巴西橡胶树FCA基因的克隆及功能分析

FCA基因是植物自主开花途径中的重要调控基因,已被证实是促进植物开花的保守基因。研究通过巴西橡胶树甲基化文库获得橡胶树HbFCA基因一段434bp的保守cDNA 序列,应用RACE技术,成功克隆得到橡胶树的HbFCA基因。进一步通过构建HbFCA真核过表达载体pXCS-HbFCA-HAStrep,并转化拟南芥发现,转基因植株35d后已经抽薹开花,野生型对照未开花,HbFCA的过表达能显著促进拟南芥开花。     

橡胶树HbFCA启动子在转基因烟草中的功能缺失分析

利用5′缺失设计一系列引物,扩增HbFCA启动子质粒,获得5个启动子缺失片段,用这些片段分别替换PBI121载体中的CaMV35S启动子,得到5个HbFCA的5′缺失表达载体,即pA、pB、pC、pD和pE。利用农杆菌介导叶盘法进行烟草遗传转化,对组培瓶内生根较好的烟草叶片GUS染色,结果发现,长度为最小片段的276 bp的pE可以较好地实现HbFCA启动子的功能。对橡胶树体细胞胚瞬时表达检测发现,pE片段也能启动表达,有较好的GUS活性,可以实现HbFCA启动子的功能。