小麦基因组DNA的分离及RAPD反应体系的研究

对普通小麦不同部位提取基因组DNA的方法进行分析比较,发现用黄化苗基因组DNA叶片提取的基因组DNA的质量和浓度均较好,可用于RAPD分析.并对小麦基因组DNA的RAPD反应优化过程中一些重要参数进行了探索、优化试验,建立了随机扩增多态性DNA分析应用反应体系.     

籽粒苋C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆和表达分析

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase, PEPC)是C₄途径的关键酶之一。本研究克隆了双子叶植物籽粒苋(A. hypochondriacus L) C₄型PEPC基因的cDNA和gDNA全长序列。该基因编码区cDNA全长2 895 bp (GenBank Accession: HQ186302)，编码964个氨基酸残基。对应的gDNA全长为6 785 bp，含10个外显子和9个内含子，内含子总长3 890 bp，其中第一内含子最长，为1 662 bp，具GATA-motif、G-box等15个光应答元件，9个激素应答元件，29个CAAT box，72个TATA box。该特征在本研究范围内的植物中，为籽粒苋所独有。比较多种植物表明，不同植物之间的C₃/C₄型PEPC基因的外显子长度具有较高的一致性，而内含子的长度变化较大。不同植物PEPC基因对核苷酸具有一定的选择性，并且外显子和内含子的GC含量呈正相关。总的趋势是单子叶植物外显子和内含子的GC含量均高于双子叶植物。利用半定量RT-PCR分析表达模式，发现籽粒苋PEPC基因主要在叶片中表达，表达量随光照时间延长而增加。     

改良CTAB法快速提取棉花DNA

针对棉花（Ｇｏｓｓｐｉｕｍ）富含棉酚、多糖等其它次生干扰物质这一特点而设计的一种快速分离和纯化棉花总ＤＮＡ（ｇＤＮＡ）的方法。该方法是对ＣＴＡＢ（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）法的改良，它在ＣＴＡＢ法的基础上，首先用ＤＩＥＣＡ（ｄｉｅｔｈｙｌｄｉｔｈｉｏｃａｒｂａｍｉｃａｃｉｄ）抑制酚氧化酶的活性，然后用活性炭和ＰＶＰ４０（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）排除棉酚等其它次生干扰物质。试验证明，该方法比较简便、快速、经济、有效，得到的ｇＤＮＡ完全可以满足ＰＣＲ等分子生物学分析。