L-茶氨酸对产肠毒素大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肠道的保护作用研究

以SPF级Balb/c雌性小鼠为实验动物,对其适应性饲养3 d后连续30 d灌喂不同剂量L-茶氨酸,然后腹腔注射产肠毒素大肠杆菌E44813诱导免疫应激,5 h后取样,分析研究了L-茶氨酸对小鼠体重,回肠组织谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(Homogenate catalase,CAT)与诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)活性,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、空肠组织病理学变化,以及血清肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间粘附分子1(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和白介素1β(Interleukin-1β,IL~(-1)β)表达量的影响,以探明L-茶氨酸对产肠毒素大肠杆菌免疫应激小鼠肠道的保护作用。结果表明,各剂量L-茶氨酸均能显著增加小鼠体重,可减轻产肠毒素大肠杆菌E44813引起的肠道组织病变程度,升高回肠组织GSH-Px和CAT酶活性,降低MDA含量和i NOS酶活性,在不同程度上抑制血清TNF-α、IL~(-1)β和ICAM-1的表达量。说明L-茶氨酸可通过抑制炎性细胞因子表达水平、降低脂质过氧化程度和提高抗氧化能力来维护肠道组织形态与结构的完整性,并达到保护肠道的作用。     

Effects of Tea Polyphenol and L-theanine on Growth Performance and Antioxidant Performance of Egg-laying Chickens under Heat Stress

In order to investigate the effects of tea polyphenols (TP) and L-theanine on growth performance and antioxidant performance of egg-laying chickens under heat stress,single factor design was adopted.180 one-day old chickens were randomly assigned to six groups for three replicates (10 chicks for each). Group 1 was the control group,was fed on a basal diet;groups 2 to 6 were the treatment groups,were fed with 400 mg/kg TP, 200 mg/kg L-theanine, 200 mg/kg TP and 200 mg/kg L-theanine,400 mg/kg TP and 200 mg/kg L-theanine, 600 mg/kg TP and 200 mg/kg L-theanine in the basal diet. The trial period was 28 d. The results indicated that TP could decrease feed gain significantly (P<0.05),L-theanine added alone or combined with TP had no significant effects on growth performance (P>0.05). TP could decrease the tissues and organs's content of MDA significantly (P<0.05),and enhance the activities of GSH-Px and CAT significantly (P<0.05).L-theanine could improve the activity of CAT significantly (P<0.05),and decreased the tissues and organs's content of MDA in different degrees.TP combined with L-theanine, the antioxidant performance was out of step with the addition of TP. When 400 mg/kg TP and 200 mg/kg L-theanine were added,the T-SOD and GSH-Px activities of liver significantly decreased (P<0.05),the MDA content increased significantly (P<0.05). Under heat stress,the addition of 200 mg/kg TP and 200 mg/kg L-theanine is the most appropriate antioxidant effect.     

酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化

将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用本实验室筛选的有较高氨基酰化酶活性的真菌刺孢小克银汉霉9980(Cunnighamella echinulata 9980)对DL-茶氨酸进行拆分并对拆分条件进行摸索。结果表明:反应最适温度50℃,最适pH7.0,底物浓度0.5mol/L,湿菌体量4g/100ml,拆分时间30h,拆分率可达92%。产物经JK008阳离子交换树脂氨性柱分离,L-茶氨酸收率84.3%,[α]2D5=8.1(c=2,H2O),符合JP2000药典。     

