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1.
建立同时测定秦艽中龙胆苦苷和牛膝中蜕皮甾酮含量的RP-HPLC分析方法。采用Kromacil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%醋酸水溶液(B)进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长:254 nm;柱温:25℃。龙胆苦苷、蜕皮甾酮的进样浓度分别在0.80~20.00,0.40~10.00μg.mL-1范围内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为100.02%,99.95%。结论:该方法简便,准确,重现性好,具有较强的应用价值。  相似文献   
2.
【目的】克隆绿盲蝽(Apolygus lucorum)G蛋白偶联受体激酶2基因(AlGRK2)cDNA序列,明确其时空表达谱,阐明外源蜕皮激素(20E)对AlGRK2表达的影响,分析AlGRK2在绿盲蝽生长发育中的作用,为进一步研究其在蜕皮激素信号转导通路中的功能打下基础。【方法】RACE法克隆获得AlGRK2全长,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析不同日龄绿盲蝽及雌成虫不同组织中AlGRK2的表达谱,分析外源20E诱导及RNAi处理后,AlGRK2 mRNA表达的应答反应及对绿盲蝽生长发育主要参数(发育历期、若虫体重及成虫羽化率)的影响。【结果】AlGRK2 cDNA序列全长2 715 bp,开放阅读框2 106 bp,编码701个氨基酸,ExPASy预测其蛋白分子量为80.2 kD,理论等电点为6.56;蛋白结构分析显示AlGRK2包含4个结构域,即G蛋白信号调节区(RGS,54—175 aa)、丝氨酸/苏氨酸激酶结构域(S-TKc,191—454 aa)、丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶的伸展部分(S-TK-X,455—534 aa)和PH结构域(PH,558—655 aa),其中PH结构域是GRK2蛋白的典型结构域;系统发育分析结果表明,绿盲蝽GRK2与茶翅蝽GRK2亲缘关系最近;AlGRK2在绿盲蝽1—16日龄虫体内均有表达,mRNA表达量呈现出波动式下降的模式,在绿盲蝽初始龄期的表达量较高,而在末龄期的表达量显著下降;AlGRK2在绿盲蝽雌成虫卵巢和脂肪体中高表达,在胸与足中的表达量较低;外源20E处理后,AlGRK2在绿盲蝽1日龄和3日龄表达量显著下调,AlGRK2在雌成虫各组织中均表达上调,在卵巢及脂肪体中上调幅度最大,相反的是,20E信号通路中PLC抑制剂U73122处理的AlGRK2表达量下调;绿盲蝽若虫发育历期、末龄若虫体重和成虫羽化率均显著下降,相反的是,U73122处理组若虫期的发育历期显著延长;此外,与注射dsGFP处理组相比,注射dsAlGRK2处理后绿盲蝽的AlGRK2表达水平显著下降,若虫死亡率及发育历期显著增加,而成虫羽化率和5龄若虫体重均显著下降。【结论】AlGRK2在绿盲蝽体内的表达谱显示出发育阶段特异性和组织特异性;外源20E抑制剂及RNAi处理后,均可抑制AlGRK2的表达,同时还可对绿盲蝽生长发育产生不利影响,表现为延缓绿盲蝽的发育进度、降低5龄若虫体重及成虫羽化率。  相似文献   
3.
Effects of dietary cholesterol levels on moulting performance, lipid accumulation, ecdysteroid concentration and immune enzymes activities of juvenile Eriocheir sinensis were investigated. Crabs were fed with feeds contained various cholesterols of 1100, 2100 and 3200 mg kg?1 in both paddy fields and laboratory experiments. In paddy fields trial, the crabs fed with diets contained 3200 mg kg?1 cholesterol achieved higher growth rate than those fed with diets contained no supplemental cholesterol (1100 mg kg?1). In laboratory trial, moulting frequencies of crabs fed with diets contained 3200 mg kg?1 cholesterol were higher than those of crabs fed with diets contained no supplemental cholesterol from the 6th to 10th moult. Further laboratory experiment indicated that intermoults of crabs fed with diets contained 3200 mg kg?1 cholesterol significantly shortened compared with crabs fed with the basal feeds (1100 mg kg?1 cholesterol). In the intermoult, total lipid content, ecdysterone concentration and three immune enzymes in crabs were increased with the increment of dietary cholesterol levels between the 7th and the 8th moult in laboratory experiments. Taken together, dietary cholesterol not only enhanced moulting performances of growth, survival and moult frequency, but also enhanced total lipid storage, ecdysterone concentration and three immune enzymes activities in the intermoult period.  相似文献   
4.
为了探明β-蜕皮激素对异色瓢虫的作用及其安全剂量,本研究利用实时定量PCR(RT-PCR)和比色法测定了异色瓢虫3龄幼虫施用不同浓度的β-蜕皮激素体内羧酸酯酶活性与基因表达情况.结果表明:用0.1、0.5、1 mg/L β-蜕皮激素处理异色瓢虫3龄幼虫,在处理后4~48 h内CarE mRNA水平和CarE比活力呈现先升高、保持正常水平或略下降、再升高、然后很快恢复正常的规律.到处理后的第48 h,处理组的CarE mRNA表达量和CarE比活力均恢复到正常水平.所以,认为在低于1 mg/L浓度下应用β-蜕皮激素控制害虫对异色瓢虫的3龄幼虫安全.而利用5 mg/L或10 mg/L的β-蜕皮激素处理异色瓢虫3龄幼虫,CarE mRNA表达量和CarE比活力均表现出长期的被抑制效应,特别是到处理24 h后,CarE mRNA表达量和CarE活性不仅未能恢复到正常水平,反而一直处于极低的水平.因此,认为这两个浓度对异色瓢虫3龄幼虫不安全.  相似文献   
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