利用iTRAQ蛋白质组技术筛选与鸡喙畸形相关的候选蛋白

【目的】中国地方鸡种如北京油鸡、清远麻鸡存在喙畸形现象,表现为上下喙咬合不全,呈交叉状。严重影响鸡饮水和采食,从而影响个体发育和生产性能的发挥,造成一定经济损失。笔者根据喙畸形个体的系谱记录,发现喙畸形的形成受到遗传因素的影响,但具体机制尚不明确。蛋白是行使各种生物学功能的最终形式之一,喙畸形个体的发生可能是由于核心蛋白或者相关调控蛋白代谢异常造成的。利用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）技术以及生物信息学分析方法,筛选鸡畸形喙与正常喙中差异表达的蛋白,作为喙畸形相关的重要候选蛋白,为进一步研究北京油鸡喙畸形的遗传机制奠定基础。【方法】挑选3只120日龄喙畸形的公鸡作为试验组,编号为W1、W2、W3,同时,挑选与试验组个体为同胞关系（全同胞或半同胞）的喙正常公鸡作为对照组,编号为Z1、Z2、Z3。将喙畸形与其同胞正常个体作为一个比对组,iTRAQ试验具体包含3个比对组,即W1 vs Z1,W2 vs Z2,W3 vs Z3。屠宰个体后,剔除喙组织周围肌肉和筋膜,分离得到喙上颌骨和下颌骨,提取总蛋白样品,应用6个 iTRAQ标签标记各蛋白样品,经过色谱层析预分离,联合液相串联质谱分析,采用Mascot 2.3.02软件对蛋白进行鉴定和定量分析。试验组（W）与其同胞对照组(Z)样本比较（W1 vs Z1,W2 vs Z2,W3 vs Z3）,选择肽段数≥2,表达差异值＞1.2（上调）或＜0.83（下调）,且P＜0.05的蛋白作为差异表达蛋白。【结果】利用iTRAQ技术一共在喙组织中鉴定到3 372个蛋白,鉴定到的特异性肽段有12 769个。其中原鸡蛋白1 869个,分子质量主要分布在10-100 kD之间。3个比对组共鉴定出159个表达量有显著差异的蛋白质,其中包含70个表达上调的蛋白,89个表达下调的蛋白。统计各比对组蛋白表达差异值发现,表达量差异较大的上调蛋白质有LPL、MLC-2、CO9A1、MATN3、HSP90B1等,表达量差异较大的下调蛋白质有MBP、RLA1、PRVM、HAPLN1等。结合已经报道的这些蛋白的生物学功能,其中CO9A1、MATN3、HAPLN1与软骨合成和软骨骨化相关,CO9A1是带状软骨纤维的组成物质,MATN家族是非胶原性细胞外基质蛋白家族,HAPLN1是软骨细胞外基质的重要组成成分;PRVM是细胞内钙离子结合蛋白,参与调控Ca2+离子信号通路;LPL是多功能酶,主要在脂质代谢和转运过程中起作用,参与调控PPAR信号通路。初步筛选出CO9A1、MATN3、HAPLN1、PRVM、LPL作为与鸡喙畸形相关的候选蛋白。【结论】差异表达蛋白的发现为鸡喙畸形形态的发生提供蛋白质水平上的理论依据。     

静原鸡let-7a-5p的靶基因预测及组织表达分析

【目的】了解let-7a-5p的生物学信息,初步探索其在静原鸡肌肉组织中的功能作用。【方法】利用生物信息学方法对转录组测序获得的静原鸡let-7a-5p的成熟序列进行保守性分析,使用miRDB、TargetScan和miRanda在线软件预测let-7a-5p的靶基因,取其交集进行GO功能和KEGG通路富集分析,并利用实时荧光定量PCR检测let-7a-5p在静原鸡公鸡和母鸡各组织中的表达水平。【结果】let-7a-5p的成熟序列在各物种间高度保守,共预测得到38个基因集合。在生物过程、细胞组分和分子功能中靶基因富集较多的GO条目有细胞过程、生物调节、细胞、结合和催化活性;靶基因显著富集于聚酮糖单元生物合成、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、泛素介导的蛋白水解、TGF-β信号通路和加压素调节的水重吸收信号通路,且富集最多的是代谢途径、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、泛素介导的蛋白水解和MAPK信号通路。let-7a-5p-靶基因互作主要通过作用于靶mRNA的3′-UTR抑制表达或使其降解。组织表达发现,let-7a-5p在静原鸡公、母鸡的心脏、肝脏、脾脏、...     

