的分子机理提供参考。【方法】通过PCR扩增和克隆测序获得牦牛和犏牛Dmc1基因部分cDNA序列,运用生物信息学方法分析牦牛和犏牛Dmc1基因编码区序列、蛋白结构和进化关系,利用实时荧光定量PCR技术检测牦牛和犏牛睾丸组织中Dmc1基因mRNA表达水平。【结果】牦牛和犏牛Dmc1基因编码区序列全长均为1 023 bp,编码340个氨基酸,与黄牛Dmc1基因的同源性为100%,与哺乳纲其它物种的同源性在90%以上。牦牛和犏牛Dmc1蛋白含有RecA蛋白家族典型的第二结构域,且与人、鼠Dmc1蛋白结构域一致。系统发育分析显示牦牛、犏牛和黄牛首先聚为一类,后与家犬相聚;人、黑猩猩和猕猴聚为另一类,而与鸟纲动物相聚较远,与经典分类基本一致。定量结果显示犏牛睾丸组织Dmc1基因mRNA表达水平较低,与牦牛差异极显著(P<0.01),且犏牛表现出来的减数分裂障碍表型与小鼠Dmc1基因突变或敲除的表型一致。【结论】根据生物信息学分析结果推测牛Dmc1蛋白与人、鼠一样,在精母细胞减数分裂同源重组过程中发挥着重要作用;Dmc1基因在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达量差异极显著(P<0.01),结合犏牛雄性减数分裂障碍表型,表明睾丸组织Dmc1基因可能与犏牛的雄性不育有一定的关系。  相似文献
2.
保护剂减轻氯嘧磺隆对玉米残留药害的作用机理   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
采用沙培方法,利用生理生化试验及半定量PCR方法,研究了保护剂HN对玉米ALS、GSTs活性及GSTs的mRNA表达量的影响.结果表明,保护剂对6个玉米品种的ALS、GSTs均具有诱导作用,但对不同品种的诱导增加百分率却不同.对氯嘧磺隆敏感的玉米东甜3号的GSTs诱导增加百分率达到59.18%,对其ALS的诱导倍数为叶部1.29倍,根部2.30倍;对氯嘧磺隆耐性较高的玉米屯玉88 GSTs诱导增加百分率为19.26%.其ALS的诱导倍数为叶部1.07倍,根部2.07倍.氯嘧磺隆和保护剂均可以诱导玉米GSTs mRNA的相对表达量的增加,保护剂的诱导作用更强.  相似文献
3.
 【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24~36 h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组(P<0.01),且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组(P<0.01),而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异(P>0.05);相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r = 0.741,P <0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。  相似文献
4.
中华稻蝗几丁质合成酶1基因的mRNA表达及功能   总被引:1,自引:1,他引:0       下载免费PDF全文
【目的】研究中华稻蝗(Oxya chinensis(Thunberg))几丁质合成酶1(CHS1)基因的表达特性及其在生长发育过程中的作用,从而为实现基于RNAi的蝗虫有效控制提供理论依据。【方法】根据已知中华稻蝗几丁质合成酶1基因(OcCHS1)保守区域部分cDNA序列(GenBank登录号:HM214491)设计特异性表达引物,运用RT-PCR和qPCR研究时空表达特性;采用RNA干扰技术研究其生物学功能。【结果】OcCHS1在中华稻蝗各龄期都有表达,其体表为高表达,其次是气管,其它组织部位表达量低。RNA干扰试验发现,4龄第4天若虫注射OcCHS1的双链RNA(dsRNA)后,与对照组相比,OcCHS1 mRNA表达量被沉默了70.8%,稻蝗出现蜕皮时间延迟、不能完成蜕皮或腹部皱缩死亡等现象,注射dsOcCHS1组死亡率为85.2%,与对照组(7.4%)相比差异显著。【结论】几丁质合成酶1对中华稻蝗的生长发育具有重要作用,其主要参与体表和气管几丁质的合成。采用RNA干扰技术使该基因沉默后可导致中华稻蝗死亡。  相似文献
5.
