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1.
超声波辅助农杆菌介导法转化鱼腥草的初步研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依次为47%、60%、80%和75%。结论:用恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s两种转化法gus基因的瞬时表达率最高,说明超声波辅助农杆菌介导遗传转化方法是一种高效的鱼腥草转基因方法,它实现了外源基因在植物中的高效表达。  相似文献
2.
农杆菌介导法将LFY基因导入苹果的研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
以M26苹果叶片为外植体,利用GUS瞬时表达率,对农杆菌介导法转化苹果的因素进行优化,通过含LFY基因的根癌农杆菌EHA105转化苹果叶片,获得了提早开花的转基因植株。结果表明:以OD600=0.3~0.5农杆菌菌液侵染叶片,25℃条件下共培养,共培养后的叶片延迟筛选3 d,在附加卡那霉素30 mg/L的再生培养基中选择培养,转化芽再生率可达6.97%。PCR检测初步证明目的LFY基因已整合到苹果基因组中。  相似文献
3.
根癌农杆菌介导的悬铃木叶片遗传转化体系研究   总被引:6,自引:1,他引:5  
以葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因瞬时表达率为指标,研究了不同因子对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的悬铃木叶片遗传转化系统的影响.结果表明,预培养9 d的悬铃木叶片在OD600值为0.7的根癌农杆菌菌液中浸染10 min后,再在含有100μmol.L-1的乙酰丁香酮的共培养培养基上黑暗条件下共培养3 d叶片的遗传转化效率最高.该体系为进行农杆菌介导目的基因培养悬铃木新品种奠定了基础.  相似文献
4.
大豆种子特异性启动子的克隆及功能分析   总被引:4,自引:0,他引:4       下载免费PDF全文
【目的】从大豆中克隆得到β-伴球蛋白α亚基基因的启动子序列7αP,并对其进行功能分析。【方法】利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离β-伴球蛋白α亚基基因启动子序列7αP,将其与GUS基因融合,构建种子特异性表达载体p7αP-GUS,通过根癌农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89,对再生植株进行PCR、Southern blot检测和GUS组织化学分析。【结果】序列分析表明,7αP长度为1 382 bp,其中含有多种种子特异性启动子的序列元件,如RY重复序列元件、E-box、SEF1-motif、SEF4-motif(、CA)n、Dc3启动子结合因子和ACGT序列元件及一些诱导物应答元件。转基因植株的PCR和Southern blot结果显示,成功地获得了转基因阳性植株;GUS活性检测表明,仅能在种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶等其他组织中均未检测到GUS活性。【结论】大豆β-伴球蛋白α亚基基因上游1 382 bp片段具有种子特异性启动子功能,7αP为种子特异性启动子。  相似文献
5.
百合花特异启动子PchsA表达载体的构建及功能分析   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
【目的】分析从百合中克隆获得的查耳酮合成酶基因(chsA)启动子的组织表达特性。【方法】将chsA启动子片段插入到双元表达载体pCAMBIA 1381中,成功构建了植物表达载体pCAMBIA-CHS,通过根癌农杆菌EHA 105转化拟南芥,用50 mg/L潮霉素对转化植株进行筛选,对阳性植株进行PCR检测和GUS组织化学分析。【结果】PCR检测表明,chsA启动子片段已经整合到拟南芥基因组中,GUS组织化学分析显示,在拟南芥花序中有很强的GUS活性,叶腋处有微量表达,其他组织中不表达。【结论】初步证明百合chsA启动子为花特异表达启动子。  相似文献
6.
以基因枪法转化日本结缕草获得转基因植株   总被引:3,自引:0,他引:3  
将含有DREB1A和gus基因的双基因载体质粒包裹在金粉上,以基因枪轰击日本结缕草胚性愈伤组织,以gus基因的瞬时表达研究日本结缕草基因枪转化参数.结果表明,在1 100 psi压力下6 cm的轰击距离、每皿轰击2次的转化效果最好,而金粉和质粒用量对转化效率影响不显著;经过筛选和再生培养,检测到gus基因的稳定表达,并获得日本结缕草潮霉素抗性株系,PCR-Southern杂交证实外源DREB1A基因已整合到日本结缕草基因组中.  相似文献
7.
黑花生再生体系和遗传转化的初步研究   总被引:2,自引:1,他引:1  
以黑花生品种黑霸920成熟种胚、幼叶和胚轴为外植体,对黑花生植株再生和遗传转化进行了研究。通过设置一系列不同浓度激素配比的培养基来优化各阶段培养条件,初步建立了高效的黑花生再生体系,即花生种子经75%乙醇表面消毒15min,MS+6-BA2.0mg/L为最优化的种子萌发培养基,MS+2,4-D2.0mg/L为最佳诱导愈伤培养基,幼叶为最佳诱导愈伤组织的外植体,MS+6-BA8mg/L+NAA0.5mg/L+AgNO3 1mg/L为最佳分化培养基,MS+NAA2.0mg/L+6-BA0.2mg/L+活性炭200mg/L为最佳生根培养基。同时确定了愈伤组织和幼苗的卡那霉素筛选压分别为30mg/L和300mg/L。利用农杆菌介导法将含有GUS基因和NPTⅡ基因的植物表达栽体pBI121导入花生组织,在对愈伤组织、幼叶和胚轴的GUS表达检测中均有蓝色斑块出现,证明GUS基因已成功转入到花生细胞中。  相似文献
8.
根癌农杆菌介导获得转基因西瓜植株   总被引:2,自引:0,他引:2  
利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。  相似文献
9.
农杆菌介导多年生黑麦草转化体系的建立   总被引:1,自引:1,他引:3       下载免费PDF全文
以胚性愈伤组织系,作为转化受体,利用农杆菌介导的遗传转化方法,将报告基因gus和抗除草剂基因bar 成功转入多年生黑麦草。共计获得52株T0代抗性植株。利用PCR方法对转基因植株的bar基因进行扩增, 确定阳性株系27株。对阳性植株叶片进行GUS染色,有15株叶片呈现较强的蓝色。对再生植株和野生型 植株叶片喷施5‰的除草剂Basta溶液,GUS阳性的植株全部表现为Basta抗性。以上结果表明,以黑麦草 成熟胚胚性愈伤组织为受体,通过优化农杆菌介导的黑麦草遗传转化体系,初步建立了多年生黑麦草的 转基因平台,这对黑麦草的遗传改良具有重要的意义。  相似文献
10.
 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)是位于苯丙烷类共同代谢途径中类黄酮、木质素以及肉桂酸酯等分支代谢途径交叉点上的关键酶,对整个代谢过程起着重要的调控作用。4CL基因的表达可被真菌侵染,紫外辐射,机械损伤等外界刺激所诱导。笔者将水稻R4CL-1基因启动子与GUS基因融合导入烟草基因组中,并在紫外诱导下对转基因植株进行了β-Glucuronidase活性的组织化学染色分析。在转基因烟草植株幼叶的叶脉及其周围细胞、幼根的根尖细胞及维管组织、成熟花的花瓣及柱头、未成熟种子的表皮细胞和成熟种子的胚中都检测到了GUS活性,而在完全伸展的老叶、茎(幼茎和成熟茎)、老根和花的其它组织中均没有观察到GUS酶活性,从而证明了R4CL-1启动子能在植物发育过程中指导GUS报告基因的组织特异性表达。  相似文献
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