L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能和免疫功能的影响

本试验旨在探讨L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能和免疫功能的影响。选用1日龄黄羽肉鸡690只,随机分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复23只。6个处理分别为对照组(饲喂无抗生素基础饲粮)、抗生素组[饲喂在基础饲粮中添加10%硫酸黏杆菌素的饲粮,前期(1～3周)添加200 mg/kg,后期(4～7周)添加150 mg/kg]、4个不同梯度(100、200、400和800mg/kg)L-茶氨酸试验组,试验期为49 d。试验检测了黄羽肉鸡的生产性能、免疫器官指数、肠道分泌性免疫球蛋白A(sIgA)含量及血清溶菌酶活性、抗体水平和免疫细胞因子含量等指标。结果表明:在试验前期,100 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡的体增重显著低于其他各组(P<0.05),100、200和800 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡的法氏囊指数显著低于对照组(P<0.05),各L-茶氨酸组黄羽肉鸡的肠道sIgA含量和血清干扰素-γ(IFN-γ)含量显著高于对照组(P<0.05)。在试验后期,与对照组及抗生素组比较,L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官指数、肠道sIgA的含量影响不显著(P>0.05);100、200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清白细胞介素-2(IL-2)的含量显著高于对照组(P<0.05),200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清IFN-γ的含量显著高于对照组(P<0.05)。在整个试验期,各组黄羽肉鸡血清溶菌酶的活性和白细胞介素-4的含量差异不显著(P>0.05);一免后第6天,100和200 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清新城疫抗体滴度显著低于对照组和抗生素组(P<0.05),一免后第14天,100、200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡抗牛血清白蛋白(BSA)抗体水平显著高于对照组(P<0.05),其他各阶段各组间的抗BSA抗体水平和新城疫抗体滴度均差异不显著(P>0.05)。由此可知,饲粮添加L-茶氨酸对黄羽肉鸡生长后期生产性能、免疫器官指数均无显著影响,说明其对黄羽肉鸡后期生长是安全的;同时L-茶氨酸可提高黄羽肉鸡生长前期肠道sIgA的含量、后期血清IL-2的含量及全期血清IFN-γ的含量,从而增强其机体免疫功能。     

L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肝脏的保护作用研究

以SPF级Balb/c雌性小鼠为实验动物,对其适应性饲养3 d后连续30 d灌喂不同剂量L-茶氨酸,然后腹腔注射产肠毒性大肠杆菌E44813诱导免疫应激,5 h后取样,分析研究了各组小鼠肝脏与脾脏系数,血清谷丙转氨酶(Alanine aminotranferease,ALT)与谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)含量,肝组织匀浆丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性,肝组织病理学变化,以及血清中γ-干扰素(γ-Interferon,IFN-γ)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的表达量,以探明L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌免疫应激小鼠肝脏的保护作用。结果表明,不同剂量的茶氨酸干预处理均能明显降低由大肠杆菌E44813感染引起的肝脏、脾脏系数的升高,降低血清ALT、AST及肝组织匀浆MDA水平,提高肝组织匀浆SOD、CAT、GSH-PX活性,减少IFN-γ、IL-4表达量,改善肝脏组织病理损伤,其中以300 mg·kg-1剂量组效果最好,说明茶氨酸干预对产肠毒性大肠杆菌诱导的免疫应激小鼠肝损伤具有保护作用,而且可能是通过减少IFN-γ与IL-4的表达、降低炎症反应、提高抗氧化能力等途径达到保护肝脏的作用。     

L–茶氨酸调节机体免疫功能机理的研究进展

L–茶氨酸是源自茶叶中的一种特有的非蛋白氨基酸,具有多种生理活性,有益于机体健康,已被广泛用于食品添加剂。综述了L–茶氨酸对机体的免疫调节作用和L–茶氨酸提高机体免疫功能的机理(通过抑制靶细胞甲羟戊酸代谢途径,导致异戊烯焦磷酸酯累积,激活γδT细胞并分泌Th1型细胞因子,以及L–茶氨酸促进体内GSH合成,进而增强免疫细胞抗氧化能力)的研究进展,并对L–茶氨酸相关保健产品的深入开发和相关领域的研究进行了展望。     

L-茶氨酸的生物学功能及其在畜禽生产中的应用

L-茶氨酸是天然存在于茶树中的一种非蛋白氨基酸,属于酰胺类化合物,具有较强的抗氧化、抗应激、抗肿瘤、保护神经、增强机体免疫力等多种作用。目前主要用于食品、保健品和医药领域,而在畜禽生产中的应用研究还较少。已有的研究证明,L-茶氨酸能够提高猪和鸡的生产性能、抗氧化能力和免疫力。本文概述了L-茶氨酸的来源与理化性质、安全性评价和生物学功能,重点综述了其在畜禽生产上的应用研究,旨在为将L-茶氨酸更好地应用于畜禽生产提供理论参考。     