1～28日龄麒麟鸡钙需要量

本试验旨在研究不同饲粮钙水平对麒麟鸡生长性能、屠宰性能、肉品质、趾骨特性及血清生化指标的影响,以确定麒麟鸡饲粮中钙的适宜水平。选用1日龄麒麟鸡240只,随机分为5个组,每组6个重复,每个重复8只鸡。各组分别饲喂钙水平为0.75%、0.90%、1.05%、1.20%和1.35%(可利用磷水平为0.45%,维生素D3水平为1 250 IU/kg)的玉米-豆粕型试验饲粮,试验期28 d。结果表明:1)饲粮钙水平对麒麟鸡平均日增重、平均日采食量、腿病发生率和死亡率有显著影响(P0.05),但对料重比影响不显著(P0.05),随着饲粮钙水平的提高,平均日增重和平均日采食量呈断线变化(P0.05)。2)饲粮钙水平对麒麟鸡屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率以及胸肌的p H、肉色和滴水损失率没有显著影响(P0.05),但腹脂率随着饲粮钙水平的增加有先升高后降低的变化趋势(P=0.083)。饲粮钙水平对胸肌的剪切力有显著影响(P0.05),且随钙水平的提高呈二次曲线变化(P0.05)。3)饲粮钙水平对麒麟鸡趾骨脱脂干重及趾骨粗灰分、粗灰分钙含量有显著影响(P0.05),且趾骨粗灰分和粗灰分钙含量随着饲粮钙水平的提高呈二次曲线和断线变化(P0.05)。4)饲粮钙水平对血清碱性磷酸酶活性影响不显著(P0.05),但显著影响麒麟鸡血清钙、磷含量(P0.05),随着饲粮钙水平的提高,血清磷含量呈断线变化(P0.05)。综上所述,平均日增重、平均日采食量、胸肌剪切力、趾骨粗灰分和粗灰分钙含量、血清磷含量可敏感反映麒麟鸡体内钙的营养状况,综合以上敏感指标得出1~28日龄麒麟鸡饲粮中钙需要量为1.20%。     

Effects of dietary oregano essential oil supplementation on growth performance,intestinal antioxidative capacity,immunity, and intestinal microbiota in yellow-feathered chickens

Essential oils are plant-derived aromatic volatile oils, and they contain bioactive compounds that have been shown to improve poultry nutrition. In this study, we investigated the effects of oregano essential oil (OEO) on intestinal antioxidative capacity, immunity, and gut microbiota of young yellow-feathered chickens. A total of nine hundred and sixty 1-d-old female Qingyuan partridge chickens were randomly allocated to four treatment groups with six replicates of 40 birds each, and the feeding trial was lasted for 30 d. The controls were fed on a basal diet without in-feed antibiotics; the birds in the antibiotic group were fed the basal diet supplemented with 20 mg/kg virginiamycin; the remaining birds were fed the basal diet containing 150 or 300 mg/kg OEO, respectively. Dietary supplementation with 150 or 300 mg/kg OEO increased average daily feed intake (P = 0.057) and average daily gain (P < 0.05). The activities of glutathione peroxidase and total antioxidative capacity in plasma, jejuna, and ileal mucosa were increased by OEO supplementation (P < 0.05), with a trend of lower jejunal content of malonaldehyde (P = 0.062). Moreover, dietary OEO increased the content of secretory immunoglobulin A (P = 0.078) and the relative expression of Claudin 1, Mucin 2, and Avain beta-defensin 1 in ileum (P < 0.05). Sequencing data of 16S rRNA indicated that dietary OEO increased the relative abundance of Firmicutes phylum, and Clostridium and Lactobacillus genera, and decreasing that of Romboutsia. Functional analyses indicated that microbial amino sugar and nucleotide sugar metabolism, replication, and repair systems were higher in OEO groups than those of controls and antibiotic treatment. In conclusion, dietary supplementation with OEO enhanced growth performance, alleviated local oxidative stress in intestine, improved production of natural antibodies, and favorably modulated intestinal microbiota composition.     