【目的】研究中华稻蝗(Oxya chinensis)几丁质脱乙酰基酶(chitin deacetylase,CDA)基因的分子特性和生物学功能,为新型农药靶标筛选提供科学依据。【方法】采用生物信息学方法在稻蝗转录组数据库中搜索获得几丁质脱乙酰基酶基因cDNA序列,对其进行保守区域分析,选取赤拟谷盗(Tribolium castaneum)、果蝇(Drosophila melanogaster)、冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)、家蚕(Bombyx mori)和云杉卷叶蛾(Choristoneura fumiferana)等昆虫物种的同源序列与中华稻蝗几丁质脱乙酰基酶氨基酸序列进行聚类分析,进一步构建系统发育树;运用real-time PCR方法检测几丁质脱乙酰基酶基因在中华稻蝗5龄若虫不同组织部位和不同发育天数表皮中的表达特性;进一步采用RNA干扰(RNAi)技术研究该基因对中华稻蝗蜕皮发育的影响。【结果】在中华稻蝗转录组数据库中搜索获得2条几丁质脱乙酰基酶基因的cDNA全长序列,生物学软件分析其氨基酸,发现2条序列均具有信号肽,开放阅读框包含3个几丁质脱乙酰基酶保守区域:几丁质结合区(ChBD)、低密度脂蛋白受体区(LDLa)和几丁质脱乙酰基催化结合域(CDA)。聚类分析表明2条序列分别与所选用的5种昆虫CDA2聚为一支。剪切子聚类分析发现2条序列分别与5种昆虫CDA2a和CDA2b相聚为一支,综合序列分析和聚类结果,认为所获得的序列属于几丁质脱乙酰基酶2基因的2个不同剪切子,分别命名为OcCDA2a和OcCDA2b。定量PCR分析表明OcCDA2a和OcCDA2b均在中华稻蝗表皮、前肠和后肠中高表达;在5龄第1天的表皮中表达量较高,之后逐步下降,蜕皮前又略有上升;RNAi研究发现5龄第2天的若虫注射dsOcCDA2a或dsOcCDA2b 24 h后,与注射dsGFP的对照相比,目的基因表达量显著降低,沉默效率分别为96.72%和80.43%;进一步观察试虫的表型,与对照组相比,注射dsOcCDA2和dsOcCDA2a的大多数虫体出现龄期延长,脊线开裂,旧表皮不能顺利剥离而导致虫体扭曲,最终死亡。少数若虫在蜕皮前死亡,未出现异常表型,部分若虫虽蜕至成虫,但四肢无力,行动缓慢。死亡率分别达到87.5%和94.4%;注射dsOcCDA2b的试虫无可见表型,可正常蜕皮发育至成虫。【结论】中华稻蝗几丁质脱乙酰基酶2基因具有2个剪切子,分别为OcCDA2a和OcCDA2b。OcCDA2a参与虫体蜕皮,对其生长发育起着重要的作用,该基因的沉默导致中华稻蝗因蜕皮困难而死亡,而OcCDA2b对中华稻蝗的生长发育没有影响。  相似文献
6.
 【目的】研究两个中药成分复方(cCHMIs)的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10 mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49 d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63 d测定免疫器官指数和攻毒保护率。【结果】两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-γ、IL-10 mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价,促进体内淋巴细胞增殖,显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育,有较高的攻毒保护效果。【结论】两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。  相似文献
7.
