浒苔中MnSOD和CAT基因克隆和表达分析

实验以大型绿藻浒苔为材料,克隆了其抗氧化系统关键酶锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)基因的部分片段,利用荧光定量PCR技术研究了Mn SOD和CAT对温度和水杨酸作用的响应规律。结果获得浒苔318 bp的Mn SOD基因,该Mn SOD推测的氨基酸序列与裂片石莼Mn SOD相似性最高为89%;获得了229 bp的CAT基因,该浒苔CAT编码氨基酸序列与裂片石莼和雨生红球藻CAT序列相似性分别为99%和93%。在利用M n SOD和CAT氨基酸序列构建的系统树中,浒苔均先与裂片石莼聚类,再与其他绿藻聚在一起。不同温度对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响表明,35℃高温培养对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响最显著,其表达量分别为25℃培养的2.18倍和2.05倍;5℃低温培养次之;而15℃与25℃培养对M n SOD和CAT基因表达影响差异不显著(P0.05)。在高温35℃下,添加0.1 mmol/L水杨酸后Mn SOD和CAT基因表达量分别为各自对照的2.08倍和5.30倍,而0.01 mmol/L水杨酸添加后基因表达与对照差异不显著(P0.05)。研究表明,Mn SOD和CAT基因表达的增强不仅是浒苔对高温胁迫的响应,而且也是水杨酸缓解高温对浒苔不利影响的方式之一。     

柽柳MnSOD基因

在环境胁迫下,植物体内活性氧(ROS)的大量积累会对其本身产生毒害作用。SOD酶在清除这些活性氧化酶机制中发挥关键作用。大量研究表明,MnSOD可有效增强转基因植物抵抗氧化胁迫的能力。我们从抗逆性较强的木本植物紫杆柽柳中克隆到一个新的MnSOD基因,并将该全长基因在GenBank上注册,其登录号分别为AY573576(基因序列)和AAS77885(氨基酸序列)。这将为研究木本植物的抗逆机理和该酶在抗逆基因工程中的应用奠定基础。     

毛白杨PtoMnSOD基因克隆及生物信息学分析

为了揭示毛白杨锰超氧化物歧化酶基因PtoMnSOD在植物抗逆中的功能。本研究通过RT-PCR方法获取毛白杨PtoMnSOD基因序列,并对该基因及其编码蛋白进行生物信息学分析。结果显示:PtoMnSOD基因开放阅读框(ORF)为699 bp,编码232个氨基酸,具有PF00081和PF02777两个保守结构域,属于MnSOD亚家族。其编码的蛋白含有20个磷酸化位点,是无跨膜结构、无信号肽且定位于线粒体的不稳定亲水性蛋白。同源序列比对显示,不同物种的MnSOD氨基酸序列具有很强的保守性。研究结果为进一步开展毛白杨锰超氧化物歧化酶基因PtoMnSOD的功能研究奠定了理论基础。     

饲粮中锰水平对育成期蛋鸭血液生化指标和血清MnSOD活性的影响

试验研究饲粮中不同锰水平对育成期蛋鸭血液生化指标和血清MnSOD(含锰超氧化物歧化酶)活性的影响。试验以玉米-豆粕型饲粮为基础饲粮,锰的添加水平为0、30、60、90、120、1000mg/kg,综合试验结果表明,育成期蛋鸭饲粮中锰的适宜添加水平为90mg/kg。     

刺参不同组织中MnSOD基因在脂多糖刺激下的定量表达分析

刺参由于其重要的经济价值和药用价值，已经成为我国海水养殖的重要种类。MnSOD对于增强吞噬细胞防御能力和整个机体的免疫功能具有重要作用，与生物体抵御病毒细菌等能力密切相关。通过研究在脂多糖刺激下MnSOD基因的定量表达情况，分析MnSOD在刺参免疫系统中的作用。结果显示：MnSOD基因的表达量由肠、肌肉到管足逐渐降低，体壁的表达量与体腔液基本一致。当刺参暴露于脂多糖中时，除肠以外其他的四种组织中MnSOD基因均出现过表达。其中，体腔液和体壁组织中MnSOD基因的表达量于12 h达到峰值；肌肉和管足中MnSOD基因的表达量于48 h达到峰值；体腔液中MnSOD基因的表达量于12 h达到对照组的4 115倍，而肠组织中MnSOD基因的表达量在48 h的实验过程中呈波动性降低。总体上来说，在脂多糖刺激下刺参各组织中MnSOD基因的表达量呈规律性波动。实验结果表明：在脂多糖刺激下刺参个体会产生强烈的抗氧化反应以保护刺参免受病原微生物的感染。     