Single nucleotide polymorphism in avian uncoupling protein gene is associated with thermoregulation in chicks

Avian uncoupling protein (av-UCP) is a key protein for thermoregulation in poultry. A single nucleotide polymorphism (SNP) in the av-UCP gene has been reported in chickens. The purpose of the current study was to clarify the association between this av-UCP gene mutation and thermoregulation in chickens. Wild and mutant type chicks for the av-UCP gene SNP (g. 1270 of the av-UCP gene exon 3 with C to T substitution and amino acid substitution) were exposed to high ambient temperature. Rectal temperature, radiation temperature on the body surface, and the expression of heat dissipation behavior (wing drooping and panting) during heat exposure were measured. In addition, oxygen consumption rate in the thermoneutral zone in wild and mutant type chicks was measured. Changes in wing temperature during heat exposure in wild-type chicks were lower than those in mutants. The latency of continuous wing drooping during heat exposure in wild-type chicks was shorter than in mutant chicks. It was also found that the SNP in the av-UCP gene caused reduced oxygen consumption. These results suggest that the av-UCP gene mutation affects thermoregulation, especially heat production, in chickens.     

赭曲霉毒素A对肉鸡毒性作用的研究进展

霉菌毒素污染是影响动物饲料安全的重要因素。赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）广泛存在于肉鸡饲料原料中。众多研究表明,OTA对肉鸡具有肾毒性、肝毒性、细胞毒性、遗传毒性、致癌性、致畸性、免疫毒性和肠道毒性等,给肉鸡养殖业带来了巨大的经济损失,也对动物和人类的健康造成威胁。对国内外OTA研究进展进行总结归纳,从诱导机体产生肠毒性、肝毒性、肾毒性和免疫毒性四方面阐述OTA对肉鸡的致毒机制,为深入研究OTA提供参考。     

饲粮高剂量铜对肉鸡生产性能的影响

试验选用６周龄肉用三黄鸡公１２０只,随机分为４个小组,每组２个重复,每个重复１５只。饲粮处理为：１组为对照组,喂实用玉米－豆粕型基础饲粮;２,３和４组饲粮分别为在基础饲粮中添加硫酸铜形成的铜６２．５,１２５和２５０ｍｇ／ｋｇ。试验期４２ｄ。结果表明：试验最初２同效果显著,与对照组比较,２,３和４组鸡体增重分别提高３．５８％（ｐ〉０．０５）,１１．７％（ｐ〈０．０５）和１６．１６％（ｐ〈０．０１）,     

科新903蛋鸡父母代羽速自别雌雄的培育

根据羽毛伴性遗传的理论,在科新903褐壳蛋鸡配套系选育过程中,为了培育父母代鸡在初生雏时,根据主翼羽和覆主翼羽生长的相对长度自别雌雄,将父本父系A 系和母本父系C 系培育成纯合快羽基因型纯系,将父本母系B 系和母本母系D 系培育成纯合慢羽基因型纯系。用A 系公鸡与B 系母鸡交配,用C 系公鸡与D 系母鸡交配,产生的子一代即父母代,可根据快慢羽自别雌雄,快羽为母鸡,慢羽为公鸡。纯系繁殖羽速类型的准确率达99%以上。生产父母代羽速鉴别雌雄的准确率达98%以上。鉴别速度快,准确率高,不损伤鸡体,效果好。     

珍禽贵妃鸡与隐性白羽鸡杂交后代的生长性状及肉质品质研究

[目的]获得抗病力强、肉质好、生长速度快的贵妃鸡.[方法]以隐性白羽鸡为母本、贵妃鸡为父本进行杂交,选育杂交后代后再以回交方法固定目标性状的方法培育至杂交F3代,并比较杂交F3代与贵妃鸡的生长性状(体重、屠宰性状)和肉质品质指标,探讨杂交F3代的生长发育规律.[结果]贵妃鸡与隐性白羽鸡的杂交后代在生长速度上有明显优于贵妃鸡的特点,同时保持着贵妃鸡肉质优的特点.[结论]该研究对广东省肉鸡品种结构和生产结构的调整具有重要意义.     

虫草菌粉对雏鸡免疫功能的影响

为探讨虫草菌粉对雏鸡免疫功能的影响,以240羽健康余干乌鸡作为研究对象,鸡新城疫苗常规免疫,在饲粮中添加不同剂量虫草菌粉,同时设空白对照组。各组在饲喂虫草菌粉第10、20、30天时随机选择20羽,先采血检测免疫细胞活性、新城疫(NDV)抗体滴度;再处死称取法氏囊与脾脏的质量。通过研究法氏囊与脾脏质量变化、E-玫瑰花环率、淋巴细胞转化率、新城疫抗体滴度等指标来了解虫草菌粉对雏鸡免疫功能的影响。结果表明:虫草菌粉能够加快雏鸡免疫器官的发育,提高T淋巴细胞活性;在饲喂虫草菌粉20 d时中剂量组比对照组抗体水平提高1∶22.1,高剂量组比对照组提高1∶22.53,使特异性抗体提前达到高水平。说明虫草菌粉能够增强雏鸡免疫功能。