为探讨热应激对我国地方鸡种与国外培育蛋鸡品种繁殖性能、血液生殖激素及相关基因mRNA表达量的影响,试验选择体况相近的112日龄济宁百日鸡和海兰褐鸡各96只,随机分为适温组((25±0.26)℃)和高温组((38±0.26)℃)2个处理,在人工环境气候舱中饲养,每个处理各设8个重复,每个重复6只,试验持续28 d.测定112、119、126和140日龄时的卵巢重量、卵泡总数和血液生殖激素浓度及生殖轴相关基因mRNA相对表达量.结果表明:1)适温条件下海兰褐鸡的卵巢、总卵泡发育好于济宁百日鸡,而热应激第7天济宁百日鸡和海兰褐鸡只出现明显的卵巢发育受阻、总卵泡数量增生缓慢(P<0.05).2)在整个热应激期高温组卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)含量显著下降(P<0.05),热应激7d后雌二醇(E2)含量显著减少(P<0.05)、孕酮(P4)含量先升高后显著下降(P<0.05);促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量显著高于适温组(P<0.05),济宁百日鸡高温组各血液生殖激素水平的变异系数高于海兰褐,且差异不显著(P>0.05).3)适温组的济宁百日鸡促性腺激素释放激素(GnRH)、催乳素(prolactin,PRL)、卵泡刺激素-β(FSH-β)、促卵泡素受体(LHR)、雌激素受体(ESR)、催乳素受体(PRLR)、卵泡刺激素受体(FSHR)的mRNA表达量均高于海兰褐鸡,但无显著差异(P>0.05);而高温组济宁百日鸡mRNA表达量除PRL以外,均显著高于海兰褐鸡(P<0.05).结果提示,地方品种在热应激环境条件下卵巢、总卵泡发育和各血液生殖轴相关激素的分泌调控机能强于外来品种;并且生殖轴相关激素mRNA表达量的变化具有品种效应.  相似文献
8.
The effects of dietary lysine on production performance,serum concentrations of metabolites,growth hormone (GH),insulin-like growth factor-I (IGF-I) and IGF-I mRNA expression in growing rabbits were examined.One hundred weaned New Zealand rabbits were allocated to individual cages and randomly offered a diet containing 5.5 (L1),6.5 (L2),7.5 (L3),8.5 (L4),or 9.5 g (L5) lysine per kg diet.The results showed that the average daily gain (ADG) of the rabbits from L3,L4 or L5 was higher than those from L1 or L2 (P 〈 0.05).The feed gain ratio (F/G) in the rabbits from L4 or L5 was lower than those from L1 or L2 (P 〈 0.05).Dietary lysine did not affect serum concentrations of total protein (TP),glucose,insulin (INS),and growth hormone (GH) (P 〉 0.05).The quadratic effects of lysine on the serum urea nitrogen (SUN) concentration was detected (P = 0.035).Serum IGF-I concentrations had a trend to increase quadratically with the increasing dietary lysine (P = 0.07).A significant correlation was found between serum IGF-I concentrations (x,ng mL-1) and ADG (y,g kg-1): y = -0.017x2 + 1.984x + 20.87 (R2 = 0.8982,P = 0.003).The relative abundance of hepatic and muscular IGF-I mRNA tended to increase with increasing dietary lysine levels (P = 0.053 and 0.082,respectively).Providing the diets mainly consisted of corn,wheat bran and peanut vine,the most appropriate dietary lysine level for growing meat rabbits from weaning to 70 d old was found to be 8.5 g kg-1,and IGF-I may be an important factor controlling growth of weaned rabbits.  相似文献
9.
10.
为了探明不同粗蛋白质(CP)水平日粮对鹅组织中胰岛素样生长因子-I基因(IGF-I)mRNA表达量的影响,为科学配制肉鹅饲料提供理论依据,采用半定量RT-PCR方法检测分别饲喂粗蛋白质水平为16%、18%、20%日粮的28日龄苏牧白鹅的肝脏、腿肌和胸肌组织的胰IGF-I mRNA表达量差异.结果表明:在不同粗蛋白质水平下鹅的肝脏和胸肌组织中均能检测到IGF-I mRNA表达,而在腿肌中未能检测到该基因mRNA表达.在肝脏组织中,18%CP组IGF-I mRNA表达量低于16%CP组和20%CP组,后两者之间无显著差异.在母鹅胸肌组织中,各组IGF-ImRNA表达量无显著差异;但20%CP组公鹅的IGF-I mRNA表达量显著高于16%CP组.20%CP组公鹅IGF-I mRNA表达量显著高于母鹅,18%CP组、20%CP组公鹅肝脏组织IGF-I mRNA表达量极显著低于母鹅,其他组公母间差异均不显著.不同粗蛋白质水平能影响鹅组织中IGF-I mRNA表达;在相同粗蛋白质水平的日粮和同性别条件下,IGF-I mRNA相对表达量肝脏大于胸肌,腿肌中未检出.  相似文献
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