L-茶氨酸改善热应激引起的小鼠组织损伤和氧化逆境

以SPF级Slca/KM雄性小鼠作为实验对象,在恒温恒湿模拟气候箱进行热处理,灌喂干预不同剂量L-茶氨酸,考察L-茶氨酸对小鼠采食量、体重变化、空肠切片病理情况、器官指数、血清谷丙转氨酶(ALT)与谷草转氨酶(AST)活性、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)含量、肝组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性以及肝组织病理学变化的影响,以探讨L-茶氨酸改善热处理引起的小鼠组织损伤和氧化逆境作用。结果表明,L-茶氨酸能在一定程度上促进热处理小鼠采食量和体重的增加,降低肝脏和脾脏器官指数,降低血清ALT、AST酶活性,抑制血清炎症介质TNF-α、IL-6、IFN-γ的含量,降低肝组织MDA含量,提高SOD、GSH-Px、CAT酶活性,减轻热处理对空肠及肝脏组织的损伤,且以L-茶氨酸中剂量处理效果较好。说明L-茶氨酸具有改善热处理引起的小鼠组织损伤和氧化逆境的作用,主要表现为提高小鼠营养物质吸收能力、减少炎性细胞因子表达,以及降低氧化损伤。     

L-茶氨酸对小鼠肠道形态结构及游离氨基酸的影响

将50只KM雄性小鼠按每组10只随机分为正常组、谷氨酰胺组及L-茶氨酸低、中、高剂量组,连续灌喂28βd,探究L-茶氨酸对小鼠肠道形态结构及游离氨基酸的影响。结果表明,与正常组相比,小鼠肠道绒毛高度随L-茶氨酸剂量的增大而增加,各剂量组的十二指肠绒毛高度和中、高剂量组的空肠绒毛高度及其绒毛高度与隐窝深度的比值均达显著水平（P<0.05）,血清游离氨基酸含量及中、高剂量组的尿素氮含量显著降低（P<0.05）,高剂量组的碱性磷酸酶、总蛋白含量显著升高（P<0.05）;L-茶氨酸对不同肠道游离氨基酸含量的影响随剂量的增大而升高,其中,十二指肠中的各茶氨酸剂量组的全部必需氨基酸和大部分非必需氨基酸显著升高（P<0.05）,且高剂量组的必需氨基酸含量显著高于低剂量组（P<0.05）;空肠中的低剂量组的必需氨基酸Thr、Lys、Ile及中、高剂量组的全部必需氨基酸含量显著升高,且中、高剂量组中除Cit外的其他氨基酸含量均显著高于低剂量组（P<0.05）;回肠中的低、中、高剂量组的全部必需氨基酸及大部分非必需氨基酸含量显著降低,且中、高剂量组中除GABA外的其他氨基酸含量显著高于低剂量组（P<0.05）。结果表明,L-茶氨酸可通过增加肠道绒毛高度、提高绒毛高度与隐窝深度比值来改善小鼠肠道形态结构,同时可促进十二指肠、空肠对氨基酸的吸收利用。     

L–茶氨酸对D–半乳糖诱导衰老大鼠肝脏的晚期糖基化终末产物和炎性介质的影响

将30只SD大鼠按体质量随机分为正常组,模型组,L–茶氨酸低剂量(100 mg/kg)、中剂量(200 mg/kg)、高剂量(400mg/kg)组。采用每日皮下注射200mg/kgD–半乳糖生理盐水溶液的方式建立衰老大鼠模型,考察L–茶氨酸对D–半乳糖致衰老大鼠肝脏谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性、晚期糖基化终末产物(AGEs)和炎性介质含量的调节作用。每日分别以生理盐水和低、中、高3个剂量的L–茶氨酸生理盐水溶液对D–半乳糖致衰老大鼠进行干预性处理8周后,检测大鼠的脾脏和胸腺器官指数、肝脏ALT和AST活力、肝脏内AGEs含量及炎性介质的m RNA表达水平和蛋白表达水平。结果显示:L–茶氨酸能提高D–半乳糖致衰老大鼠脾脏指数和胸腺指数,抑制肝脏ALT和AST活力上调,降低AGEs含量,并同时抑制肿瘤坏死因子–α(TNF–α)、肿瘤坏死因子受体–1(TNFR1)、白介素–1β(IL–1β)、白介素–1受体(IL–1R)、白介素6(IL–6)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、细胞间粘附分子–1(ICAM–1)和血管细胞粘附分子–1(VCAM–1)等炎性介质的m RNA水平和蛋白水平,维持肝脏内环境稳定,其中,L–茶氨酸中、高剂量组对D–半乳糖致衰老大鼠肝脏保护作用较好。可见,L–茶氨酸可以通过提高机体免疫力,降低肝脏AGEs和炎性介质水平,维持肝脏内环境稳态,具有干预肝脏炎性衰老的功效。