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1.
为了研究绵羊Musclin对糖代谢和胰岛素作用的影响,本试验运用生物信息学软件对其结构特征进行预测,并构建绵羊Musclin基因真核表达载体。分4组对绵羊胎儿成肌细胞进行处理:空载体组(pcDNA3.1)、Musclin过表达组(pcDNA3.1-Musclin)、空载体+胰岛素组(pcDNA3.1+Insulin)、Musclin过表达+胰岛素组(pcDNA3.1-Musclin+Insulin)。然后分别在分化48和72 h时收集细胞,检测Musclin对正常或添加胰岛素培养的分化状态绵羊肌细胞糖代谢的影响,并利用荧光定量PCR检测相关基因表达的变化。酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了表达载体pcDNA3.1-Musclin。生物信息学分析表明,绵羊Musclin蛋白含有一个信号肽,并在28氨基酸位点处存在一个酶切位点。亚细胞定位在胞外,属于分泌蛋白。其二级和三级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。细胞试验表明,绵羊Musclin基因过表达明显减少了正常或胰岛素处理的绵羊肌细胞糖原含量并增加了培养液中葡萄糖含量。诱导分化72 h时,过表达Musclin抑制了Musclin过表达组和Musclin过表达+胰岛素组绵羊肌细胞中IRS1、AKT1、AKT2、GLUT1、GLUT4基因mRNA表达,并促进了GSK3β mRNA表达;而诱导分化48 h时,只有GLUT4基因的表达受到抑制。综上所述,绵羊Musclin基因过表达可以影响肌细胞糖代谢并减弱胰岛素的作用,二者相互协调以维持糖代谢稳态。其作用机制涉及到上述相关基因的表达变化,且与绵羊成肌细胞的分化状态有关。  相似文献   
2.
[目的]对牛Musclin基因片段进行克隆与序列分析。[方法]通过电子克隆技术克隆牛Musclin基因,并通过软件分析牛Musclin基因与小鼠、大鼠、人、猪和鸡的同源性。[结果]通过电子克隆技术成功克隆了牛Musclin基因;分析结果表明,牛Musclin基因与小鼠、大鼠、人、猪和鸡同源性分别为81.0%、80.8%、90.0%、89.1%和62.4%,预测的氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域,并将克隆的牛Musclin基因片段注册GenBank(EF646361)。[结论]该试验为进一步研究Musclin在牛骨骼肌中的生物学功能提供了基础资料。  相似文献   
3.
【研究目的】克隆并分析猪musclin基因;【方法】肌肉组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;【结果】克隆的猪musclin基因片段与人、大鼠、小鼠同源性分别为86%、78%、75%,预测的氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域;【结论】克隆了猪musclin基因片段并注册GenBank(Ac-cession.EF369511)。  相似文献   
4.
基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了鸡Muslin基因。肌肉组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;克隆的Musclin基因与人、大鼠、小鼠同源性分别为74%,73%,70%,推测的氨基酸序列同源性分别为58%,54%,50%,氨基酸序列含有"KKKR"结构和与小鼠ANP,BNP,CNP蛋白的同源性区域。试验成功克隆了鸡Musclin基因并注册GenBank(EF551041)。  相似文献   
5.
为探讨维生素C(Vc)调控Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因的转录表达规律,用RT-PCR方法研究小鼠Musclin基因及生脂基因(FAS、PPARγ、TGH)表达水平的变化。结果表明,Cd对小鼠Musclin基因及生脂基因的表达具有显著抑制作用(P0.05),Vc+Cd组与只加Cd组比较,小鼠Musclin基因及生脂基因的表达水平明显升高,Musclin与FASmRNA表达存在显著负相关(P0.01),与PPARγ基因存在显著正相关(P0.05),与TGH基因相关性不显著(P0.05)。研究结果说明,Vc可提高Cd中毒小鼠骨骼肌中的Musclin基因及生脂基因的表达水平。  相似文献   
6.
【研究目的】克隆并分析猪musclin基因;【方法】肌肉组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E. coli DH5α,检测阳性克隆并测序;【结果】克隆的猪musclin基因片段与人、大鼠、小鼠同源性分别为86%、78%、75%,预测的氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域;【结论】克隆了猪musclin基因片段并注册GenBank (Accession.EF369511)。  相似文献   
7.
试验旨在研究日粮蛋氨酸水平大骨鸡腿肌和胸肌SLC12A5、Musclin mRNA表达量的影响。选择240只16周龄公鸡,随机分为3组,每组10个重复,每个重复8只。H组、M组和L组日粮中蛋氨酸(Met)水平分别为0.42%、0.34%、0.25%,其中M组为对照组。试验期8 w。结果显示,H组各周龄公鸡血清Met含量均极显著低于M组(P<0.01);各周龄L组公鸡腿肌Musclin mRNA表达量均极显著高于H组(P<0.01);第16 w,H组、L组公鸡胸肌Musclin mRNA表达量极显著均低于M组(P<0.01),H组显著高于L组(P<0.05);第16 w,L组公鸡腿肌SLC12A5 mRNA表达量极显著高于H组(P<0.01),L组显著低于M组(P<0.05);第24 w,H组胸肌SLC12A5 mRNA表达量显著低于其他两组(P<0.05)。研究表明,日粮Met水平能够影响血清Met含量和胸肌和腿肌的蛋白质合成;但SLC12A5基因表达量与Met水平不呈剂量-效应关系。  相似文献   
8.
【目的】克隆猪Musclin基因,分析和预测其编码蛋白的结构与功能。【方法】从猪肌肉组织中提取总RNA,RT-PCR扩增获得Musclin基因,对其进行克隆和测序,并根据生物信息学分析方法,利用Tmpred、SignalP3.0、TargetP 1.1等分析软件,对猪Musclin蛋白的跨膜结构、信号肽、细胞定位、结构特征等进行分析和预测。【结果】猪Musclin蛋白主要集中在分泌途径上,存在于细胞外,其核苷酸序列与家兔的具有较高的相似性,氨基酸序列32~45位和55~63位存在2个可能的强跨膜螺旋区,该蛋白的空间结构以α螺旋、β转角和无规则卷曲为主;其1~26位氨基酸序列是一段信号肽,在26与27位氨基酸之间存在1个酶切位点;其羧基端含有较多的转角结构,同时该区域的抗原指数较高,亲水性指数和呈现在蛋白表面的可能性均较大。【结论】Musclin是一种含有信号肽序列的跨膜蛋白。  相似文献   
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