仿刺参超氧化物歧化酶基因cDNA全序列的克隆及其特征分析

以仿刺参Apostichopus japonicus为材料,利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法首次得到仿刺参MnSOD的全长cDNA。该全长cDNA大小为955bp,其中5′端非编码区67bp,3′端非编码区216bp,开放阅读框(ORF)672bp,在3′端有多聚腺苷酸信号序列ATTTA,并有polyA加尾,符合有效翻译的基因全长cDNA的特征。MnSOD全长cDNA可编码223个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子质量为24.64kD,理论等电点是6.66,为亲水性蛋白。该蛋白序列没有信号肽和跨膜结构,仅有一段线粒体导肽。其二级结构主要以α-螺旋为主,无规则卷曲和延伸链构成了蛋白中量最大的结构元件,不含β-折叠。仿刺参SOD的氨基酸序列与目前已报道的其他物种如人、牛、斑马鱼、原鸡、非洲爪蟾、中国对虾、皱纹盘鲍、海湾扇贝、果蝇等的MnSOD氨基酸序列进行序列比对的结果表明,相似性均在61%～69%之间,说明该基因在各物种间具有一定的保守性。该段氨基酸序列无N-糖基化位点,含有3个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,5个肉豆蔻酰基化位点,还发现了1个SOD家族的特征肽段DVWEHAYY。对磷...     

乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达检测及其临床意义的研究

目的探讨锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,MnSOD）在乳腺癌患者和正常人外周血中的表达差异及其临床意义.方法采用实时荧光定量PCR方法检测218例乳腺癌患者和77例正常女性外周血中MnSOD基因表达水平,并进行分析.结果乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平为4.38±0.74,正常女性外周血中MnSOD基因表达水平为4.16±0.64,P〈0.001,有统计学意义.淋巴转移患者组和临床早期患者组与正常女性组比较,P〈0.001.结论淋巴转移和临床早期乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平显著低于正常女性,提示MnSOD的低表达与肿瘤的发生和发展有关.应用荧光定量PCR方法检测外周血MnSOD基因水平对监测乳腺癌有一定意义.     

实用饲粮锰缺乏对肉仔鸡组织含锰超氧化歧化酶活性及其线粒体超微结构的影响

用1日龄Arbir Acres雏鸡64只(1/2,1/2♀),分成2组,分别喂以含锰(Mn)17ppm的缺Mn玉米-豆饼基础饲粮和含Mn137ppm的补Mn(试剂级MnSO_4·H_2O)饲粮28天。结果表明,实用饲粮Mn缺乏促使肝和心的Mn含量降低(P<0.01),心脏含Mn超氧化歧化酶(MnSOD)活性降低约26％(P<0.01),而对肝MnSOD无影响(P>0.05)。Nn缺乏导致心和肝线粒体超微结构异常,包括心线粒体萎缩退化、“分裂”趋势、肝线粒体的“融合”趋势、心肝线粒体的脊排列不规则和有的外膜丢失,且心和肝粗面内质网均明显扩张。Mn缺乏使鸡腿病发生率增加,血浆谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性和尿酸含量升高(P<0.01),肌酸磷酸激酶(CPK)活性虽有增加趋势,但不显著(P<0.05)。鸡的生长性能无显著变化(P>0.05)。     

肉仔鸡锰营养需要量研究进展

本文综述了肉仔鸡锰(Mn)营养需要量的研究进展。其内容包括:主要研究方法、研究结果、影响因素和存在问题及展望。     

锰对肉仔鸡血清锰超氧化物歧化酶活性及生长性能的影响

选用健康的1日龄艾维茵肉仔鸡144只,随机分成6个处理组,每个处理组3个重复,每个重复8只鸡,饲养6周。分别在基础日粮中添加不同水平的锰,研究其对肉仔鸡血清MnSOD活性及其生长性能的影响,结果表明血清中MnSOD活性可以作为判定锰不足或过量的特异性敏感指标。锰缺乏或过量对肉仔鸡的生长均有不良影响。在本试验条件下玉米-豆粕型肉仔鸡饲粮中锰的最适添加量为80mg·kg-1。